稻-渔体系养殖的水产品中二甲戊灵的提取和检测方法与流程

本发明涉及农药残留检测技术领域，特别涉及一种稻-渔体系养殖的水产品中二甲戊灵的提取和检测方法。

背景技术

二甲戊灵(pendimethalin)属于二硝基苯胺类除草剂，已经成为仅次于草甘膦和百草枯之后的第三大除草剂。其主要防除对象是一年生禾本科杂草、部分阔叶杂草，可广泛用于玉米、大豆、大蒜、葱、甘蓝、烟草、花生、棉花、水稻等多种作物农田除草。随着二甲戊灵的大量使用，二甲戊灵的生态毒性越来越多的引起人们的关注。有研究表明，二甲戊灵对水生动物有一定的毒性，而且是人类可疑致癌物。美国环境保护署把二甲戊灵分类于持久性、生物累积性和毒性物质(毒性分类iii)，可能的致癌毒性(等级c)。随着稻渔种养模式的推广，二甲戊灵在稻-渔体系养殖的水产品(如克氏原螯虾、青虾、中华原螯蟹、泥鳅等)中的残留问题越来越引起人们的关心。因此，对稻-渔体系养殖的水产品中二甲戊灵进行准确检测显得十分重要。

技术实现要素：

本发明实施例提供了一种稻-渔体系养殖的水产品中二甲戊灵的提取和检测方法，通过尽可能完全的从稻-渔体系养殖的水产品中提取二甲戊灵，实现对水产品中二甲戊灵的检测，同时保证了检测的准确性。

一种稻-渔体系养殖的水产品中二甲戊灵的提取方法，其特征在于，包括：

称取(5.00±0.01)g~(10.00±0.01)g水产品样品；

利用含0.1%乙酸的乙酸乙酯溶液萃取所述水产品样品至少两次；

将萃取得到的上清液旋蒸至干；

利用甲醇/水溶液(8:2，v/v，含0.1%乙酸)溶解旋蒸后的残渣，得到萃取浓缩液；

利用净化材料净化所述萃取浓缩液。

可选地，

所述利用含0.1%乙酸的乙酸乙酯溶液萃取所述水产品样品至少两次，包括：

将不小于15ml含0.1%乙酸的乙酸乙酯溶液与所述水产品样品混匀，在室温下超声振荡提取至少5min；

以至少4000r/min离心5min，分离出上层清液；

对分离后的下层沉积物重复萃取一次，合并两次萃取分离出的上层清液。

可选地，

所述利用净化材料净化所述萃取浓缩液，包括：

将所述浓缩液过酸性氧化铝柱后，加入0.1g石墨化碳黑粉，以至少4000r/min离心5min，取上层清液。

可选地，

上述提取方法进一步包括：

取水产品的可食部分，处理成不大于0.5cm×0.5cm×0.5cm的小块，混匀，高速搅碎并充分搅匀，获得水产品样品，密封，标记，于-18℃冷冻保存，备用。

可选地，

所述水产品样品，包括：

克氏原螯虾可食肌肉部分、青虾可食肌肉部分、中华绒螯蟹可食部分、黄鳝可食肌肉部分以及泥鳅可食肌肉部分中的任意一种。

一种稻-渔体系养殖的水产品中二甲戊灵的检测方法，其特征在于，利用上述任一所述的稻-渔体系养殖的水产品中二甲戊灵的提取方法，从水产品样品中提取二甲戊灵，获得净化后的萃取浓缩液；还包括：

量取1ml净化后的所述萃取浓缩液；

通过高效液相色谱-串联三重四极杆质谱仪对量取的所述萃取浓缩液进行检测，其中，色谱条件：symmetryc18液相色谱柱(100mm×2.1mm×3.5μm)；柱温为35℃；流速为0.3ml/min；流动相为：a：80%甲醇，b：20%水(含0.1%乙酸)，进样量为10μl；质谱条件：加热大气压电喷雾hesi作为质谱离子源；离子化模式：正离子模式；扫描方式：选择离子反应监测模式（srm）；喷雾电压：3500v；蒸发气温度：200℃；鞘气和辅助气均为高纯氮气，压力均为5bar；碰撞气为高纯氩气，1.5mtorr；离子传输毛细管温度：350℃；q1pw0.7，q3pw0.7。监测离子对：二甲戊灵m/z：282.1/211.9（定量离子）、282.1/193.9，碰撞压力分别为17v、11v。

可选地，

进一步包括：

用上述任一所述的提取方法提取空白水产品样品，制备得到空白样品溶液；

用甲醇配制质量浓度为100mg/l的二甲戊灵标准储备液；

利用所述空白样品溶液稀释所述二甲戊灵标准储备液，配制质量浓度为1.0、2.0、5.0、10.0、20.0µg/l的空白基质匹配标准液；

构建系列空白基质匹配标准液的色谱峰面积与浓度之间的关系式；

根据所述关系式和检测获得的二甲戊灵的峰面积，计算得到水产品样品中二甲戊灵的浓度。

可选地，

所述养殖对象样品，包括：

克氏原螯虾可食肌肉部分、青虾可食肌肉部分、中华绒螯蟹可食部分、黄鳝可食肌肉部分以及泥鳅可食肌肉部分中的任意一种。

本发明实施例提供了一种稻-渔体系养殖的水产品中二甲戊灵的提取和检测方法，通过称取(5.00±0.01)g~(10.00±0.01)g水产品样品；利用含0.1%乙酸的乙酸乙酯溶液萃取所述水产品样品至少两次；将萃取得到的上清液旋蒸至干；利用甲醇/水溶液(8:2，v/v，含0.1%乙酸)溶解旋蒸后的残渣，得到萃取浓缩液；利用净化材料净化所述萃取浓缩液，通过高效液相色谱-串联三重四极杆质谱仪进行检测，通过实验结果表明，上述提取过程能够比较完全的提取出水产品样品中二甲戊灵，同时能够尽可能的避免了提取出其他杂质，提取的完整性以及减少杂质的干扰，保证了检测的准确性。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1是本发明一个实施例提供的一种稻-渔体系养殖的水产品中二甲戊灵的提取方法的流程图；

图2是本发明一个实施例提供的二甲戊灵标准溶液的色谱图；

图3是本发明一个实施例提供的空白克氏原螯虾加标样品的色谱图。

具体实施方式

为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例，基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

稻-渔体系是指在水稻田中养殖水产品如克氏原螯虾、青虾、中华绒螯蟹、黄鳝以及泥鳅等等，因此对稻-渔体系养殖的水产品进行检测，可以监控水产品如克氏原螯虾、青虾、中华绒螯蟹、黄鳝以及泥鳅等的安全性。另外，由于二甲戊灵量非常低，同时，水产品的杂质很多，因此，需要通过对其存在的二甲戊灵进行提取，以排除杂质干扰，并得到浓缩的二甲戊灵。而能够比较完全的提取二甲戊灵以及尽量减少对杂质的提取，有助于提高二甲戊灵检测的准确性。

如图1所示，本发明实施例提供了一种稻-渔体系养殖的水产品中二甲戊灵的提取方法，该方法可以包括以下步骤：

步骤101：称取(5.00±0.01)g~(10.00±0.01)g水产品样品；

步骤102：利用含0.1%乙酸的乙酸乙酯溶液萃取所述水产品样品至少两次；

步骤103：将萃取得到的上清液旋蒸至干；

步骤104：利用甲醇/水溶液(8:2，v/v，含0.1%乙酸)溶解旋蒸后的残渣，得到萃取浓缩液；

步骤105：利用净化材料净化所述萃取浓缩液。

在图1所示的实施例中，通过称取(5.00±0.01)g~(10.00±0.01)g水产品样品；利用含0.1%乙酸的乙酸乙酯溶液萃取所述水产品样品至少两次；将萃取得到的上清液旋蒸至干；利用甲醇/水溶液(8:2，v/v，含0.1%乙酸)溶解旋蒸后的残渣，得到萃取浓缩液；利用净化材料净化所述萃取浓缩液，通过高效液相色谱-串联三重四极杆质谱仪进行检测，通过实验结果表明，上述提取过程能够比较完全的提取出水产品样品中二甲戊灵，同时能够尽可能的避免了提取出其他杂质，提取的完整性以及减少杂质的干扰，保证了检测的准确性。

在整个提取过程中，保证二甲戊灵始终处于0.1%乙酸的环境中，能够使得二甲戊灵一直处于稳定状态，从而使后续的检测比较准确。

在本发明一个实施例中，为了能够尽量避免萃取出不必要的杂质，上述步骤102利用含0.1%乙酸的乙酸乙酯溶液萃取所述水产品样品至少两次的具体实施方式：将不小于15ml含0.1%乙酸的乙酸乙酯溶液与所述水产品样品混匀，在室温下超声振荡提取至少5min；以至少4000r/min离心5min，分离出上层清液；对分离后的下层沉积物重复萃取一次，合并两次萃取分离出的上层清液。

在对水产品中二甲戊灵进行提取的过程中，为了能够从水产品的脂肪中尽可能完整的萃取出二甲戊灵，而避免其它物质如色素等其他杂质被萃取出来，选用乙酸乙酯溶液萃取至少两次，并且乙酸乙酯作为萃取溶剂时，对水产品样品进行萃取，萃取液澄清透明，获得的色谱图杂峰较少，且峰形好，灵敏度高，回收率可达90%左右。说明乙酸乙酯溶液作为萃取溶剂，几乎没有萃取出水产品中的杂质，且回收率高。

另外，选用甲醇/水溶液(8:2，v/v，含0.1%乙酸)溶解旋蒸后的残渣，是因为甲醇/水溶液(8:2，v/v，含0.1%乙酸)溶解后的残渣在进行后续检测过程中，形成的色谱峰，峰宽较窄，且峰形尖锐，灵敏度高。

另外，对于水产品样品的制备，包括：为水产品去头、去壳、取可食肌肉部分，将可食肌肉部分切成不大于0.5cm×0.5cm×0.5cm的小块，混匀，用高速搅碎机搅碎后混匀，密封，于-18℃冷冻保存，备用。

利用净化材料净化所述萃取浓缩液的具体实施方式：将所述浓缩液过酸性氧化铝柱后，加入0.1g石墨化碳黑粉，以至少4000r/min离心5min，取上层清液。通过该净化过程，可以使二甲戊灵的回收率达到95%以上，回收率越高，使得后续检测的准确性也越高。

上述的水产品样品，包括：克氏原螯虾可食肌肉部分、青虾可食肌肉部分、中华绒螯蟹可食部分、黄鳝可食肌肉部分以及泥鳅可食肌肉部分中的任意一种。

一种稻-渔体系养殖的水产品中二甲戊灵的检测方法，包括：

利用上述任一所述的稻-渔体系养殖的水产品中二甲戊灵的提取方法，从水产品样品中提取二甲戊灵，获得净化后的萃取浓缩液；

量取1ml净化后的所述萃取浓缩液；

通过高效液相色谱-串联三重四极杆质谱仪对量取的所述萃取浓缩液进行检测，其中，色谱条件：symmetryc18液相色谱柱(100mm×2.1mm×3.5μm)；柱温为35℃；流速为0.3ml/min；流动相为：a：80%甲醇，b：20%水(含0.1%乙酸)，进样量为10μl；质谱条件：加热大气压电喷雾hesi作为质谱离子源；离子化模式：正离子模式；扫描方式：选择离子反应监测模式（srm）；喷雾电压：3500v；蒸发气温度：200℃；鞘气和辅助气均为高纯氮气，压力均为5bar；碰撞气为高纯氩气，1.5mtorr；离子传输毛细管温度：350℃；q1pw0.7，q3pw0.7。监测离子对：二甲戊灵m/z：282.1/211.9（定量离子）、282.1/193.9，碰撞压力分别为17v、11v。

为了验证上述提取方法和检测方法的可行性，按照上述提取方法不含二甲戊灵的空白克氏原螯虾组织，并添加一定含量的二甲戊灵标准溶液，利用上述检测方法给出的色谱条件和质谱条件进行检测，并对检测结果进行分析，根据7个空白样品组织基线噪音的平均值，按s/n=3和s/n=10计算方法的检出限和定量限，分别为0.2µg/kg和0.6µg/kg，满足残留分析的要求。

按照上述提取方法、检测方法给出的色谱条件和质谱条件检测二甲戊灵标准溶液、空白克氏原螯虾加标样品，获得的色谱图如图2和图3所示，从图2和图3可以看出，通过上述色谱条件和质谱条件，可以使二甲戊灵出峰时间在5min左右，且峰比较光滑尖锐，没有拖尾，峰形较好。

为了得到水产品中二甲戊灵的具体浓度，在本发明另一实施例中，进一步包括：

用上述任一所述的提取方法提取空白水产品样品，制备得到空白样品溶液；

用甲醇配制质量浓度为100mg/l的二甲戊灵标准储备液；

利用所述空白样品溶液稀释所述二甲戊灵标准储备液，配制质量浓度为1.0、2.0、5.0、10.0、20.0µg/l的空白基质匹配标准液；

构建系列空白基质匹配标准液的色谱峰面积与浓度之间的关系式；

根据所述关系式和检测获得的二甲戊灵的峰面积，计算得到水产品样品中二甲戊灵的浓度。

其中，用蠕动泵将空白基质匹配标准液注入esi源，在正离子检测方式下对二甲戊灵进行一级质谱分析时，采用空白基质匹配标准液随甲醇/水溶液（8:2，v/v，含0.1%乙酸）的流动相注入方式，该种注入方式使目标离子峰很明显，响应较高。

其中，构建系列空白基质匹配标准液的色谱峰面积与浓度之间的关系式的具体方式：

以二甲戊灵的色谱峰面积为纵坐标(y)、对应的质量浓度为横坐标(x，mg/l)绘制空白基质匹配标准工作曲线。结果显示，二甲戊灵在1.0-20.0µg/l范围内线性相关，线性方程为y=281453.07x+143052.24，相关系数(r²)为0.9947。

上述检测方法针对的水产品样品，包括：克氏原螯虾可食肌肉部分、青虾可食肌肉部分、中华绒螯蟹可食部分、黄鳝可食肌肉部分以及泥鳅可食肌肉部分中的任意一种。

为了能够清楚地说明稻-渔体系养殖的水产品中二甲戊灵的提取和检测方法，下面以几个具体的实施例展开论述。

预先构建色谱峰与二甲戊灵浓度之间的关系式：

提取空白水产品样品，制备得到空白样品溶液；

用甲醇配制质量浓度为100mg/l的二甲戊灵标准储备液；

利用所述空白样品溶液稀释所述二甲戊灵标准储备液，配制质量浓度为1.0、2.0、5.0、10.0、20.0µg/l的空白基质匹配标准液；

构建系列空白基质匹配标准液的色谱峰面积与浓度之间的关系式；

以二甲戊灵的色谱峰面积为纵坐标(y)、对应的质量浓度为横坐标(x，mg/l)绘制空白基质匹配标准工作曲线。结果显示，二甲戊灵在1.0-20.0µg/l范围内线性相关，线性方程为y=281453.07x+143052.24，相关系数(r²)为0.9947；

实施例1：

提取并检测稻-克氏原螯虾混养体系中克氏原螯虾中二甲戊灵残留：

克氏原螯虾去头、去壳、去虾线，取可食肌肉部分，处理成不大于0.5cm×0.5cm×0.5cm的小块，混匀，高速搅碎并充分搅匀，获得克氏原螯虾样品，密封，标记，于-18℃冷冻保存，备用；

称取(5.00±0.01)g克氏原螯虾样品，置于50ml具塞离心管中，将15ml含0.1%乙酸的乙酸乙酯溶液与所述克氏原螯虾样品，漩涡混匀1min，在室温下超声振荡提取5min；以5000r/min离心5min，分离出上层清液至鸡心瓶中；对分离后的下层沉积物重复萃取一次，合并两次萃取分离出的上层清液；将萃取得到的上清液旋蒸至干；利用2ml甲醇/水溶液(8:2，v/v，含0.1%乙酸)溶解旋蒸后的残渣，得到萃取浓缩液；将所述浓缩液过酸性氧化铝柱后，加入0.1g石墨化碳黑粉，以5000r/min离心5min，取上层清液；

量取1ml上层清液；通过高效液相色谱-串联三重四极杆质谱仪对量取的所述萃取浓缩液进行检测，其中，色谱条件：symmetryc18液相色谱柱(100mm×2.1mm×3.5μm)；柱温为35℃；流速为0.3ml/min；流动相为：a：80%甲醇，b：20%水(含0.1%乙酸)，进样量为10μl；质谱条件：加热大气压电喷雾hesi作为质谱离子源；离子化模式：正离子模式；扫描方式：选择离子反应监测模式（srm）；喷雾电压：3500v；蒸发气温度：200℃；鞘气和辅助气均为高纯氮气，压力均为5bar；碰撞气为高纯氩气，1.5mtorr；离子传输毛细管温度：350℃；q1pw0.7，q3pw0.7。监测离子对：二甲戊灵m/z：282.1/211.9（定量离子）、282.1/193.9，碰撞压力分别为17v、11v。

实施例2：

提取并检测稻-青虾混养体系中青虾中二甲戊灵残留：

青虾去头、去壳、去虾线，取可食肌肉部分，处理成不大于0.5cm×0.5cm×0.5cm的小块，混匀，高速搅碎并充分搅匀，获得青虾样品，密封，标记，于-18℃冷冻保存，备用；

称取(8.00±0.01)g青虾样品，置于50ml具塞离心管中，将25ml含0.1%乙酸的乙酸乙酯溶液与所述青虾样品，漩涡混匀1min，在室温下超声振荡提取10min；以4000r/min离心5min，分离出上层清液至鸡心瓶中；对分离后的下层沉积物重复萃取一次，合并两次萃取分离出的上层清液；将萃取得到的上清液旋蒸至干；利用2ml甲醇/水溶液(8:2，v/v，含0.1%乙酸)溶解旋蒸后的残渣，得到萃取浓缩液；将所述浓缩液过酸性氧化铝柱后，加入0.1g石墨化碳黑粉，以6000r/min离心5min，取上层清液；

量取1ml上层清液；通过高效液相色谱-串联三重四极杆质谱仪对量取的所述萃取浓缩液进行检测，其中，色谱条件：symmetryc18液相色谱柱(100mm×2.1mm×3.5μm)；柱温为35℃；流速为0.3ml/min；流动相为：a：80%甲醇，b：20%水(含0.1%乙酸)，进样量为10μl；质谱条件：加热大气压电喷雾hesi作为质谱离子源；离子化模式：正离子模式；扫描方式：选择离子反应监测模式（srm）；喷雾电压：3500v；蒸发气温度：200℃；鞘气和辅助气均为高纯氮气，压力均为5bar；碰撞气为高纯氩气，1.5mtorr；离子传输毛细管温度：350℃；q1pw0.7，q3pw0.7。监测离子对：二甲戊灵m/z：282.1/211.9（定量离子）、282.1/193.9，碰撞压力分别为17v、11v。

实施例3：

提取并检测稻-中华绒螯蟹混养体系中青虾中二甲戊灵残留：

中华绒螯蟹去头、去壳，取可食肌肉部分，处理成不大于0.5cm×0.5cm×0.5cm的小块，混匀，高速搅碎并充分搅匀，获得中华绒螯蟹样品，密封，标记，于-18℃冷冻保存，备用；

称取(10.00±0.01)g中华绒螯蟹样品，置于50ml具塞离心管中，将35ml含0.1%乙酸的乙酸乙酯溶液与所述中华绒螯蟹样品，漩涡混匀1min，在室温下超声振荡提取10min；以8000r/min离心5min，分离出上层清液至鸡心瓶中；对分离后的下层沉积物重复萃取一次，合并两次萃取分离出的上层清液；将萃取得到的上清液旋蒸至干；利用2ml甲醇/水溶液(8:2，v/v，含0.1%乙酸)溶解旋蒸后的残渣，得到萃取浓缩液；将所述浓缩液过酸性氧化铝柱后，加入0.1g石墨化碳黑粉，以5000r/min离心5min，取上层清液；

量取1ml上层清液；通过高效液相色谱-串联三重四极杆质谱仪对量取的所述萃取浓缩液进行检测，其中，色谱条件：symmetryc18液相色谱柱(100mm×2.1mm×3.5μm)；柱温为35℃；流速为0.3ml/min；流动相为：a：80%甲醇，b：20%水(含0.1%乙酸)，进样量为10μl；质谱条件：加热大气压电喷雾hesi作为质谱离子源；离子化模式：正离子模式；扫描方式：选择离子反应监测模式（srm）；喷雾电压：3500v；蒸发气温度：200℃；鞘气和辅助气均为高纯氮气，压力均为5bar；碰撞气为高纯氩气，1.5mtorr；离子传输毛细管温度：350℃；q1pw0.7，q3pw0.7。监测离子对：二甲戊灵m/z：282.1/211.9（定量离子）、282.1/193.9，碰撞压力分别为17v、11v。

实施例4：

提取并检测稻-黄鳝混养体系中青虾中二甲戊灵残留：

黄鳝去头，取可食肌肉部分，处理成不大于0.5cm×0.5cm×0.5cm的小块，混匀，高速搅碎并充分搅匀，获得黄鳝样品，密封，标记，于-18℃冷冻保存，备用；

称取(5.00±0.01)g黄鳝样品，置于50ml具塞离心管中，将15ml含0.1%乙酸的乙酸乙酯溶液与所述黄鳝样品，漩涡混匀1min，在室温下超声振荡提取10min；以5000r/min离心5min，分离出上层清液至鸡心瓶中；对分离后的下层沉积物重复萃取一次，合并两次萃取分离出的上层清液；将萃取得到的上清液旋蒸至干；利用2ml甲醇/水溶液(8:2，v/v，含0.1%乙酸)溶解旋蒸后的残渣，得到萃取浓缩液；将所述浓缩液过酸性氧化铝柱后，加入0.1g石墨化碳黑粉，以4000r/min离心5min，取上层清液；

量取1ml上层清液；通过高效液相色谱-串联三重四极杆质谱仪对量取的所述萃取浓缩液进行检测，其中，色谱条件：symmetryc18液相色谱柱(100mm×2.1mm×3.5μm)；柱温为35℃；流速为0.3ml/min；流动相为：a：80%甲醇，b：20%水(含0.1%乙酸)，进样量为10μl；质谱条件：加热大气压电喷雾hesi作为质谱离子源；离子化模式：正离子模式；扫描方式：选择离子反应监测模式（srm）；喷雾电压：3500v；蒸发气温度：200℃；鞘气和辅助气均为高纯氮气，压力均为5bar；碰撞气为高纯氩气，1.5mtorr；离子传输毛细管温度：350℃；q1pw0.7，q3pw0.7。监测离子对：二甲戊灵m/z：282.1/211.9（定量离子）、282.1/193.9，碰撞压力分别为17v、11v。

实施例5：

提取并检测稻-泥鳅混养体系中泥鳅中二甲戊灵残留：

泥鳅去头，取可食肌肉部分，处理成不大于0.5cm×0.5cm×0.5cm的小块，混匀，高速搅碎并充分搅匀，获得泥鳅样品，密封，标记，于-18℃冷冻保存，备用；

称取(10.00±0.01)g黄鳝样品，置于50ml具塞离心管中，将40ml含0.1%乙酸的乙酸乙酯溶液与所述泥鳅样品，漩涡混匀1min，在室温下超声振荡提取10min；以4000r/min离心10min，分离出上层清液至鸡心瓶中，对分离后的下层沉积物重复萃取一次，合并两次萃取分离出的上层清液；将萃取得到的上清液旋蒸至干；利用2ml甲醇/水溶液(8:2，v/v，含0.1%乙酸)溶解旋蒸后的残渣，得到萃取浓缩液；将所述浓缩液过酸性氧化铝柱后，加入0.1g石墨化碳黑粉，以7000r/min离心5min，取上层清液；

量取1ml上层清液；通过高效液相色谱-串联三重四极杆质谱仪对量取的所述萃取浓缩液进行检测，其中，色谱条件：symmetryc18液相色谱柱(100mm×2.1mm×3.5μm)；柱温为35℃；流速为0.3ml/min；流动相为：a：80%甲醇，b：20%水(含0.1%乙酸)，进样量为10μl；质谱条件：加热大气压电喷雾hesi作为质谱离子源；离子化模式：正离子模式；扫描方式：选择离子反应监测模式（srm）；喷雾电压：3500v；蒸发气温度：200℃；鞘气和辅助气均为高纯氮气，压力均为5bar；碰撞气为高纯氩气，1.5mtorr；离子传输毛细管温度：350℃；q1pw0.7，q3pw0.7。监测离子对：二甲戊灵m/z：282.1/211.9（定量离子）、282.1/193.9，碰撞压力分别为17v、11v。

实施例6：

提取并检测稻-克氏原螯虾体系克氏原螯虾中二甲戊灵：

其提取与检测条件与实施例3一致，在此不再赘述。

实施例7：

提取并检测稻-克氏原螯虾体系克氏原螯虾中二甲戊灵：

其提取与检测条件与实施例5一致，在此不再赘述。

实施例8：

提取并检测稻-克氏原螯虾体系克氏原螯虾中二甲戊灵：

其提取与检测条件与实施例4一致，在此不再赘述。

实施例9：

提取并检测稻-中华绒螯蟹体系克氏原螯虾中二甲戊灵：

其提取与检测条件与实施例1一致，在此不再赘述。

上述实施例1至9的检测结果显示，只有实施例1和实施例7两个样品有二甲戊灵检出，浓度分别为0.803µg/kg和0.711µg/kg。

为了进一步验证上述提取方法和检测方法的可行性，选取实施例1、实施例6和实施例8进行加标回收实验，加标回收实验过程：分别添加低、中、高（1.2、6.0、12.0µg/kg）的3个水平的二甲戊灵标准品，每个添加水平同时做7个平行样品。计算结果的相对标准偏差为6.89%-14.52%（n=7），回收率在63.33%-104.65%（n=7）。如表1所示。

表1

上述实施例至少具有如下有益效果：

1、通过称取(5.00±0.01)g~(10.00±0.01)g水产品样品；利用含0.1%乙酸的乙酸乙酯溶液萃取所述水产品样品至少两次；将萃取得到的上清液旋蒸至干；利用甲醇/水溶液(8:2，v/v，含0.1%乙酸)溶解旋蒸后的残渣，得到萃取浓缩液；利用净化材料净化所述萃取浓缩液，通过高效液相色谱-串联三重四极杆质谱仪进行检测，通过实验结果表明，上述提取过程能够比较完全的提取出水产品样品中二甲戊灵，同时能够尽可能的避免了提取出其他杂质，提取的完整性以及减少杂质的干扰，保证了检测的准确性。

2、本发明实施例提供的稻-渔体系养殖的水产品中二甲戊灵的提取方法，主要通过一些简单的操作如萃取、洗脱、净化即可提取出二甲戊灵，其在提取过程中所选用的材料简单易的，使该提取过程操作简单。

3、本发明提供的提取方法对稻-渔体系养殖的水产品中二甲戊灵提取过程中，提取出的吡虫啉的回收率可达95%以上，因此，本发明提供的提取方法回收率较高。

4、本发明提供的检测方法对稻-渔体系养殖的水产品中二甲戊灵可检测出微克级的含量，因此，本发明提供的检测方法灵敏度高。

5、本发明提供的检测方法对稻-渔体系养殖的水产品中二甲戊灵获得的二甲戊灵峰形尖锐、对称，无杂质峰干扰，使得检测结果更加准确。

需要说明的是，在本文中，诸如第一和第二之类的关系术语仅仅用来将一个实体或者操作与另一个实体或操作区分开来，而不一定要求或者暗示这些实体或操作之间存在任何这种实际的关系或者顺序。而且，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。在没有更多限制的情况下，由语句“包括一个······”限定的要素，并不排除在包括所述要素的过程、方法、物品或者设备中还存在另外的相同因素。

最后需要说明的是：以上所述仅为本发明的较佳实施例，仅用于说明本发明的技术方案，并非用于限定本发明的保护范围。凡在本发明的精神和原则之内所做的任何修改、等同替换、改进等，均包含在本发明的保护范围内。