用于检测唾液中梅毒螺旋体抗体的胶体金试纸及其制备方法和使用方法与流程

文档序号:14725938发布日期:2018-06-19 07:21阅读:来源:国知局
技术特征:

1.一种用于检测唾液中梅毒螺旋体抗体的胶体金试纸,其特征在于,包括样片垫、金标垫、硝酸纤维素膜、吸水垫和背板,所述样片垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水垫依次粘附在背板上,所述金标垫上包被有TP重组抗原I-质控组分-胶体金标记物,所述硝酸纤维素膜上分别包被有链霉亲和素-生物素-TP重组抗原II构成的检测线和质控线。

2.如权利要求1所述的用于检测唾液中梅毒螺旋体抗体的胶体金试纸,其特征在于,所述TP重组抗原I为TP重组抗原MD07,所述质控组分为鼠IgG,所述TP重组抗原II为TP重组抗原MD06,所述质控线由羊抗鼠IgG构成。

3.权利要求2所述用于检测唾液中梅毒螺旋体抗体的胶体金试纸的制备方法,包括:

S101.胶体金的制备:用氯金酸溶液和柠檬酸三钠溶液制备小颗粒胶体金溶液,再加入氯金酸溶液和巯基丁二酸溶液制备含羧基的大颗粒胶体金溶液;

S102.TP重组抗原标记:将重组抗原MD07加入大颗粒胶体金溶液中,制备TP重组抗原MD07-胶体金标记物;

S103.鼠IgG标记:将鼠IgG加入小颗粒胶体金溶液中,制备鼠IgG-胶体金标记物;

S104.金标垫的制备:将TP重组抗原MD07-胶体金标记物和鼠IgG-胶体金标记物混合后浸泡玻璃纤维,制得金标垫;

S105.TP重组抗原包被:在硝酸纤维素膜上分别包被链霉亲和素-生物素-TP重组抗原MD06构成的检测线和羊抗鼠IgG构成的质控线;

S106.试纸的制备:将样片垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水垫依次粘附在背板上,即得。

4.如权利要求3所述的用于检测唾液中梅毒螺旋体抗体的胶体金试纸的制备方法,其特征在于,所述步骤S101具体为:在圆底烧瓶中加热1L超纯水至沸腾,向沸水中加入氯金酸溶液,然后快速加入柠檬酸三钠溶液,搅拌混匀,保持溶液沸腾,直到液体呈酒红色停止加热,冷却至室温后补足1L,得到小颗粒胶体金溶液;取0.5L小颗粒胶体金溶液于三角瓶中,搅拌的同时缓慢加入氯金酸溶液和巯基丁二酸溶液,在滴加过程中溶液颜色逐渐变成深红色,待颜色不再变化停止搅拌,制得含羧基的大颗粒胶体金溶液。

5.如权利要求4所述的用于检测唾液中梅毒螺旋体抗体的胶体金试纸的制备方法,其特征在于,所述步骤S102具体为:取含羧基的大颗粒胶体金溶液,采用碳二亚胺和N-羟基硫代琥珀酰亚胺活化羧基后,离心去除上清液;加入TP重组抗原MD07使得溶液中TP重组抗原MD07浓度为0.05mg/ml,搅拌并加入BSA溶液进行封闭后,离心弃去上清液,沉淀用缓冲液悬浮,保存备用。

6.如权利要求5所述的用于检测唾液中梅毒螺旋体抗体的胶体金试纸的制备方法,其特征在于,所述步骤S103具体为:取小颗粒胶体金溶液,采用碳酸钾调节pH后,缓慢加入鼠IgG,使溶液中鼠IgG的浓度为0.01mg/ml,搅拌并加入BSA溶液进行封闭后,离心弃去上清液,沉淀用缓冲液悬浮,保存备用。

7.如权利要求6所述的用于检测唾液中梅毒螺旋体抗体的胶体金试纸的制备方法,其特征在于,所述步骤S104具体为:将TP重组抗原MD07-胶体金标记物和鼠IgG-胶体金标记物按照体积比1∶1混合后浸泡玻璃纤维,将浸泡后的玻璃纤维干燥后即得金标垫。

8.如权利要求3所述的用于检测唾液中梅毒螺旋体抗体的胶体金试纸的制备方法,其特征在于,所述步骤S105具体为:向TP重组抗原MD06溶液中加入碳酸钾溶液调整pH至8.6,将生物素-N-琥珀酰亚胺基酯溶于DMF后加入重组抗原MD06溶液中,摇匀反应后,用PBS溶液透析得到生物素-TP重组抗原MD06包被液,向包被液中加入链霉亲和素至溶液中TP重组抗原MD06浓度为1mg/ml,将链霉亲和素-生物素-TP重组抗原MD06固定于硝酸纤维素膜构成检测线;取pH7.4的PBS溶液稀释羊抗鼠IgG至溶液中羊抗鼠IgG浓度为1mg/ml,将羊抗鼠IgG固定在硝酸纤维素膜构成质控线。

9.如权利要求3所述的用于检测唾液中梅毒螺旋体抗体的胶体金试纸的制备方法,其特征在于,所述步骤S106中,所述样片垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水垫纸件分别有2mm重叠。

10.权利要求1或2所述用于检测唾液中梅毒螺旋体抗体的胶体金试纸的使用方法,包括:将样品垫擦拭上下牙龈多次后含于口腔内舌下,放置1-5min,至肉眼可见唾液样本移动至硝酸纤维素膜处,即可取出开始检测;也可将口腔采集棒的海绵取样端擦拭上下牙龈多次后放入样品稀释液收集瓶中,充分搅拌后获得样品,滴加2-3滴至样品垫上开始检测。

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