检测猪流行性乙型脑炎病毒NS1抗体的胶体金试纸的制作方法

本实用新型涉及胶体金试纸技术领域，特别是涉及一种检测猪流行性乙型脑炎病毒 NS1抗体的胶体金试纸。

背景技术：

流行性乙型脑炎病毒又称日本乙型脑炎病毒(japanese encephalitis virus,JEV)，多种动物均可感染，猪群感染最为普遍，虽然大多数感染猪不表现临床症状，但怀孕母猪可表现为高热、流产、死胎和木乃伊，公猪则出现睾丸炎，给养猪业造成重要经济损失，更重要的是，病猪可作为传染源，威胁人类健康。NS1是JEV的重要非结构蛋白，只有在病毒感染、复制过程中表达，因此，JEV野毒感染猪体内会产生NS1抗体，而猪流行性乙型脑炎灭活疫苗免疫猪体内不会产生NS1抗体，这样通过检测NS1抗体，可以鉴别JEV 野毒感染和疫苗免疫。目前，虽然ELISA可以检测JEV NS1抗体，但是检测技术操作复杂，需要昂贵的仪器设备、过程较长、耗时费力，需要特定仪器设备和专业技术人员操作，很难在基层普及，不能满足生产一线或疫病现场的快速检测需要。因此，亟待有一种快速检测JEV NS1抗体的设备及技术。

技术实现要素：

本实用新型的一个目的是解决至少上述问题，并提供至少后面将说明的优点。

本实用新型还有一个目的是提供一种检测猪流行性乙型脑炎病毒NS1抗体的胶体金试纸，其能够对样品中是否含有猪流行性乙型脑炎病毒NS1抗体进行快速检测，其中，胶体金标对单抗/多抗的特异性和亲和力(结合力)影响很小，具有较高的印迹率、特异性和敏感性。

为了实现根据本实用新型的这些目的和其它优点，提供了一种检测猪流行性乙型脑炎病毒NS1抗体的胶体金试纸，包括：

壳体，其为一容置槽；

两个检测单体，其间隔一定距离相互平行排列设置在所述壳体内；其中，任一个检测单体包括依次连接设置的样品滴盒、至少一毛细吸管、胶体金容纳纤维椎体、检测纤维层；至少一毛细吸管相对于所述壳体的轴向倾斜设置，且至少一毛细吸管的相对较高的一端连通至所述样品滴盒的底部，另一端连接至所述胶体金附着纤维椎体的尖端，所述胶体金附着纤维椎体的底部扣设在所述检测纤维层的一端上；靠近所述检测纤维层的另一端上还间隔开设置有检测条和对照条，所述检测条由纯化的兔或羊抗猪抗体液或葡萄球菌A蛋白溶液印制；所述对照条由羊或兔抗猪流行性乙型脑炎病毒NS1免疫球蛋白G溶液印制；且两个检测单体上的检测条和对照条的排列顺序相反；所述胶体金附着纤维椎体上附着有与所述检测条对应的以胶体金标记的猪流行性乙型脑炎病毒NS1蛋白抗原液；

盖体，其可拆卸的扣设在所述壳体的开口处；弹性过滤层，其附着在所述盖体的内顶面上，且所述弹性过滤层的下表面与两个检测单体的上端面的形状相适应。

优选的是，还包括：

支撑板，其可拆卸的设置在所述壳体内，且所述支撑板设置在两个检测单体的下表面上；

挡板，其垂直设置在所述支撑板的上表面上，且所述挡板设置在所述两个检测单体之间的缝隙内，所述挡板的长度与所述支撑板的长度相适应，所述挡板的高度与任一个检测单体的厚度相适应；

支撑锥，其底部固定在所述支撑板上，且所述支撑锥尖端朝上穿透检测纤维层后填充设置在所述胶体金附着纤维椎体内，且所述支撑锥的侧壁上包裹有吸水层，所述胶体金附着纤维椎体的内侧壁与所述吸水层紧密配合。

优选的是，还包括：

弯折件，其一端连接至所述支撑板的边沿，另一端插接在所述壳体的侧壁的插孔内。

优选的是，还包括：

透明膜，其覆盖在所述至少一毛细吸管、所述胶体金附着纤维椎体和所述检测纤维层上。

优选的是，所述至少一毛细吸管相对于所述壳体的轴向倾斜设置的倾斜角度≤40度，且所述胶体金附着纤维椎体的高度＜6mm。

优选的是，所述检测纤维层的材质为硝酸纤维素、纤维素、羧甲基纤维素或聚偏二氟乙烯纤维素中的任一种；

所述胶体金椎体的材质为玻璃棉、尼龙纤维或聚酯纤维中的任一种；

弹性过滤层的材质为过滤棉。

优选的是，所述支撑板的材质为硬质塑胶片或透明玻璃。

本实用新型至少包括以下有益效果：

壳体、盖体和弹性过滤层为两个检测单体提供相对密封且干燥的环境，便于冷冻或冷藏保存，保证抗体活性及洁净度，可有效延长其保质期；

样品滴盒为一相对壳体的容置槽的容积要小很多的容置槽，在样品检测过程中，用于将样品滴入其中，之后样品只能通过延伸至底部的至少一毛细吸管将样品引导至胶体金容纳纤维椎体上；可以将样品滴盒设置成漏斗状或者半椭球形，倾斜设置的毛细吸管更容易将样品吸入其中并进行引导，之后通过纤维的层析作用，将毛细吸管内的样品吸引至胶体金附着纤维椎体上；在层析作用和重力作用的双重作用下，样品自胶体金附着纤维椎体的尖端向其底部流动，在此过程中，由于胶体金附着纤维椎体的侧壁面积逐渐增加，使得样品逐渐铺展开并与胶体金抗原充分接触并带动其随之扩散至检测纤维层上，并最终扩散至检测纤维层的另一端；在此过程中，若样品中含有猪流行性乙型脑炎病毒NS1抗体，则待检病毒NS1抗体可与该抗体相对应的部分金标重组蛋白NS1相结合，进而与检测纤维层上的检测条中的兔或羊抗猪抗体或者SPA结合，从而显示出棕红色的检测印迹；而对照条中的羊或兔抗猪流行性乙型脑炎病毒NS1IgG则可与金标重组猪流行性乙型脑炎病毒NS1蛋白结合，形成棕红色对照印迹；检测纤维层上显示两条棕红色条带；若样品中没有猪流行性乙型脑炎病毒NS1抗体，则待检病毒NS1抗体不与检测纤维层上的检测条中的兔或羊抗猪抗体或者SPA结合，从而不显示出棕红色的检测印迹，而只显示对照条的棕红色条带。

在一个壳体中设置平行的两个检测单体，并且将检测条和对照条进行位置相反的设置，使得检测结果更严谨，不会出现检测出错的情况。

综上，应用本实用新型的试纸条进行猪流行性乙型脑炎病毒NS1抗体检测，结果判定直观、准确，简单明了，不易出现假阴性和假阳性误判，且相对于现有的传统检测方法，减少投资和检测成本，因为，本实用新型的试纸条在使用时，不需另配其它仪器、设备和试剂，节省大量仪器、设备和附加试剂费用；专业和非专业人士均可随时随地进行现场检测，无需支付专家诊断检查费或送样品去诊断室的路费，节省检测成本，检测费用低。

本实用新型的其它优点、目标和特征将部分通过下面的说明体现，部分还将通过对本实用新型的研究和实践而为本领域的技术人员所理解。

附图说明

图1为根据本实用新型的一个实施例中快速检测猪流行性乙型脑炎病毒NS1抗体的试纸条的俯视结构示意图；

图2为根据本实用新型的一个实施例中快速检测猪流行性乙型脑炎病毒NS1抗体的试纸条的剖面结构示意图；

图3为根据本实用新型的一个实施例中所述盖体的剖面结构示意图；

图4为根据本实用新型的另一个实施例中快速检测猪流行性乙型脑炎病毒NS1抗体的试纸条的剖面结构示意图。

具体实施方式

下面结合附图对本实用新型做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。

应当理解，本文所使用的诸如“具有”、“包含”以及“包括”术语并不配出一个或多个其它元件或其组合的存在或添加。

如图1、2、3所示，本实用新型提供了一种检测猪流行性乙型脑炎病毒NS1抗体的胶体金试纸，包括：壳体10，其为一容置槽；两个检测单体11，其间隔一定距离相互平行排列设置在所述壳体内；其中，任一个检测单体包括依次连接设置的样品滴盒111、至少一毛细吸管112、胶体金容纳纤维椎体113、检测纤维层114；至少一毛细吸管相对于所述壳体的轴向倾斜设置，且至少一毛细吸管的相对较高的一端连通至所述样品滴盒的底部，另一端连接至所述胶体金附着纤维椎体的尖端，所述胶体金附着纤维椎体的底部扣设在所述检测纤维层的一端上；靠近所述检测纤维层的另一端上还间隔开设置有检测条1141和对照条1142，所述检测条由纯化的兔或羊抗猪抗体液或葡萄球菌A蛋白溶液印制；所述对照条由羊或兔抗猪流行性乙型脑炎病毒NS1免疫球蛋白G溶液印制；且两个检测单体上的检测条和对照条的排列顺序相反；所述胶体金附着纤维椎体上附着有与所述检测条对应的以胶体金标记的猪流行性乙型脑炎病毒NS1蛋白抗原液；盖体20，其可拆卸的扣设在所述壳体的开口处；弹性过滤层21，其附着在所述盖体的内顶面上，且所述弹性过滤层的下表面与两个检测单体的上端面的形状相适应。

在上述方案中，利用微孔滤膜的渗滤浓缩和毛细管作用，将抗原-抗体反应由ELISA 的传统液相环境转到固相滤膜上快速进行，采用胶体金印迹代替酶印迹，凭肉眼直接观察胶体金的显色状况，即时获得检测结果。

其中，壳体、盖体和弹性过滤层为两个检测单体提供相对密封且干燥的环境，便于冷冻或冷藏保存，保证抗体活性及洁净度，可有效延长其保质期；

样品滴盒为一相对壳体的容置槽的容积要小很多的容置槽，在样品检测过程中，用于将样品滴入其中，之后样品只能通过延伸至底部的至少一毛细吸管将样品引导至胶体金容纳纤维椎体上；倾斜设置的毛细吸管更容易将样品吸入其中并进行引导，之后通过纤维的层析作用，将毛细吸管内的样品吸引至胶体金附着纤维椎体上；在层析作用和重力作用的双重作用下，样品自胶体金附着纤维椎体的尖端向其底部流动，在此过程中，由于胶体金附着纤维椎体的侧壁面积逐渐增加，使得样品逐渐铺展开并与胶体金抗原充分接触并带动其随之扩散至检测纤维层上，并最终扩散至检测纤维层的另一端；在此过程中，若样品中含有猪流行性乙型脑炎病毒NS1抗体，则待检病毒NS1抗体可与该抗体相对应的部分金标重组蛋白NS1相结合，进而与检测纤维层上的检测条中的兔或羊抗猪抗体或者SPA 结合，从而显示出棕红色的检测印迹；而对照条中的羊或兔抗猪流行性乙型脑炎病毒 NS1IgG则可与金标重组猪流行性乙型脑炎病毒NS1蛋白结合，形成棕红色对照印迹；检测纤维层上显示两条棕红色条带；若样品中没有猪流行性乙型脑炎病毒NS1抗体，则待检病毒NS1抗体不与检测纤维层上的检测条中的兔或羊抗猪抗体或者SPA结合，从而不显示出棕红色的检测印迹，而只显示对照条的棕红色条带。

在一个壳体中设置平行的两个检测单体，并且将检测条和对照条进行位置相反的设置，使得检测结果更严谨，不会出现检测出错的情况。

综上，应用本实用新型的试纸条进行猪流行性乙型脑炎病毒NS1抗体检测，结果判定直观、准确，简单明了，不易出现假阴性和假阳性误判。

其中，试纸条以胶体金标记重组猪流行性乙型脑炎病毒NS1蛋白为基础制备而成，金标NS1蛋白中金颗粒与蛋白分子之间无共价键形成，二者通过异性电荷间的范德华力相结合，胶体金标对蛋白的特异性和亲和力影响很小，且具有较高的印迹率。

如图1、4所示，在一个优选的方案中，还包括：支撑板115，其可拆卸的设置在所述壳体内，且所述支撑板设置在两个检测单体的下表面上；挡板1151，其垂直设置在所述支撑板的上表面上，且所述挡板设置在所述两个检测单体之间的缝隙内，所述挡板的长度与所述支撑板的长度相适应，所述挡板的高度与任一个检测单体的厚度相适应；支撑锥1152，其底部固定在所述支撑板上，且所述支撑锥尖端朝上穿透检测纤维层后填充设置在所述胶体金附着纤维椎体内，且所述支撑锥的侧壁上包裹有吸水层，所述胶体金附着纤维椎体的内侧壁与所述吸水层紧密配合。

在本方案中，支撑板为硬质板体，用于支撑依次连接设置的样品滴盒、至少一毛细吸管、胶体金容纳纤维椎体、检测纤维层，使其成为一个整体，便于安装或拆卸，且壳体也可以经消毒后反复使用；挡板用于将两个检测单体彻底分开，避免样品交叉层析，影响检测的准确性；其用于为设置胶体金附着纤维椎体提供模具并使其保持形态稳定。

如图4所示，在一个优选的方案中，还包括：弯折件1153，其一端连接至所述支撑板的边沿，另一端插接在所述壳体的侧壁的插孔内。方便安装和拆卸，根据固定的要求，可以设置一对、两对或三对弯折件。弯折件的弯折部分可以是弧形的或者直角弯折，只要其高度不超过壳体的开口即可。

在一个优选的方案中，还包括：透明膜，其覆盖在所述至少一毛细吸管、所述胶体金附着纤维椎体和所述检测纤维层上。透明膜用于进一步保护毛细吸管、胶体金附着纤维锥体和检测纤维层，可以设置成塑封结构。

如图1、2、4所示，在一个优选的方案中，所述至少一毛细吸管相对于所述壳体的轴向倾斜设置的倾斜角度≤40度，且所述胶体金附着纤维椎体的高度＜6mm。比如：至少一毛细吸管的倾斜角度为35度，30度，25度，20度，15度等，胶体金附着纤维椎体的高度为5mm、4mm、3mm、2mm，甚至1mm。

在一个优选的方案中，所述检测纤维层的材质为硝酸纤维素、纤维素、羧甲基纤维素或聚偏二氟乙烯纤维素中的任一种；所述胶体金椎体的材质为玻璃棉、尼龙纤维或聚酯纤维中的任一种；弹性过滤层的材质为过滤棉。

在一个优选的方案中，所述支撑板的材质为硬质塑胶片或透明玻璃。

尽管本实用新型的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本实用新型的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本实用新型并不限于特定的细节和这里示出与描述的图例。