本发明属于纳米材料和分析化学领域，具体涉及一种钴镍纳米线阵列及其制备方法与应用。
背景技术
纳米酶是具有类酶特征的纳米材料。纳米酶作为人工酶领域的一个新兴研究领域，在与天然酶和经典人工酶相比之下，由于其独特的性质，引起了研究人员的极大兴趣。(h.weiande.k.wang,chem.soc.rev.,2013,42,6060-6093；l.z.gaoandx.y.yan,prog.biochem.biophys.,2013,40,892-902。)与天然酶相比，纳米酶在几个方面具有优势，例如成本低，可以进行批量生产，高稳定性，可以长期储存，以及有良好的尺寸和结构。此外，纳米酶与其他人工酶相比，在以下几个方面表现出其独特的性质，比如尺寸(形状，结构，组成)所决定的催化活性，有较大的表面积可用于进一步修饰和生物缀合，对外界刺激的响应特别灵敏，有自组装能力等。到目前为止，已经有许多纳米材料被用来模拟各种天然酶，如过氧化氢酶，氧化酶，过氧化物酶，超氧化物歧化酶(sod)，酯酶，核酸酶，磷酸酶，蛋白酶和铁氧化酶。(s.perrettandx.yan,nat.nanotechnol.,2007,2,577-583；x.zhangandv.m.rotello,small,2012,8,3589-3592.)但是这些纳米粒子一般只是具有类过氧化氢酶或者类氧化酶性质，具有多种类酶性质的模拟酶报道不多。
技术实现要素：
本发明的第一个目的在于提供一种通过水热原位生长的方法合成钴镍纳米线阵列材料。
所述钴镍纳米线阵列的制备方法，具体包括如下步骤：
1)将氯化钴、氯化镍、尿素、氟化铵溶于水中，充分混合后，再加入骨架结构后，将其置于高温高压的环境下，反应获得钴镍纳米线阵列前体；
2)将所述钴镍纳米线阵列前体加入葡萄糖溶液中，在高温高压的环境下，进行反应；
3)将步骤2)反应后获得样品置于惰性气氛下，在280～350℃的温度下，煅烧1～5h，即得钴镍纳米线阵列。
步骤1)中，所述氯化钴与所述氯化镍的摩尔比为1:0.5～2，优选为1:0.8～1.2；更优选为1:1.
本发明采用的生长方法，其氯化钴、氯化镍在尿素存在的情况下进行；其中，尿素有效果提供碳酸根、氢氧根等，有利于反应；本申请优选所述氯化钴与所述尿素的摩尔比为2:4～6，优选为2:4.5～5.5，更优选为2:5。
所述氯化钴与所述氟化铵的摩尔比为1:2～6，优选为1:3～5；更优选为1:4。
本发明的步骤1)需要严格控制水的加入；其中，每15ml的所述水中加入1～1.5mmol的所述氯化钴；优选每15ml水中加入1.2mmol的所述氯化钴。
本发明进一步提出的，本发明所述的氟化铵可替换为十六烷基三甲基溴化胺。
本发明进一步提出的，所述的骨架结构优选采用泡沫镍，所使用的泡沫镍包括预处理，所述预处理具体为：将泡沫镍放入强酸溶液中超声10～20min，洗净干燥后，再放入丙酮中，超声10～20min，洗净干燥，即可。
所述强酸为常规有机酸和无机酸，例如盐酸。
本发明进一步提出的，所述步骤1)中，压力为1.6～2.4个大气压；温度为80～100℃。
所述步骤1)具体为：将氯化钴、氯化镍、尿素、氟化铵溶于水中，充分混合后，再加入骨架结构后，将其置于压力为1.6～2.4个大气压、温度为80～100℃的环境下5～10h，获得钴镍纳米线阵列前体；
所述步骤1)还包括清洁和干燥；具体为：将反应后的样品冷却至室温，将钴镍纳米线阵列前体采用无水乙醇和二次水交替冲洗5～10次，然后置于50～70℃的温度下，烘干，即可。
本发明进一步提出的，所述步骤2)中，在所述钴镍纳米线阵列前体的表层包裹一层碳膜，所述碳膜优选为葡萄糖；而且所述葡萄糖的浓度会直接影响碳膜在所述钴镍纳米线阵列前体表层的包覆厚度；其厚度的大小会影响最终钴镍纳米线阵列的性能。
本发明优选采用浓度为0.10～0.20mol/l的葡萄糖溶液；当所述葡萄糖溶液的浓度为0.15mol/l，包覆厚度最为适宜。
本发明进一步提出的，所述步骤2)中，压力为4.5～5.2个大气压；温度为160～200℃；
所述步骤2)具体为：将所述钴镍纳米线阵列前体加入浓度为0.10～0.20mol/l的葡萄糖溶液中，在压力为4.5～5.2个大气压、温度为160～200℃的环境下，反应2～4h；
所述步骤2)的反应后还包括清洁和干燥；具体操作与步骤1)所述的清洁和干燥一致。
本发明进一步提出的，所述步骤3)具体为：将步骤2)反应后获得样品置于惰性气氛下，在280～320℃的温度下，煅烧2～4h，即得钴镍纳米线阵列。
本发明所述的煅烧可采用常规仪器进行，例如管式马弗炉。
本发明提供一种优选方法，所述钴镍纳米线阵列的制备方法，具体包括如下步骤：
1)氯化钴、氯化镍、尿素、氟化铵按摩尔比2:1.6～2.4:4.5～5.5:3～10的比例计，将氯化钴、氯化镍、尿素、氟化铵溶于水中，充分混合后，再加入泡沫镍后，将其置于压力为1.6～2.4个大气压、温度为80～100℃的环境下，反应5～8h；，获得钴镍纳米线阵列前体；
其中，每15ml水中加入1.2mmol的所述氯化钴；
2)将所述钴镍纳米线阵列前体加入浓度0.15mol/l葡萄糖溶液中，在压力为4.5～5.2个大气压、温度为160～200℃的环境下，反应2～4h；
3)将步骤2)反应后获得的样品置于惰性气氛下，在280～320℃的温度下，煅烧2～4h，即得钴镍纳米线阵列。
其中，所述氯化钴、氯化镍、尿素、氟化铵的摩尔比最优选为2:2:5:8。
本发明所制得钴镍纳米线阵列稳定良好，结构均一，所述钴镍纳米线阵列的高度为7～9μm。
本发明所制得钴镍纳米线阵列具有类过氧化氢酶和类歧化酶两种类酶性质。所述钴镍纳米线阵列的催化活性具有良好的稳定性，可多次重复使用，且易于分离。特别是，本申请所制得的钴镍纳米线阵列有类过氧化氢酶性质；在此基础上，可建立一种检测生物小分子的比色方法。所述生物小分子如过氧化氢(h2o2)和葡萄糖(glucose)。
在h2o2或葡萄糖的存在的情况下，上述钴镍纳米线阵列可催化氧化3，3′，5，5′-四甲基联苯胺(tmb)，其获得的氧化产物oxtmb(氧化态tmb)。氧化产物oxtmb呈现明显的蓝色，在652nm处具有很强的可见光吸收。
本发明的另一目的在于，提供一种用于检测生物小分子的比色法的检测试剂，所述检测试剂以上述钴镍纳米线阵列和tmb溶液为主。所采用的tmb溶液可市售获得，也可通过本领域常规的制备方法制得。
本发明为了实现更为准确的比色法，采用如下方式制备tmb溶液：将3,3’,5,5’-四甲基联苯胺粉末充分溶于二甲亚砜中后，加水稀释，并调整ph值至3～4，即得tmb溶液。
所述tmb溶液的浓度为1～5mmol/l；最优选为3mmol/l。
其中，调整所述ph值采用有机酸或弱酸，优选采用柠檬酸。
本发明进一步提出的，每0.5～1.5ml的tmb溶液中加入体积为1cm×0.5cm×1mm～1cm×3cm×1mm的钴镍纳米线阵列。
本发明所述的生物小分子主要为h2o2和葡萄糖；本发明可有效监测这两者物质，尤其的尿液中，或血清中的h2o2和葡萄糖。
上述提及的氧化产物oxtmb呈现明显的蓝色，在652nm处具有很强的可见光吸收。而在实际应用中，h2o2或葡萄糖的浓度不同，其在652nm处的紫外吸光度值会有所不同；
本发明又一目的在于，提供一种检测h2o2或葡萄糖的比色法。根据上述不同的紫外吸光度值检测h2o2或葡萄糖的浓度。
所述比色法检测h2o2的浓度时，具体包括如下步骤：
1)在上述的检测试剂中，加入等体积的不同浓度的h2o2溶液，充分混合后，静置1～5min，检测其紫外吸收强度，根据不同浓度的h2o2溶液绘制标准曲线，获得线性方程；
2)在上述的检测试剂中，加入等体积的待测溶液，检测其紫外吸收强度，根据线性方程，计算所述待测溶液中h2o2的浓度。
所述比色法检测葡萄糖的浓度时，具体包括如下步骤：
1)在上述检测试剂中，加入等体积的不同浓度的葡萄糖溶液，再加入占检测试剂体积百分比为0.4％～0.6％的葡萄糖氧化酶，室温下孵育25～40min，检测其紫外吸收强度，根据不同浓度的葡萄糖溶液绘制标准曲线，获得线性方程；
2)在上述检测试剂中，加入等体积的待测溶液，检测其紫外吸收强度，根据线性方程，计算所述待测溶液中葡萄糖的浓度；
本发明所述的比色法检测范围宽，灵敏度高，检测h2o2的检测限可达0.5μmol/l；检测葡萄糖的检测限可达0.04mmol/l；
本发明所述的紫外吸收强度为652nm处的吸光度值。
本发明进一步提出的，所述比色法的检测条件还包括，反应液的温度为40℃，ph值为4.0，过氧化氢的浓度为0.1mmol/l。
本发明所述标准曲线对应的拟合方程为：
h2o2：a＝0.0267[h2o2]/μm+0.0812，相关系数(r2)为0.994；
葡萄糖：a＝2.2089[葡萄糖]/mm+0.0042，相关系数(r2)为0.993；
其中，a为待测样品反应后在652nm处的吸光度值。
本发明至少具有的如下优势：
1)本发明通过水热原位生长的方法合成制得的钴镍纳米线阵列具有类过氧化氢酶和类歧化酶、双重类酶活性；
3)所述钴镍纳米线阵列稳定性高，可以重复使用，且易于分离。
3)本发明所述的钴镍纳米线阵列和tmb溶液制备方法简便，并且利用钴镍纳米线阵列类过氧化氢酶的催化活性，建立一种简单、快速的比色方法来检测h2o2和葡萄糖；
4)本发明提供的比色法可用于定量检测h2o2和葡萄糖；其操作简便，灵敏度高，检测限较低。
附图说明
图1a为实施例1所制得的钴镍纳米线阵列的扫描电子显微镜(sem)图；
图1b为实施例1所制得的钴镍纳米线阵列的扫描电子显微镜(sem)图；
图1c为实施例1所制得的钴镍纳米线阵列的扫描电子显微镜(sem)图；
图1d为实施例1所制得的钴镍纳米线阵列的透射电子显微镜(tem)图；
图1e为实施例1所制得的钴镍纳米线阵列的透射电子显微镜(tem)图的放大图；
图1f为实施例1所制得的钴镍纳米线阵列的高分辨透射电子显微镜(hrtem)图；
图1g为实施例1所制得的钴镍纳米线阵列的元素分布(mapping)图；
图1h为实施例1所制得的钴镍纳米线阵列的元素分布(mapping)图；
图2a为实施例1所制得的钴镍纳米线阵列+tmb和实施例1所制得的钴镍纳米线阵列+tmb+h2o2的紫外吸收光谱图；
图2b为实施例1所制得的钴镍纳米线阵列+h2o2加入tmb、opd、abts的紫外吸收光谱图；
图2c为不同尺寸的实施例1所制得的钴镍纳米线阵列加入h2o2溶液含氧量的对比图；
图2d为不同尺寸的实施例1所制得的钴镍纳米线阵列加入h2o2和对苯二甲酸溶液的荧光强度对比图；
图3a为实施例7中不同浓度的h2o2溶液的在652nm处紫外吸收光谱图；
图3b为实施例7比色法检测h2o2的标准曲线图；
图3c为实施例8中不同浓度的葡萄糖溶液的在652nm处紫外吸收光谱图；
图3d为实施例7比色法检测葡萄糖的标准曲线图；
图4a为试验例1循环反应10次后的钴镍纳米线阵列催化活性的表征图；
图4b为试验例1循环反应10次后的钴镍纳米线阵列的扫描电子显微镜(sem)图；
图4c为试验例1循环反应10次后的钴镍纳米线阵列的扫描电子显微镜(sem)图；
图4d为试验例1循环反应10次后的钴镍纳米线阵列的x射线衍射(xrd)图；
图4e为试验例1循环反应10次后的钴镍纳米线阵列的透射电子显微镜(tem)图；
图4f为试验例1循环反应10次后的钴镍纳米线阵列的高分辨透射电子显微镜(hrtem)图；
图5a为实施例1～3，以及对比例1～2制得的钴镍纳米线阵列催化活性对比实验的对比图；
图5b为实施例1制得的钴镍纳米线阵列催化活性的对比图。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
所述方法如无特别说明均为常规方法。所述原材料如无特别说明均能从公开商业途径获得。
下述实施例中的试剂：泡沫镍(nifoam)、氯化钴(cocl2·6h2o)；氯化镍(nicl2·6h2o)、尿素(ch4n2o)、氟化胺(nh4f)、过氧化氢(h2o2)、丙酮(ch3coch3)、葡萄糖(glucose)、盐酸(hcl)、氢氧化钠(naoh)、柠檬酸(c6h8o7·h2o)、3，3′，5，5′-四甲基联苯胺(tmb)、2'-联氨-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸(abts)、1,2-二氨基苯(opd)、二甲基亚砜((ch3)2so)均可市售获得；所有试剂均为分析纯，溶剂均为二次水。
如下实施例中采用的泡沫镍先进行预处理，具体为：
将nifoam裁剪成1cm×3cm×1mm的尺寸，放入盐酸溶液中超声15min，取出nifoam用二次水冲洗干净，然后放入烘箱中，在60℃下烘干；再将泡沫镍放入丙酮中超声15min，取出nifoam用水冲洗，放入烘箱中在60℃下烘干，即可。
实施例1
本实施例提供一种钴镍纳米线阵列的制备方法，具体包括如下步骤：
1)取0.2855g的cocl2·6h2o、0.2852g的nicl2·6h2o、0.1778g的氟化胺、0.1802g的尿素混合后，(cocl2·6h2o和nicl2·6h2o的摩尔比为1:1)溶于15ml二次水中，搅拌至混合溶液均匀；再加入泡沫镍后，将其置于压力为1.6～2.4个大气压、温度100℃的环境下，反应6h；，反应结束后冷却至室温，将钴镍纳米线阵列前体采用无水乙醇和二次水交替冲洗6次，然后置于60℃的温度下，烘干，即可获得钴镍纳米线阵列前体；
2)将所述钴镍纳米线阵列前体加入10ml浓度为0.15mol/l的葡萄糖溶液中，在压力为4.5～5.2个大气压、温度为180℃的环境下，反应3h；反应结束后冷却至室温，将钴镍纳米线阵列前体采用无水乙醇和二次水交替冲洗6次，然后置于60℃的温度下，烘干，即可；
3)将步骤2)反应后获得样品放入管式马弗炉中，置于氮气气氛下，在300℃的温度下，煅烧3h，即得钴镍纳米线阵列。
将本实施例制得钴镍纳米线阵列进行类过氧化氢酶和类歧化酶双重类酶性质的分析；
如图2所示，图a中a曲线是tmb的紫外吸收光谱图；b曲线是tmb+h2o2的紫外吸收光谱图；c曲线是钴镍纳米线阵列+tmb(c@coninws/nifoam+tmb)的紫外吸收光谱图；d曲线是钴镍纳米线阵列+tmb+h2o2(c@coninws/nifoam+tmb+h2o2)的紫外吸收光谱图的紫外吸收光谱图；由图可知，仅有d曲线在652nm处才有明显的紫外吸收峰，说明钴镍纳米线阵列具有类过氧化氢酶的催化活性。
图b是在钴镍纳米线阵列+h2o2混合溶液中加入tmb、opd(邻苯二胺)、abts(2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐)，孵育几分钟后，取上清液测其紫外吸收值；从图中可以看出，分别在652nm、445nm、410nm处有一特征吸收，插图中的照片可以看出，加入tmb、opd、abts溶液后，溶液分别变成了绿色、黄色、蓝色，说明钴镍纳米线阵列具有类过氧化氢酶的性质。
图c表示，在相同h2o2溶液中，分别加入不同尺寸的钴镍纳米线阵列，用测氧仪测量不同时间溶液中的含氧量；该材料的尺寸随0.2cm×0.2cm×1mm-1cm×1cm×1mm的增加，测得的溶液中的氧含量也不断的增加，说明钴镍纳米线阵列具有类歧化酶的催化活性，可以催化h2o2分解产生氧气。
图d表示，在盛有h2o2和对苯二甲酸溶液的离心管中分别加入不同尺寸的钴镍纳米线阵列(0.2cm×0.2cm×1mm～1cm×1cm×1mm)，静置3h，测其荧光强度；从图中可以看出，加入的钴镍纳米线阵列的的尺寸越大，检测体系的荧光信号越强，主要是因为无荧光的对苯二甲酸能与羟基自由基反应生成有荧光的2-羟基对苯二甲酸，加入的该材料的尺寸越大，溶液的荧光越强，说明该材料尺寸越大，催化h2o2歧化过程中产生的羟基自由基越多，所以溶液中具有荧光信号的2-羟基对苯二甲酸含量越多，说明该纳米材料具有类歧化酶的性质。
综上所述，本实施例制得的钴镍纳米线阵列具有类过氧化氢酶和类歧化酶双重类酶性质。
实施例2
本实施例提供一种钴镍纳米线阵列的制备方法，与实施例1的区别仅在于，氯化钴和氯化镍的摩尔比为1:2。
实施例3
本实施例提供一种钴镍纳米线阵列的制备方法，与实施例1的区别仅在于，氯化钴和氯化镍的摩尔比为2:1。
实施例4～6
本实施例提供一种用于检测生物小分子的比色法的检测试剂，包括tmb溶液和实施例1～3制得钴镍纳米线阵列；
其中，所述tmb溶液采用如下方法制得：
1)取30mg的tmb粉末，置于5ml的离心管中，然后加入1.5ml的dmso使其完全溶解后得到a溶液；
2)将0.084g柠檬酸颗粒置于5ml的离心管中，加入2ml的二次水使其全部溶解得到b溶液；
3)然后把a溶液用二次水稀释至10ml，再加入2ml的柠檬酸溶液，然后继续加二次水至40ml，最后即可得到3mol/l的tmb溶液。
其中，每1ml的tmb溶液中加入体积为1cm×1cm×1cm的钴镍纳米线阵列。
实施例7
本实施例提供一种检测h2o2的比色法，包括如下步骤：
1)在实施例4制得的检测试剂中，依次加入等体积的不同浓度的h2o2溶液(浓度从0开始，浓度为0溶液采用水即可)，充分混合后，静置1min后，取上清液倒入比色皿中用紫外可见分光光度计检测其紫外吸收强度(检测其652nm处的吸光度值)，记为a。根据不同浓度的h2o2溶液绘制标准曲线，获得线性方程；
其中，不同浓度具体为：浓度为1、2.5、5、7.5、10、15、20、30、40、50、75和100μm的h2o2溶液。
如图3a所示，在652nm处的紫外可见吸收强度逐渐增加；如3b所示，为紫外吸收强度与h2o2溶液浓度的线性关系图，线性范围为1-100μm；线性方程为：a＝0.0267[h2o2]/μm+0.0812，相关系数(r2)为0.994；
2)在实施例4制得的检测试剂中，加入等体积的待测溶液，检测其紫外吸收强度，根据线性方程，计算所述待测溶液中h2o2的浓度；
实施例8
本实施例提供一种检测葡萄糖的比色法，包括如下步骤：
1)在实施例4制得的检测试剂中，加入等体积的不同浓度的葡萄糖溶液(浓度从0开始，浓度为0溶液采用水即可)，再加入占检测试剂体积百分比为0.5％的葡萄糖氧化酶，室温下孵育25～40min，检测其652nm处的吸光度值，根据不同浓度的葡萄糖溶液绘制标准曲线，获得线性方程；
其中，不同浓度具体为：浓度为0.04、0.06、0.07、0.08、0.1、0.2、0.25、0.3、0.4和0.5mmol/l的葡萄糖溶液。
如图3c所示，在652nm处的紫外可见吸收强度逐渐增加；如3d所示，为紫外吸收强度与葡萄糖溶液浓度的线性关系图，线性范围为0.04-0.5mmol/l，线性方程为a＝2.2089[葡萄糖]/mm+0.0042，相关系数(r2)为0.993。
2)在实施例4制得的检测试剂中，加入等体积的待测溶液，检测其紫外吸收强度，根据线性方程，计算所述待测溶液中葡萄糖的浓度；
对比例1
本对比例提供一种钴镍纳米线阵列的制备方法，与实施例1的区别仅在于，不加入氯化镍。
采用实施例4相同的方法制成检测试剂。
对比例2
本对比例提供一种钴镍纳米线阵列的制备方法，与实施例1的区别仅在于，不加入氯化钴。
采用实施例4相同的方法制成检测试剂。
对比例3～6
本对比例提供一种钴镍纳米线阵列的制备方法，与实施例1的区别仅在于，将步骤2)中的“葡萄糖溶液”分别替换为“聚多巴胺”、“半胱氨酸”“组氨酸”；
采用实施例4相同的方法制成检测试剂；将所制得检测试剂进行验证，实验结果可知，以“聚多巴胺”、“半胱氨酸”“组氨酸”为碳源制得钴镍纳米线阵列，在类酶的催化性能上表现不佳，且稳定性不高，重复比色法循环反应3次后，催化活性就明显下降。
试验例1
将实施例7所述的比色法循环反应10次，检测钴镍纳米线阵列的催化活性。
从图4a中可以看出循环反应10次后的钴镍纳米线阵列催化活性仍然保持>90％；由此可说明，该材料可充分使用，并且每次循环使用是特别方法，易于分离。
图4b、c、e为循环反应10后的钴镍纳米线阵列的sem图，从图中可以看出循环反应10次后的钴镍纳米线阵列的形貌并没有发生明显的改变，且钴镍纳米线阵列的高度也基本不变。进一步说明所制得钴镍纳米线阵列的稳定性强。
图4d为循环反应10后的钴镍纳米线阵列的xrd图，典型的峰位置基本没有变化，说明催化后的材料的晶形没有改变。
图4f为循环反应10后的钴镍纳米线阵列的hrtem图，由图可知，循环反应10后的钴镍纳米线阵列的晶格间距基本没有变化，插图的saed也说明了这一点，这一结果与xrd的结果是一致的，说明循环反应10后的钴镍纳米线阵列的晶形没有改变。
综上所述，所制得钴镍纳米线阵列的稳定性强，有较好的可重复性，且易于分离。
试验例2
1、将实施例1～3，以及对比例1～2制得的钴镍纳米线阵列进行催化活性对比实验。
将钴镍纳米线阵列剪成1cm×1cm×1cm尺寸大小，与1ml0.1mmol/l的过氧化氢溶液和1ml3mmol/l的tmb溶液混合，然后离心得到的上清液用以检测其紫外吸光度值。
如图5a所示，对比例1(cocl2和nicl2的摩尔比为1:0)、实施例1(cocl2和nicl2的摩尔比为1:1)、实施例2(cocl2和nicl2的摩尔比为1:2)、实施例3(cocl2和nicl2的摩尔比为2:1)、对比例2(cocl2和nicl2的摩尔比为0:1)的紫外吸光度，其中，实施例1制得钴镍纳米线阵列经反应后，紫外吸光度值最大。
2、将实施例1制得的钴镍纳米线阵列(c@coninws/nifoam)与未生长钴镍纳米线阵列的镍泡沫、镍泡沫上附着了镍(pureni/nifoam)、镍泡沫上只生长了co(pureco/nifoam)，以及实施例1制得的钴镍纳米线阵列前体(coninws/nifoam)，在相同条件下，进行催化活性的比较。如图5b所示，随时反应时间的变化，紫外吸光度值都在递增；其中，实施例1制得的钴镍纳米线阵列的催化活性最好，且显著高于其他四种材料。
虽然，上文中已经用一般性说明、具体实施方式及试验，对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。