不孕不育快速检测试剂盒的制作方法

本实用新型公开了一种不孕不育检测试剂盒，具体涉及一种不孕不育快速检测试剂盒。

背景技术：

近几年来，由于环境污染加重、生活方式改变、婚育时间推迟、性传播疾病增加等影响，不孕不育发病率呈逐年上升趋势。在工业化国家，不孕不育的患病率大约为8.5％-20％。相关调查显示，我国的育龄夫妇中大约有8％-15％发生不孕症，其发病率呈增长趋势。世界卫生组织预测，不孕症21世纪将成为仅次于肿瘤、心血管病的第三大疾病。不孕主要分为原发不孕及继发不孕。原发不孕为从未受孕；继发不孕为曾经怀孕以后又不孕。引起不孕的原因有排卵障碍、精液异常、输卵管异常、不明原因的不孕、子宫内膜异位症和其他如免疫性不孕。免疫性不孕不育是由生殖系统抗原的同种免疫或自身免疫引起常见病和多发病之一，占各种原因不孕不育症的20-40％，且近年来呈增多的趋势。免疫性因素造成的不孕不育是大部分不明原因不孕不育、继发性不孕不育和反复流产的主要原因，因此，对免疫性因素造成的不孕进行检测还是非常有必要的。

不孕不育的免疫学诊断主要包括抗精子抗体(ASA,anti-spermatozoa antibody)、抗卵巢抗体(AOA,anti-ovarian antibody)、抗子宫内膜抗体(AEA,anti-endometrial antibody)、抗透明带抗体(AZP,anti-zonapellucid antibody)、抗滋养层细胞膜抗体(ATA,anti-trophoblastmcmbrane antibody)、抗人绒毛膜促性腺激素抗体(HCG，anti-humanchorionicgonadotropin antibody)等指标。

目前不孕不育的检测方法主要有玻片法、斑点酶联免疫法和胶体金法，但是玻片法、斑点酶联免疫法需要反复洗涤等步骤，操作比较繁琐，对操作人员的技术要求较高；胶体金法操作简单，但是灵敏度低，不能满足临床需要。

专利申请号200810204669.7提供了一种蛋白芯片检测方法，可以对几种抗体同时检测，但是其需要洗涤、孵育等步骤，操作繁琐，需要化学发光仪器，不适合基层应用。专利申请号201510444789.4采用酶法，但是操作繁琐，完成整个样本检测需要7步才能完成，不适合临床应用。

技术实现要素：

针对上述问题，本实用新型的目的是提供一种操作方便，检测功能多样化，检测结果可靠的不孕不育快速检测试剂盒。

为此，本实用新型提供的技术方案是这样的：

一种不孕不育快速检测试剂盒，包括带盒盖的盒体，所述的盒盖设有两个加样孔和一个观察窗口；所述的盒体平行排列六含红色乳胶微球的精子抗体检测卡、粉色乳胶微球的卵巢抗体检测卡、橙色乳胶微球的子宫内膜抗体检测卡、黄色乳胶微球的透明带抗体检测卡、绿色乳胶微球的滋养层细胞膜抗体检测卡和蓝色乳胶微球的人绒毛膜促性腺激素抗体检测卡。

进一步的，上述的一种不孕不育快速检测试剂盒，所述的含红色乳胶微球的精子抗体检测卡包括第一底板，所述的第一底板上依次衔接有第一样品垫、羊抗人IgG抗体标记的红色乳胶微球标记垫、精子抗原包被的第一包被膜和第一吸水垫，所述的第一包被膜上设有一条精子抗原检测区T1线和一条第一人IgG质控区线C1线，两条线平行排列。

进一步的，上述的一种不孕不育快速检测试剂盒，所述的含粉色乳胶微球的卵巢抗体检测卡包括第二底板，所述的第二底板上依次衔接有第二样品垫、羊抗人IgG抗体标记的粉色乳胶微球标记垫、卵巢抗原包被的第二包被膜和第二吸水垫，所述的第二包被膜上设有一条卵巢抗原检测区T2线和一条人第二IgG质控区线C2线，两条线平行排列。

进一步的，上述的一种不孕不育快速检测试剂盒，所述的含橙色乳胶微球的子宫内膜抗体检测卡包括第三底板，所述的第三底板上依次衔接有第三样品垫、羊抗人IgG抗体标记的橙色乳胶微球标记垫、子宫内膜抗原包被的第三包被膜和第三吸水垫，所述的第三包被膜上设有一条子宫内膜抗原检测区T3线和一条第三人IgG质控区C3线，两条线平行排列。

进一步的，上述的一种不孕不育快速检测试剂盒，所述的含黄色乳胶微球的透明带抗体检测卡包括第四底板，所述的第四底板上依次衔接有第四样品垫、羊抗人IgG抗体标记的黄色乳胶微球标记垫、抗透明带抗原包被的第四包被膜和第四吸水垫，所述的第四包被膜上设有一条抗透明带抗原检测区T4线和一条人IgG质控区C4线，两条线平行排列。

进一步的，上述的一种不孕不育快速检测试剂盒，所述的含绿色乳胶微球的滋养层细胞膜抗体检测卡包括第五底板，所述的第五底板上依次衔接有第五样品垫、羊抗人IgG抗体标记的绿色乳胶微球标记垫、滋养层细胞膜抗原包被的第五包被膜和第五吸水垫，所述的第五包被膜上设有一条滋养层细胞膜抗原检测区T5线和一条第五人IgG质控区C5线，两条线平行排列。

进一步的，上述的一种不孕不育快速检测试剂盒，所述的含蓝色乳胶微球的人绒毛膜促性腺激素抗体检测卡包括第六底板，所述的第六底板上依次衔接有第六样品垫、羊抗人IgG抗体标记的蓝色乳胶微球标记垫、人绒毛膜促性腺激素抗原包被的第六包被膜和第六吸水垫，所述的第六包被膜上设有一条人绒毛膜促性腺激素T6线和一条第六人IgG质控区线，两条线平行排列。

进一步的，上述的一种不孕不育快速检测试剂盒，所述的两个加样孔位于盒盖的同一侧，每三个顺序排列的检测卡上方的盒盖有一个加样孔。

与现有技术相比，本实用新型所提供的不孕不育快速检测试剂盒具有如下优点：

1、本实用新型提供的技术方案方法采用六种不同颜色的彩色乳胶微球检测六种指标，根据乳胶微球的颜色即可判断出来检测哪个项目，避免了项目之间相混淆；

2、本实用新型提供的技术方案方法在每三个检测卡上方的盒盖有一个加样孔，操作时，只需要加两次样，10min内即可获得六个检测结果；

3、本实用新型提供的技术方案有效解决了目前市场上不孕不育检测试剂操作繁琐的问题；本实用新型提供的方法只需要2步即可，操作简单，10min即能出结果，只需要加两次样即可检测6个项目，对操作人员要求较低，适合基层应用；

4、本实用新型提供的技术方案与胶体金法相比，其灵敏度高于胶体金法，由于胶体金的粒径较小，一般40nm；本实用新型提供的技术方案中采用彩色乳胶微球，其粒径200nm，灵敏度高，更好的满足临床应用。

附图说明

图1是本实用新型提供的快速检测试剂盒结构示意图；

图2是红色乳胶微球的精子抗体检测卡A结构示意图；

图3是粉色乳胶微球的卵巢抗体检测卡B结构示意图；

图4是橙色乳胶微球的子宫内膜抗体检测卡C结构示意图；

图5是黄色乳胶微球的透明带抗体检测卡D结构示意图；

图6是绿色乳胶微球的滋养层细胞膜抗体检测卡E结构示意图；

图7是蓝色乳胶微球的人绒毛膜促性腺激素抗体检测卡F结构示意图。

具体实施方式

下面结合具体实施方式，对本实用新型的权利要求做进一步的限定，但是不构成对本实用新型的任何限制。

本实用新型提供的一种不孕不育快速检测试剂盒，参阅图1至图7，包括带盒盖11的盒体1，所述的盒盖11设有两个加样孔12和一个观察窗13，所述的两个加样孔12位于盒盖11的同一侧，两个加样孔12之间的距离与两个检测卡的宽度之和，其中每三个检测卡上方的盒盖11有一个加样孔12，操作时，只需要加两次样，10min内即可获得六个检测结果；所述的盒体1平行排列含红色乳胶微球的精子抗体检测卡A、粉色乳胶微球的卵巢抗体检测卡B、橙色乳胶微球的子宫内膜抗体检测卡C、黄色乳胶微球的透明带抗体检测卡D、绿色乳胶微球的滋养层细胞膜抗体检测卡E和蓝色乳胶微球的人绒毛膜促性腺激素抗体检测卡F。

更为具体的说，所述的含红色乳胶微球的精子抗体检测卡A包括第一底板1a，所述的第一底板1a上依次衔接有第一样品垫2a、羊抗人IgG抗体标记的红色乳胶微球标记垫3a、精子抗原包被的第一包被膜4a和第一吸水垫5a，所述的第一包被膜4a上设有一条精子抗原检测区T1线和一条第一人IgG质控区C1线，两条线平行排列。

更为具体的说，所述的含粉色乳胶微球的卵巢抗体检测卡B包括第二底板1b，所述的第二底板1b上依次衔接有第二样品垫2b、羊抗人IgG抗体标记的粉色乳胶微球标记垫3b、卵巢抗原包被的第二包被膜4b和第二吸水垫5b，所述的第二包被膜4b上设有一条卵巢抗原检测区T1线和一条人第二IgG质控区C2线，两条线平行排列。

更为具体的说，所述的含橙色乳胶微球的子宫内膜抗体检测卡C包括第三底板1c，所述的第三底板1c上依次衔接有第三样品垫2c、羊抗人IgG抗体标记的橙色乳胶微球标记垫3c、子宫内膜抗原包被的第三包被膜4c和第三吸水垫5c，所述的第三包被膜4c上设有一条子宫内膜抗原检测区T3线和一条第三人IgG质控区C3线，两条线平行排列。

更为具体的说，所述的含黄色乳胶微球的透明带抗体检测卡D包括第四底板1d，所述的第四底板1d上依次衔接有第四样品垫2d、羊抗人IgG抗体标记的黄色乳胶微球标记垫3d、抗透明带抗原包被的第四包被膜4d和第四吸水垫5d，所述的第四包被膜4d上设有一条精子抗原检测区T5线和一条人IgG质控区C5线，两条线平行排列。

更为具体的说，所述的含绿色乳胶微球的滋养层细胞膜抗体检测卡E包括第五底板1e，所述的第五底板1e上依次衔接有第五样品垫2e、羊抗人IgG抗体标记的绿色乳胶微球标记垫3e、滋养层细胞膜抗原包被的第五包被膜4e和第五吸水垫5e，所述的第五包被膜4e上设有一条精子抗原检测区T线和一条第五人IgG质控区C线，两条线平行排列。

更为具体的说，所述的含蓝色乳胶微球的滋养层细胞膜抗体检测卡F包括第六底板1f，所述的第六底板1f上依次衔接有第六样品垫2f、羊抗人IgG抗体标记的蓝色乳胶微球标记垫3f、人绒毛膜促性腺激素抗原包被的第六包被膜4f和第六吸水垫5f，所述的第六包被膜4f上设有一条人绒毛膜促性腺激素T6线和一条第六人IgG质控区C线，两条线平行排列。

上述的一种不孕不育快速检测试剂盒的制备方法，先制备各个检测卡，再将制备好的各个检测卡放置于盒体1内。

所述的精子抗体检测卡A依次包括下述步骤：在第一底板1a上依次衔接第一样品垫2a、羊抗人IgG抗体标记的红色乳胶微球标记垫3a、精子抗原包被的第一包被膜4a和第一吸水垫5a，其中：

1)第一样品垫2a的制备方法是：将样品垫裁成20mm×300mm的大小，浸泡在样品垫缓冲液中，1小时之后取出，于室温干燥16-18小时。

第一样品垫1b的缓冲液配方如下：2％BSA、1％PVP、0.5％Tween溶解于0.01的PBS(pH7.4)缓冲液中。

所述的抗精子抗体检测卡的红色乳胶微球标记垫2a的制备方法依次包括下述步骤：

①微球预处理：取粒径200nm的红色乳胶微球10μL加入到0.1M的pH5.5的1mL的柠檬酸缓冲液中，混匀；

②微球的活化：取浓度为20mg/mL的EDC50μL，加入上述溶液中，混匀；在旋转培养器上混匀反应10min；

③微球淬灭：加入终浓度为0.02M的2-巯基乙醇淬灭多余的EDC；

④偶联抗体：加入羊抗人IgG抗体30ug至上述溶液中，在旋转培养器上混匀反应1h；

⑤微球封闭：加入封闭剂5％的OVA200μL，在旋转培养器上混匀反应30min；

⑥微球纯化：用脱盐柱将蛋白微球复合物从溶液中分离出来；

⑦保存：向脱盐柱中加入体积为200μL的保存液，移至EP管中，超声打散2次；所述的保存液为0.1M的pH8.0的甘氨酸-NaOH缓冲液含1wt％酪蛋白钠，10％海藻糖，2％PEG20000，0.5％EDTA和0.2mg/mL鼠IgG。

⑧将上述所得的溶液用喷金划膜仪喷至聚酯纤维素膜上，喷量为1～5μL/cm，放入37℃烘箱，干燥2～5小时；

3)精子抗原包被的第一包被膜4a制备方法是：

①精子抗原包被

检测线(T1线)：在硝酸纤维膜上划线，在膜的一端用记号笔做好C1线和T1线的标记，C线和T线的距离为0.5cm，T线与硝酸纤维素膜下缘的距离为1cm，用3％甲醇，0.5％海藻糖的0.01M的pH7.4的PBS将精子抗原稀释到1.0mg/mL进行包被；所述的精子抗原来自于人精液，划线浓度为1μL/cm，速度100mm/s。

质控线(C1线)：用3％甲醇，0.5％海藻糖的0.01M的pH7.4的PBS将人IgG多克隆抗体稀释到0.8mg/mL进行包被，划线浓度为1μL/cm，速度100mm/s。

所述的粉色乳胶微球的卵巢抗体检测卡B依次包括下述步骤：在第二底板1b上依次衔接第二样品垫2b、羊抗人IgG抗体标记的粉色乳胶微球标记垫3b、卵巢抗原包被的第二包被膜4b和第二吸水垫5b，其中：

1)第二样品垫2b的制备方法是：将样品垫裁成20mm×300mm的大小，浸泡在样品垫缓冲液中，1小时之后取出，于室温干燥16-18小时。

第二样品垫1b的缓冲液配方如下：缓冲液配方如下：2％BSA、1％PVP、0.5％Tween溶解于0.01的PBS(pH7.4)缓冲液中。

所述的抗卵巢抗体检测卡的粉色乳胶微球标记垫2b的制备方法依次包括下述步骤：

①微球预处理：取粒径200nm的粉色乳胶微球10μL加入到0.1M的pH5.5的1mL的柠檬酸缓冲液中，混匀；

②微球的活化：取浓度为20mg/mL的EDC50μL，加入上述溶液中，混匀；在旋转培养器上混匀反应10min；

③微球淬灭：加入终浓度为0.02M的2-巯基乙醇淬灭多余的EDC；

④偶联抗体：加入羊抗人IgG抗体30ug至上述溶液中，在旋转培养器上混匀反应1h；

⑤微球封闭：加入封闭剂5％的OVA200μL，在旋转培养器上混匀反应30min；

⑥微球纯化：用脱盐柱将蛋白微球复合物从溶液中分离出来；

⑦保存：向脱盐柱中加入体积为200μL的保存液，移至EP管中，超声打散2次；所述的保存液为0.1M的pH8.0的甘氨酸-NaOH缓冲液含1wt％酪蛋白钠，10％海藻糖，2％PEG20000，0.5％EDTA和0.2mg/mL鼠IgG。

⑧将上述所得的溶液用喷金划膜仪喷至聚酯纤维素膜上，喷量为1～5μL/cm，放入37℃烘箱，干燥2～5小时；

3)卵巢抗原包被的第二包被膜4b制备方法是：

①卵巢抗原包被

检测线(T2线)：在硝酸纤维膜上划线，在膜的一端用记号笔做好C线和T线的标记，C2线和T2线的距离为0.5cm，T线与硝酸纤维素膜下缘的距离为1cm，用3％甲醇，0.5％海藻糖的0.01M的pH7.4的PBS将卵巢抗原稀释到1.0mg/mL进行包被；所述的卵巢抗原来自于猴卵巢，划线浓度为1μL/cm，速度100mm/s。

质控线(C2线)：用3％甲醇，0.5％海藻糖的0.01M的pH7.4的PBS将人IgG多克隆抗体稀释到0.8mg/mL进行包被，划线浓度为1μL/cm，速度100mm/s。

所述的橙色乳胶微球的子宫内膜抗体检测卡C依次包括下述步骤：在第三底板1c上依次衔接第三样品垫2c、羊抗人IgG抗体标记的橙色乳胶微球标记垫3c、子宫内膜抗原包被的第三包被膜4c和第三吸水垫5c，其中：

1)第三样品垫2c的制备方法是：将样品垫裁成20mm×300mm的大小，浸泡在样品垫缓冲液中，1小时之后取出，于室温干燥16-18小时。

第三样品垫1c的缓冲液配方如下：2％BSA、1％PVP、0.5％Tween溶解于0.01的PBS(pH7.4)缓冲液中。

所述的抗子宫内膜抗体检测卡的橙色乳胶微球标记垫2c的制备方法依次包括下述步骤：

①微球预处理：取粒径200nm的橙色乳胶微球10μL加入到0.1M的pH5.5的1mL的柠檬酸缓冲液中，混匀；

②微球的活化：取浓度为20mg/mL的EDC50μL，加入上述溶液中，混匀；在旋转培养器上混匀反应10min；

③微球淬灭：加入终浓度为0.02M的2-巯基乙醇淬灭多余的EDC；

④偶联抗体：加入羊抗人IgG抗体30ug至上述溶液中，在旋转培养器上混匀反应1h；

⑤微球封闭：加入封闭剂5％的OVA200μL，在旋转培养器上混匀反应30min；

⑥微球纯化：用脱盐柱将蛋白微球复合物从溶液中分离出来；

⑦保存：向脱盐柱中加入体积为200μL的保存液，移至EP管中，超声打散2次；所述的保存液为0.1M的pH8.0的甘氨酸-NaOH缓冲液含1wt％酪蛋白钠，10％海藻糖，2％PEG20000，0.5％EDTA和0.2mg/mL鼠IgG。

⑧将上述所得的溶液用喷金划膜仪喷至聚酯纤维素膜上，喷量为1～5μL/cm，放入37℃烘箱，干燥2～5小时；

3)子宫内膜抗原包被的第三包被膜4c制备方法是：

①子宫内膜抗原包被

检测线(T3线)：在硝酸纤维膜上划线，在膜的一端用记号笔做好C3线和T3线的标记，C3线和T3线的距离为0.5cm，T线与硝酸纤维素膜下缘的距离为1cm，用3％甲醇，0.5％海藻糖的0.01M的pH7.4的PBS将子宫内膜抗原稀释到1.0mg/mL进行包被；所述的子宫内膜抗原来自于牛子宫内膜，划线浓度为1μL/cm，速度100mm/s。

质控线(C3线)：用3％甲醇，0.5％海藻糖的0.01M的pH7.4的PBS将人IgG多克隆抗体稀释到0.8mg/mL进行包被，划线浓度为1μL/cm，速度100mm/s。

所述的黄色乳胶微球的透明带抗体检测卡D、依次包括下述步骤：在第四底板1d上依次衔接第四样品垫2d、羊抗人IgG抗体标记的黄色乳胶微球标记垫3d、透明带抗原包被的第四包被膜4d和第四吸水垫5d，其中：

1)第四样品垫2d的制备方法是：将样品垫裁成20mm×300mm的大小，浸泡在样品垫缓冲液中，1小时之后取出，于室温干燥16-18小时。

第四样品垫1d的缓冲液配方如下：2％BSA、1％PVP、0.5％Tween溶解于0.01的PBS(pH7.4)缓冲液中。

所述的抗透明带抗体检测卡的黄色乳胶微球标记垫2d的制备方法依次包括下述步骤：

①微球预处理：取粒径200nm的黄色乳胶微球10μL加入到0.1M的pH5.5的1mL的柠檬酸缓冲液中，混匀；

②微球的活化：取浓度为20mg/mL的EDC50μL，加入上述溶液中，混匀；在旋转培养器上混匀反应10min；

③微球淬灭：加入终浓度为0.02M的2-巯基乙醇淬灭多余的EDC；

④偶联抗体：加入羊抗人IgG抗体30ug至上述溶液中，在旋转培养器上混匀反应1h；

⑤微球封闭：加入封闭剂5％的OVA200μL，在旋转培养器上混匀反应30min；

⑥微球纯化：用脱盐柱将蛋白微球复合物从溶液中分离出来；

⑦保存：向脱盐柱中加入体积为200μL的保存液，移至EP管中，超声打散2次；所述的保存液为0.1M的pH8.0的甘氨酸-NaOH缓冲液含1wt％酪蛋白钠，10％海藻糖，2％PEG20000，0.5％EDTA和0.2mg/mL鼠IgG。

⑧将上述所得的溶液用喷金划膜仪喷至聚酯纤维素膜上，喷量为1～5μL/cm，放入37℃烘箱，干燥2～5小时；

3)透明带抗原包被的第四包被膜4d制备方法是：

①透明带抗原包被

检测线(T4线)：在硝酸纤维膜上划线，在膜的一端用记号笔做好C4线和T4线的标记，C4线和T4线的距离为0.5dm，T线与硝酸纤维素膜下缘的距离为1cm，用3％甲醇，0.5％海藻糖的0.01M的pH7.4的PBS将透明带抗原稀释到1.0mg/mL进行包被；所述的透明带抗原来自于透明带抗原来自于牛卵泡，划线浓度为1μL/cm，速度100mm/s。

质控线(D线)：用3％甲醇，0.5％海藻糖的0.01M的pH7.4的PBS将人IgG多克隆抗体稀释到0.8mg/mL进行包被，划线浓度为1μL/cm，速度100mm/s。

所述的绿色乳胶微球的滋养层细胞膜抗体检测卡E、依次包括下述步骤：在第五底板1e上依次衔接第五样品垫2e、羊抗人IgG抗体标记的绿色乳胶微球标记垫3e、滋养层细胞膜抗原包被的第五包被膜4e和第五吸水垫5e，其中：

1)第五样品垫2e的制备方法是：将样品垫裁成20mm×300mm的大小，浸泡在样品垫缓冲液中，1小时之后取出，于室温干燥16-18小时。

第五样品垫1e的缓冲液配方如下：2％BSA、1％PVP、0.5％Tween溶解于0.01的PBS(pH7.4)缓冲液中。

所述的抗滋养层细胞膜抗体检测卡的绿色乳胶微球标记垫2e的制备方法依次包括下述步骤：

①微球预处理：取粒径200nm的绿色乳胶微球10μL加入到0.1M的pH5.5的1mL的柠檬酸缓冲液中，混匀；

②微球的活化：取浓度为20mg/mL的EDC50μL，加入上述溶液中，混匀；在旋转培养器上混匀反应10min；

③微球淬灭：加入终浓度为0.02M的2-巯基乙醇淬灭多余的EDC；

④偶联抗体：加入羊抗人IgG抗体30ug至上述溶液中，在旋转培养器上混匀反应1h；

⑤微球封闭：加入封闭剂5％的OVA200μL，在旋转培养器上混匀反应30min；

⑥微球纯化：用脱盐柱将蛋白微球复合物从溶液中分离出来；

⑦保存：向脱盐柱中加入体积为200μL的保存液，移至EP管中，超声打散2次；所述的保存液为0.1M的pH8.0的甘氨酸-NaOH缓冲液含1wt％酪蛋白钠，10％海藻糖，2％PEG20000，0.5％EDTA和0.2mg/mL鼠IgG。

⑧将上述所得的溶液用喷金划膜仪喷至聚酯纤维素膜上，喷量为1～5μL/cm，放入37℃烘箱，干燥2～5小时；

3)滋养层细胞膜抗原包被的第五包被膜4e制备方法是：

①滋养层细胞膜抗原包被

检测线(T5线)：在硝酸纤维膜上划线，在膜的一端用记号笔做好C5线和T5线的标记，C5线和T5线的距离为0.5cm，T线与硝酸纤维素膜下缘的距离为1cm，用3％甲醇，0.5％海藻糖的0.01M的pH7.4的PBS将滋养层细胞膜抗原稀释到1.0mg/mL进行包被；所述的滋养层细胞膜抗滋养层细胞膜抗原来自于人绒毛膜滋养层细胞，划线浓度为1μL/cm，速度100mm/s。

质控线(C5线)：用3％甲醇，0.5％海藻糖的0.01M的pH7.4的PBS将人IgG多克隆抗体稀释到0.8mg/mL进行包被，划线浓度为1μL/cm，速度100mm/s。

所述的蓝色乳胶微球的人绒毛膜促性腺激素抗体检测卡F、依次包括下述步骤：在第六底板1f上依次衔接第六样品垫2f、羊抗人IgG抗体标记的蓝色乳胶微球标记垫3f、人绒毛膜促性腺激素抗原包被的第六包被膜4f和第六吸水垫5，其中：

1)第六样品垫2f的制备方法是：将样品垫裁成20mm×300mm的大小，浸泡在样品垫缓冲液中，1小时之后取出，于室温干燥16-18小时。

第六样品垫1f的缓冲液配方如下：2％BSA、1％PVP、0.5％Tween溶解于0.01的PBS(pH7.4)缓冲液中。

所述的抗人绒毛膜促性腺激素抗体检测卡的蓝色乳胶微球标记垫2f的制备方法依次包括下述步骤：

①微球预处理：取粒径200nm的蓝色乳胶微球10μL加入到0.1M的pH5.5的1mL的柠檬酸缓冲液中，混匀；

②微球的活化：取浓度为20mg/mL的EDC50μL，加入上述溶液中，混匀；在旋转培养器上混匀反应10min；

③微球淬灭：加入终浓度为0.02M的2-巯基乙醇淬灭多余的EDC；

④偶联抗体：加入羊抗人IgG抗体30ug至上述溶液中，在旋转培养器上混匀反应1h；

⑤微球封闭：加入封闭剂5％的OVA200μL，在旋转培养器上混匀反应30min；

⑥微球纯化：用脱盐柱将蛋白微球复合物从溶液中分离出来；

⑦保存：向脱盐柱中加入体积为200μL的保存液，移至EP管中，超声打散2次；所述的保存液为0.1M的pH8.0的甘氨酸-NaOH缓冲液含1wt％酪蛋白钠，10％海藻糖，2％PEG20000，0.5％EDTA和0.2mg/mL鼠IgG。

⑧将上述所得的溶液用喷金划膜仪喷至聚酯纤维素膜上，喷量为1～5μL/cm，放入37℃烘箱，干燥2～5小时；

3)人绒毛膜促性腺激素抗原包被的第六包被膜4f制备方法是：

①人绒毛膜促性腺激素抗原包被

检测线(T6线)：在硝酸纤维膜上划线，在膜的一端用记号笔做好C6线和T6线的标记，C6线和T6线的距离为0.5cm，T线与硝酸纤维素膜下缘的距离为1cm，用3％甲醇，0.5％海藻糖的0.01M的pH7.4的PBS将人绒毛膜促性腺激素抗原稀释到1.0mg/mL进行包被；所述的人绒毛膜促性腺激素来自于人孕尿，划线浓度为1μL/cm，速度100mm/s。

质控线(C6线)：用3％甲醇，0.5％海藻糖的0.01M的pH7.4的PBS将人IgG多克隆抗体稀释到0.8mg/mL进行包被，划线浓度为1μL/cm，速度100mm/s。

为了更好的使用本实用新型提供的该不孕不育快速检测试剂盒，下面给出本实用新型提供的样本检测方法：

1.取100μL血浆/血清，加入到900μL的PBS稀释液中；

2.每个加样孔各加入200μL上述溶液；

3. 10min时读取结果即可，结果如下表。

上述实施例为本实用新型较佳的实施方式，但本实用新型的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本实用新型的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本实用新型的保护范围之内。