本发明涉及一种利用超高效液相色谱串接QDa同时快速检测保健酒中六种糖类物质的方法，属于检测分析
技术领域：
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背景技术：
：糖类和糖醇类均为碳水化合物，是食品以及保健酒中的天然成分，具有重要的营养价值。为了增加香味或模仿新鲜食品，加工后的食品中会添加一些糖类。近年来，随着发达国家人口肥胖症和糖尿病患病率日益增高，糖类摄入量的进一步监控需求也不断增加。因此，为满足日益严苛的法规要求，食品标签上需提供准确的糖含量信息。据现有的文献报道，糖类和糖醇类的分析极具挑战性，因为它们的化合物结构中缺乏发色团，并且各种分子间十分相似，其中许多互为异构体。现有的技术是采用液相色谱仪(配有了RI或ELS检测器)。RI检测要求对流动相进行谨慎控制，以避免在分析中发生任何变化，因此需要等度洗脱。采用RI检测时，难以在一次分析到下一次分析之间改变流动相组分，这是因为在使用不同的流动相组分时，RI检测器可能需要数小时才能达到平衡，甚至当使用一批新的相同流动相时，RI仍能检测到细小的变化而导致基线变化。在流动相组分发生变化的情况下，ELS检测相对而言更加可靠，但是ELS常常无法实现复杂食品基质中糖类检测所需的灵敏度和选择性，鉴于上述情况，建立一种同时快速检测糖类物质的方法迫在眉睫。本发明使用超高效液相色谱串接QDa检测器，完全避免了上述出现的问题，大大降低了糖类分析的难度，为保健酒酒中糖类物质的准确判定、快速检测提供科学依据。技术实现要素：本发明是为了避免上述现有技术所存在的不足之处，旨在提供一种利用超高效液相色谱串接QDa同时快速检测保健酒中六种糖类物质的方法。所述六种糖类物质为葡萄糖、果糖、蔗糖、乳糖、麦芽糖以及肌醇。本发明方法可以为保健酒中糖类物质检测的准确判定、快速检测提供科学依据。本发明利用超高效液相色谱串接QDa同时快速检测保健酒中六种糖类物质的方法，包括如下步骤：步骤1：前处理量取1.0～5.0mL待测保健酒酒样于10mL塑料离心管中，加入8～10mL体积浓度为75％的乙腈溶液，涡旋1～5min，1000转/分钟离心5～10min，0.22μm滤膜针头过滤器过滤，获得待测样品；步骤2：标准曲线的绘制用水分别配制五种食用糖(果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖和乳糖)和肌醇的1000mg/L储备液，然后以乙腈水溶液(50:50，v/v)稀释配制50mg/L的混合储备液(混合储备液中各组分的浓度均为50mg/L)；以乙腈水溶液(50:50，v/v)稀释所得混合储备液以获得不同浓度的混合标准工作溶液，采用配有QDa检测器的超高效液相色谱仪进行检测，以待测物的峰面积对其相应质量浓度进行线性回归，获得六种糖类物质的线性回归方程，各线性回归方程所对应的曲线，即为相应糖类物质的标准曲线；步骤2中，混合标准工作溶液的浓度为5～1000ng/mL，至少配制5个不同浓度的点值。步骤2中，超高效液相色谱仪的检测条件设置如下：色谱柱：2.1×150mm，1.7μm的BEHAmide糖类物质分析色谱柱；涡旋仪及移液枪；柱温为30～50℃；样品室温度为10～20℃；流动相：A相为75％的乙腈水溶液(A)，B相为10mmolNH4HCO3溶液(含有0.1％的NH4OH溶液)；流速为0.15～0.30mL/min；洗脱方式为等度洗脱，流动相A与流动相B洗脱体积比为：15:85；进样量为0.5～2μL；检测所用时间为15～20min；QDa检测器的设定条件为：系统：ACQUITYQDa质谱检测器，Performance模式；电离模式：ESI-；毛细管电压：0.8V；锥孔电压：4.0V；探头温度：600℃；采集速率：1HZ；全扫描：50-450m/z；SIR质量数见下表1：表1化合物名称SIR(m/z)形成离子的方式果糖215.1[M+CL-]-葡萄糖215.1[M+CL-]-肌醇179.2[M-H+]-乳糖377.2[M+CL-]-麦芽糖377.2[M+CL-]-蔗糖341.3[M-H+]-*说明：对每种碳水化合物进行了多个质量数监测。为了提高物质在质谱中的响应，降低物质的检出限和定量限，本发明使用新型形成离子的方式，果糖、葡萄糖、乳糖以及麦芽糖使用了加氯的方式形成氯加合物。步骤3：待测保健酒酒样的检测取步骤1获得的待测样品1.0～2.0mL，采用步骤2相同的检测条件进行检测，获得获得待测样品的色谱图，根据选择离子进行定性分析，然后根据六种糖类物质的标准曲线对待测保健酒酒样进行定量分析。对本发明方法作如下灵敏度测试：灵敏度测试包括仪器的灵敏度与方法的灵敏度，仪器的灵敏度用仪器的检出限表示，取信噪比≥3的混合标准溶液的最小浓度为仪器检出限；方法的灵敏度用方法的定量限表示，取信噪比≥9的混合标准溶液的最小浓度为方法定量限。所得的相关数据见表2。对本发明方法作如下准确性及重现性实验：选用同一个保健酒样品经前处理后作为空白样品，分为3份，分别加入混合标准工作溶液进行加标回收实验，计算回收率；选取1个保健酒样品按照同一前处理方法处理6个，分别进行实验，通过计算其相对标准偏差(RSD)的范围来判断分析方法的重现性。方法的准确性用回收率来表示，见表3，方法的重现性用相对标准偏差(RSD)来表示，见表4。可以看出回收率在80～120％，RSD＜10％。表3六种糖类物质的加标回收率实验表4六种糖物质的重现性实验本发明使用QDa质谱检测器检测，采用全扫描模式(SIR)，灵敏度满足样品低限量检测要求，同时该检测器使用方便，即插即用，不需要进行调谐，能够快速的检测白酒中的糖类物质和肌醇。六种糖类物质的检出限和定量限完全能够满足酒类样品的低含量测定要求，各化合物回收率、重现性均满足定量测试要求。本发明的有益效果体现在：1、本发明建立了一种利用超高效液相色谱串接QDa检测器同时快速检测保健酒中六种糖类物质的方法，能够准确地对白酒中的这六种物质进行定性、定量，为白酒中糖类物质的准确判定、快速检测提供科学依据。2、本发明超高效液相色谱串接QDa质谱检测器操作简单快捷、准确可靠、重复性好。3、本发明2.1×150mm,1.7μm的BEHAmide糖类物质分析色谱柱与乙腈和10mmolNH4HCO3溶液(含有0.1％的NH4OH溶液)流动相的选择对保健酒中6种糖类物质达到了优异的分离效果。4、本发明通过使用QDa检测器，不需要使用C18小柱进行纯化，直接进样测试，大大降低了检测成本。5、本发明的前处理操作步骤少，重现性和加标回收较好，从而降低了实验误差并提高了数据的准确性。6、本发明通过将保留时间和质量分析相结合，改善化合物鉴定的分析选择性。7、本发明不仅能够通过荷质比区分共洗脱组分，而且还能够在单一系统上采用多种方法，并在不同的方法条件之间快速转换。8、本次实验进样方式为直接进样，通过BEHAmide糖类物质分析色谱柱分离后，直接进入质谱检测器，可以大大提高方法的灵敏度，大大降低方法的检出限和定量限。附图说明图1为六种糖类物质混合标准工作溶液的液相色谱图。具体实施方式下面结合具体的实施例对本发明技术方案做进一步阐述。1、前处理量取5.0mL待测保健酒酒样于10mL塑料离心管中，加入10mL体积浓度为75％的乙腈溶液，涡旋2min，1000转/分钟离心5～10min，0.22μm滤膜针头过滤器过滤，获得待测样品；2、检测条件设定超高效液相色谱仪的检测条件设置如下：色谱柱：2.1×150mm，1.7μm的BEHAmide糖类物质分析色谱柱；涡旋仪及移液枪；柱温为40℃；样品室温度为15℃；流动相：A相为75％的乙腈水溶液(A)，B相为10mmolNH4HCO3溶液(含有0.1％的NH4OH溶液)；流速为0.15mL/min；洗脱方式为等度洗脱，等度洗脱时流动相A与流动相B体积比为：15:85；进样量为0.7μL；检测所用时间为17min；QDa检测器的设定条件为：系统：ACQUITYQDa质谱检测器，Performance模式；电离模式：ESI-；毛细管电压：0.8V；锥孔电压：4.0V；探头温度：600℃；采集速率：1HZ；全扫描：50-450m/z；SIR质量数见下表1：表1化合物名称SIR(m/z)形成离子的方式果糖215.1[M+CL-]-葡萄糖215.1[M+CL-]-肌醇179.2[M-H+]-乳糖377.2[M+CL-]-麦芽糖377.2[M+CL-]-蔗糖341.3[M-H+]-3、标准曲线的绘制用水分别配制五种食用糖(果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖和乳糖)和肌醇的1000mg/L储备液，然后以乙腈水溶液(50:50，v/v)稀释配制50mg/L的混合储备液(混合储备液中各组分的浓度均为50mg/L)；以乙腈水溶液(50:50，v/v)稀释所得混合储备液以获得不同浓度的混合标准工作溶液，采用配有QDa检测器的超高效液相色谱仪以步骤2的设定参数进行检测，以待测物的峰面积对其相应质量浓度进行线性回归，获得六种糖类物质的线性回归方程，各线性回归方程所对应的曲线，即为相应糖类物质的标准曲线；混合标准工作溶液的浓度为5～1000ng/mL，分别为5ng/ml，50ng/ml，200ng/ml，500ng/ml，1000ng/ml；所述六种糖类物质对应的线性回归方程及相关系数r2见下表2。表2六种糖类物质的线性回归方程、相关系数、检出限、定量限4、待测保健酒酒样的检测取步骤1获得的待测样品1.0～2.0mL，采用步骤2的检测条件进行检测，获得获得待测样品的色谱图，根据选择离子进行定性分析，然后根据六种糖类物质的标准曲线对待测保健酒酒样进行定量分析。本方法的检测数据与现有的方法检测数据对比数据见下表5。表5本方法的检测数据与现有的方法检测数据对比数据从表5中数据可以看出，同种样品使用现有的方法与本方法相比，本方法的检出限较低，使用本方法能够检测到现有方法检测不到的含量，在两种方法检出限以上的含量，使用两种方法都能够检测到，两种方法检测的数据在合理的误差范围内，通过检测数据可以充分说明本方法优于现有的方法，能够准确的对6中糖类物质进行定量。当前第1页1 2 3