本发明涉及体外诊断领域，特别是涉及一种使用循环酶法的二氧化碳试剂盒。
背景技术：
二氧化碳总量(t-co2)是指血浆中各种形式的co2总和，包括hco3-(95％)、少量物理溶解的co2及极少量的其他形式存在的co2。因此在体内受呼吸和代谢两个因素的影响，主要是代谢因素的影响。t-co2可以用酶法、电极法、滴定法或量积法等。其中酶法测定t-co2，试剂打开使用后易吸收空气中的二氧化碳导致试剂中的nadh类物质被氧化失效，电极法一般与电解质分析仪组合在一起，co2电极膜需定期更换。酶法中均使用nadh类物质作为反应标定物，由于空气中二氧化碳的存在易致使二氧化碳测定试剂盒缺乏稳定性，保存时间短，直接影响临床使用。
目前关于二氧化碳测定试剂nadh类似物循环再生系统的报道非常有限。专利cn2653492y提供了一种二氧化碳结合力测定器；使用的测试方法为量积法，未对适用于生化分析仪的试剂盒的稳定性进行改进；专利cn200610097207.0提供了一种二氧化碳试剂盒的制备方法，但未作nadh类似物循环再生的相关讨论，在实际应用中试剂盒的稳定性较差；cn103698500b提供一种增强二氧化碳检测试剂稳定性的方法，但主要采取的手段为加入油性物质及表面活性剂以减少试剂与空气中二氧化碳的接触，但引入的油性物质可能对生化分析仪的各机械模块有其他影响，且未对试剂盒的nadh稳定性进行改良；专利cn103558370a作了一些关于还原性物质的循环再生的讨论，但未涉及循环再生时的供能物质，未能有效保证试剂试剂使用中的稳定性要求。因此，研究一种配制简单、成本低廉、针对二氧化碳测定试剂盒有稳定效果的nadh类似物循环再生系统，具有相当的市场价值。
技术实现要素：
本发明的目的在于公开一种使用循环酶法的二氧化碳试剂盒。
本发明所采取的技术方案是：
一种使用循环酶法的二氧化碳试剂盒，试剂盒由nadh类似物循环再生系统和二氧化碳测定试剂组成。
优选的，试剂盒中nadh类似物循环再生系统由6-磷酸-葡萄糖脱氢酶、己糖激酶、葡萄糖、腺嘌呤核苷三磷酸二钠盐组成。
优选的，试剂盒中nadh类似物循环再生系统由6-磷酸-葡萄糖脱氢酶5-50u/l、己糖激酶50-500u/l、葡萄糖1-5g/l、腺嘌呤核苷三磷酸二钠盐0.5-2.5g/l组成。
优选的，试剂盒中nadh类似物循环再生系统由6-磷酸-葡萄糖脱氢酶20u/l、己糖激酶200u/l、葡萄糖2g/l、腺嘌呤核苷三磷酸二钠盐1g/l组成。
优选的，试剂盒中二氧化碳测定试剂由trisbase、盐酸、稳定剂、醋酸镁、草氨酸钠、磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶、磷酸烯醇式丙酮酸钾、apadh、苹果酸脱氢酶、乙二胺四乙酸二钠、proclin300组成。
优选的，稳定剂为明胶、三梨醇、丙三醇、乙二醇、牛血清白蛋白中的至少一种。
优选的，试剂盒中二氧化碳测定试剂由trisbase6g/l、盐酸1.8g/l、稳定剂1g/l、醋酸镁1g/l、草氨酸钠0.3g/l、磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶0.1g/l、磷酸烯醇式丙酮酸钾0.6g/l、apadh0.5g/l、苹果酸脱氢酶0.05g/l、乙二胺四乙酸二钠1g/l、proclin3001g/l组成。
本发明的有益效果是：该二氧化碳测定试剂盒配制简单、成本低廉，其中含有的nadh类似物循环再生系统能延长试剂盒的保存时间，有效提高测试稳定性、准确性、精密度。
具体实施方式
实施例1
由下述组分组成nadh类似物循环再生系统：6-磷酸-葡萄糖脱氢酶20u/l、己糖激酶200u/l、葡萄糖2g/l、腺嘌呤核苷三磷酸二钠盐1g/l。
将上述各组分充分溶解、混合于原二氧化碳测定试剂盒中。原二氧化碳测定试剂盒，由液体单试剂组成：trisbase6g/l、盐酸1.8g/l、稳定剂1g/l、醋酸镁1g/l、草氨酸钠0.3g/l、磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶0.1g/l、磷酸烯醇式丙酮酸钾0.6g/l、apadh0.5g/l、苹果酸脱氢酶0.05g/l、乙二胺四乙酸二钠1g/l、proclin3001g/l。其中，稳定剂为明胶、三梨醇、丙三醇、乙二醇、牛血清白蛋白中的至少一种。
以英国朗道常规生化质控水平2(质控2)和常规生化质控水平3(质控3)为样本，标准品为英国朗道常规生化校准水平2，采用日立7020型全自动生化分析仪进行检测，设一个空白测试、两个样本测试(空白测试以生理盐水代替样本)。样本与试剂的比例为2μl：200μl，设定的主波长为405nm、副波长为700nm，样本与试剂1混匀后，37℃孵育2min后，读取并计算120秒吸光度变化率λ/min，扣除试剂空白后计算出样本、标准品的吸光度变化率λ/min，然后根自动计算出样本中二氧化碳含量。质控2中二氧化碳靶值为12.9mmol/l，质控3中二氧化碳的靶值为16.4mmol/l，允许偏差范围在±20％。
根据以上测定方法，以同批次同瓶装的质控2、质控3作为检测样本，分别用添加nadh类似物循环再生系统的二氧化碳测定试剂盒和不添加nadh类似物循环再生系统的二氧化碳测定试剂盒进行稳定性追踪检测，得到自配试剂与对照试剂的开瓶稳定性、37℃加速稳定性、长期稳定性试验结果。
与对照试剂稳定性性能指标对照结果(表1)
实施例2
由下述组分组成nadh类似物循环再生系统：6-磷酸-葡萄糖脱氢酶5u/l、己糖激酶50u/l、葡萄糖1g/l、腺嘌呤核苷三磷酸二钠盐0.5g/l。
将上述各组分充分溶解、混合于原二氧化碳测定试剂盒中。原二氧化碳测定试剂盒，由液体单试剂组成：trisbase6g/l、盐酸1.8g/l、稳定剂、醋酸镁1g/l、草氨酸钠0.3g/l、磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶0.1g/l、磷酸烯醇式丙酮酸钾0.6g/l、apadh0.5g/l、苹果酸脱氢酶0.05g/l、乙二胺四乙酸二钠1g/l、proclin3001g/l。
按照实施例1的方法进行检测。
与对照试剂稳定性性能指标对照结果(表2)
实施例3
由下述组分组成nadh类似物循环再生系统：6-磷酸-葡萄糖脱氢酶50u/l、己糖激酶500u/l、葡萄糖5g/l、腺嘌呤核苷三磷酸二钠盐2.5g/l。
将上述各组分充分溶解、混合于原二氧化碳测定试剂盒中。原二氧化碳测定试剂盒，由液体单试剂组成：trisbase6g/l、盐酸1.8g/l、稳定剂、醋酸镁1g/l、草氨酸钠0.3g/l、磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶0.1g/l、磷酸烯醇式丙酮酸钾0.6g/l、apadh0.5g/l、苹果酸脱氢酶0.05g/l、乙二胺四乙酸二钠1g/l、proclin3001g/l。
按照实施例1的方法进行检测。
与对照试剂稳定性性能指标对照结果(表3)
由以上3个实施例的数据可知，未加入nadh类似物循环再生系统的二氧化碳测定试剂盒与加入nadh类似物循环再生系统的试剂盒相比，其检测结果试剂空白偏低、相对标准偏差明显偏高。说明没有加入nadh类似物循环再生系统的二氧化碳测定试剂盒很不稳定。加入nadh类似物循环再生系统的二氧化碳测定试剂盒在整个测试周期中，试剂空白、相对标准偏差均表现良好，说明37℃闭口放置4周后，试验检测数据正常，试剂空白吸光度a在1.600左右；4℃开瓶放置30天后，试验检测数据正常，试剂空白吸光度a在1.600左右；4℃闭口放置1.5年后，试验检测数据正常，试剂空白吸光度a在1.600左右。由此可见，添加了nadh类似物循环再生系统的二氧化碳测定试剂盒在测试稳定性、准确度、精密度方面表现更为优异，nadh类似物循环再生系统对其有明显的稳定效果，可有效延长二氧化碳测定试剂盒的保存期限。
从以上数据和分析结果可以得到，二氧化碳测定试剂盒加入本发明所述nadh类似物循环再生系统后，能延长试剂盒的保存时间，有效提高测试稳定性、准确性、精密度。该nadh类似物循环再生系统成本低廉，配制简单，值得进一步推广使用。