本发明涉及一种色谱分析分离方法，尤其是一种分析及制备N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸及其对映异构体的高效液相色谱法，属于化学原料制备的技术领域。
技术背景
吡咯酯(化学名：3-(N-对甲苯磺酰基-L-丙氨酰氧基)-5-苯基吡咯和吲哚酯(化学名3-(N-对甲苯磺酰基-L-丙氨酰氧基)-吲哚)是测定白细胞诊断试剂所用的常用底物，而N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸则是该底物合成过程中的关键手性中间体，因此，如何分析及制备N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸及其对映异构体，进而控制N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸的质量，显得尤为重要。N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸及其对映异构体结构如式(1)所示：
式1中，A：N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸；B：N-(对甲苯磺酰基)-D-丙氨酸；
近年来，随着手性色谱填料多样化，手性色谱柱液相色谱法应用日益广泛，然而，利用手性固定相分析及制备N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸及其对映异构体的方法未见相关报道。
因此，如何建立一种能够简单、快速、高效的分析分离N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸及其对映异构体的方法，进而实现对其质量的控制，是目前需要解决的技术问题。
技术实现要素：
本发明的目的是为了克服现有技术的不足，提供了一种应用手性固定相的液相色谱方法对N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸和N-(对甲苯磺酰基)-D-丙氨酸两种对映异构体进行分析分离，进而实现对其进行质量控制及单一对映体的制备。
本发明提供了一种HPLC法分析及制备N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸及其对映异构体的方法，其特征在于，采用手性色谱柱并使用正相色谱法进行分析分离；所述的手性色谱柱填料为多糖衍生物型填料，具体为硅胶表面键合直链淀粉-三(3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯)、硅胶表面涂覆直链淀粉-三(3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯)或硅胶表面涂覆纤维素-三(3,5-二甲基苯基甲酸酯)；所述的正相色谱法所用的流动相为非极性-极性混合溶剂；
所述的分析方法包括以下步骤：
(1).N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸和N-(对甲苯磺酰基)-D-丙氨酸对照品分别用乙醇溶解，配置成浓度为0.1mg/mL的对照品溶液；
(2).N-(对甲苯磺酰基)-DL-丙氨酸供试品用乙醇溶解，配制成浓度为0.1～1mg/mL的供试品溶液，进样量为5～10μL；
(3).设置流动相比例为70：30～50：50；设置流速为0.4～0.8mL/min；设置液相色谱柱温箱温度为20～40℃；检测波长为220nm；
(4).精密吸取对照品及供试品溶液分别注入液相色谱柱，参照N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸和N-(对甲苯磺酰基)-D-丙氨酸对照品保留时间，完成对N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸及其对映异构体的分析；
所述的制备方法包括以下步骤：
(1).N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸和N-(对甲苯磺酰基)-D-丙氨酸对照品分别用乙醇溶解，配置成浓度为1mg/mL的对照品溶液；
(2).N-(对甲苯磺酰基)-DL-丙氨酸供试品用乙醇溶解，配制成浓度为5～10mg/mL的供试品溶液；进样量为1-10mL；
(3).设置流动相的比例为70：30～50：50；设置流速为4～40mL/min；检测波长为220nm；
(4).取对照品及供试品溶液分别注入液相色谱柱，参照N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸和N-(对甲苯磺酰基)-D-丙氨酸对照品保留时间，接收相应主峰，浓缩，干燥，完成对N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸及其对映异构体的制备；
进一步地，所述的一种HPLC法分析及制备N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸及其对映异构体的方法，其特征在于，所述的非极性流动相为正己烷、正庚烷或环己烷，所述的极性流动相为含有三氟乙酸的异丙醇溶液或含有三氟乙酸的乙醇溶液。
进一步地，所述的极性流动相是含有体积分数为0.1～0.5％三氟乙酸的异丙醇溶液或含有体积分数为0.1～0.5％三氟乙酸的乙醇溶液。
与以往技术相比，本发明的有益效果如下：
(1)本发明采用的手性固定相的液相色谱法对N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸及其对映异构体进行分析分离，其方法操作简单，准确和高效，能够有效控制N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸的质量；
(2)采用较优选的手性固定相填料，采用较优选的流动相，选用较优的进样量，选用较优的波长，从而确保N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸的稳定性，提高了色谱峰的对称性，具有较好的分离效果。
(3)本发明使用多糖衍生物型手性色谱柱与其它类手性固定相的液相色谱法相比，分离度更高，具有更好的分离效果。
(4)本发明使用的体积分数为0.1～0.5％三氟乙酸溶剂是扫尾剂，能够明显改善氨基酸拖尾现象，又能保证在体积分数为0.1～0.5％三氟乙酸的PH值下不会对手性色谱柱造成损伤。
可见，本发明克服了现有技术的不足，解决了N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸及其对映异构体的分析分离问题，能够快速、准确和高效分析分离N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸及其对映异构体，进而确保N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸的质量。
因此，本发明一种HPLC法分析及制备N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸及其对映异构体的方法是十分必要的。
具体实施方式
本发明提供了一种HPLC法分析及制备N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸及其对映异构体的方法，其特征在于，采用手性色谱柱并使用正相色谱法进行分析分离；所述的手性色谱柱填料为多糖衍生物型填料，具体为硅胶表面键合直链淀粉-三(3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯)、硅胶表面涂覆直链淀粉-三(3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯)或硅胶表面涂覆纤维素-三(3,5-二甲基苯基甲酸酯)；所述的正相色谱法所用的流动相为非极性-极性混合溶剂；所述的非极性溶剂为正己烷、正庚烷或环己烷中的一种，所述的极性溶剂为含有体积分数为0.1～0.5％三氟乙酸的异丙醇溶液或含有体积分数为0.1～0.5％三氟乙酸的乙醇溶液。在上述条件相互配合试用下，N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸及其对映异构体能够有效分离，分离度≥2.0。
以下通过具体实施方式的描述对本发明作进一步说明，但本发明的保护范围并不局限于具体实施例。
实施例1：N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸和N-(对甲苯磺酰基)-D-丙氨酸的分析分离
仪器与条件
色谱柱：IA-H(250×4.6mm,5.0μm)
流动相：正己烷-异丙醇-三氟乙酸水溶液(70:30：0.15)
柱温：40℃
流速：0.8mL/min
进样体积：5μL
样品浓度：1mg/mL
检测波长：220nm
实验步骤
分别精密量取N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸和N-(对甲苯磺酰基)-D-丙氨酸各1mg，置于10mL容量瓶中，乙醇溶解并稀释到刻度，摇匀，作为对照品溶液。精密称量N-(对甲苯磺酰基)-DL-丙氨酸10mg,置于10mL容量瓶中，乙醇溶解并稀释到刻度，摇匀，作为供试品母液。分别精密吸取对照品及供试品母液各5μL进入液相色谱，参照N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸和N-(对甲苯磺酰基)-D-丙氨酸对照品保留时间，完成对N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸及其对映异构体的分析。
实验结果：N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸和N-(对甲苯磺酰基)-D-丙氨酸两个对映异构体的分离度为5.0，N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸及其对映异构体能够完全分离。
实施例2：N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸和N-(对甲苯磺酰基)-D-丙氨酸的分析分离
仪器与条件
色谱柱：IA-H(250×4.6mm,5.0μm)
流动相：正庚烷-乙醇-三氟乙酸(50:50：0.05)
柱温：20℃
流速：0.4mL/min
进样体积：10μL
样品浓度：0.1mg/mL
检测波长：220nm
实验步骤
分别精密量取N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸和N-(对甲苯磺酰基)-D-丙氨酸各1mg，置于10mL容量瓶中，乙醇溶解并稀释到刻度，摇匀，作为对照品溶液。精密称量N-(对甲苯磺酰基)-DL-丙氨酸10mg,置于10mL容量瓶中，乙醇溶解并稀释到刻度，摇匀，作为供试品母液。精密吸取供试品母液1mL,置于10mL容量瓶中，乙醇溶解并稀释到刻度，摇匀，作为供试品溶液。分别精密吸取对照品及供试品溶液各10μL进入液相色谱，参照N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸和N-(对甲苯磺酰基)-D-丙氨酸对照品保留时间，完成对N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸及其对映异构体的分析。
实验结果：N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸和N-(对甲苯磺酰基)-D-丙氨酸两个对映异构体的分离度为2.8，N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸及其对映异构体能够完全分离。
实施例3：N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸和N-(对甲苯磺酰基)-D-丙氨酸的分析分离
仪器与条件
色谱柱：IA-H(250×4.6mm,5.0μm)
流动相：环己烷-乙醇-三氟乙酸(60:40：0.16)
柱温：30℃
流速：0.8mL/min
进样体积：5μL
样品浓度：1mg/mL
检测波长：220nm
实验步骤
分别精密量取N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸和N-(对甲苯磺酰基)-D-丙氨酸各1mg，置于10mL容量瓶中，乙醇溶解并稀释到刻度，摇匀，作为对照品溶液。精密称量N-(对甲苯磺酰基)-DL-丙氨酸10mg,置于10mL容量瓶中，乙醇溶解并稀释到刻度，摇匀，作为供试品母液。分别精密吸取对照品及供试品母液各5μL进入液相色谱，参照N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸和N-(对甲苯磺酰基)-D-丙氨酸对照品保留时间，完成对N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸及其对映异构体的分析。
实验结果：N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸和N-(对甲苯磺酰基)-D-丙氨酸两个对映异构体的分离度为3.5，N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸及其对映异构体能够完全分离。
实施例4：N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸和N-(对甲苯磺酰基)-D-丙氨酸的分析分离
色谱柱：AD-H(250×4.6mm,5.0μm)
流动相：正己烷-异丙醇-三氟乙酸水溶液(70:30：0.15)
柱温：40℃
流速：0.8mL/min
进样体积：5μL
样品浓度：1mg/mL
检测波长：220nm
实验步骤
分别精密量取N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸和N-(对甲苯磺酰基)-D-丙氨酸各1mg，置于10mL容量瓶中，乙醇溶解并稀释到刻度，摇匀，作为对照品溶液。精密称量N-(对甲苯磺酰基)-DL-丙氨酸10mg,置于10mL容量瓶中，乙醇溶解并稀释到刻度，摇匀，作为供试品母液。分别精密吸取对照品及供试品母液各5μL进入液相色谱，参照N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸和N-(对甲苯磺酰基)-D-丙氨酸对照品保留时间，完成对N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸及其对映异构体的分析。
实验结果：N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸和N-(对甲苯磺酰基)-D-丙氨酸两个对映异构体的分离度为4.1，N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸及其对映异构体能够完全分离。
实施例5：N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸和N-(对甲苯磺酰基)-D-丙氨酸的分析分离
仪器与条件
色谱柱：AD-H(250×4.6mm,5.0μm)
流动相：正庚烷-乙醇-三氟乙酸(50:50：0.05)
柱温：20℃
流速：0.4mL/min
进样体积：10μL
样品浓度：0.1mg/mL
检测波长：220nm
实验步骤
分别精密量取N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸和N-(对甲苯磺酰基)-D-丙氨酸各1mg，置于10mL容量瓶中，乙醇溶解并稀释到刻度，摇匀，作为对照品溶液。精密称量N-(对甲苯磺酰基)-DL-丙氨酸10mg,置于10mL容量瓶中，乙醇溶解并稀释到刻度，摇匀，作为供试品母液。精密吸取供试品母液1mL,置于10mL容量瓶中，乙醇溶解并稀释到刻度，摇匀，作为供试品溶液。分别精密吸取对照品及供试品溶液各10μL进入液相色谱，参照N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸和N-(对甲苯磺酰基)-D-丙氨酸对照品保留时间，完成对N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸及其对映异构体的分析。
实验结果：N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸和N-(对甲苯磺酰基)-D-丙氨酸两个对映异构体的分离度为2.1，N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸及其对映异构体能够完全分离。
实施例6：N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸和N-(对甲苯磺酰基)-D-丙氨酸的分析分离
仪器与条件
色谱柱：AD-H(250×4.6mm,5.0μm)
流动相：环己烷-乙醇-三氟乙酸(60:40：0.16)
柱温：30℃
流速：0.8mL/min
进样体积：5μL
样品浓度：1mg/mL
检测波长：220nm
实验步骤
分别精密量取N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸和N-(对甲苯磺酰基)-D-丙氨酸各1mg，置于10mL容量瓶中，乙醇溶解并稀释到刻度，摇匀，作为对照品溶液。精密称量N-(对甲苯磺酰基)-DL-丙氨酸10mg,置于10mL容量瓶中，乙醇溶解并稀释到刻度，摇匀，作为供试品母液。分别精密吸取对照品及供试品母液各5μL进入液相色谱，参照N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸和N-(对甲苯磺酰基)-D-丙氨酸对照品保留时间，完成对N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸及其对映异构体的分析。
实验结果：N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸和N-(对甲苯磺酰基)-D-丙氨酸两个对映异构体的分离度为3.2，N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸及其对映异构体能够完全分离。
实施例7：N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸和N-(对甲苯磺酰基)-D-丙氨酸的分析分离
仪器与条件
色谱柱：OD-H(250×4.6mm,5.0μm)
流动相：正己烷-异丙醇-三氟乙酸水溶液(70:30：0.15)
柱温：40℃
流速：0.8mL/min
进样体积：5μL
样品浓度：1mg/mL
检测波长：220nm
实验步骤
分别精密量取N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸和N-(对甲苯磺酰基)-D-丙氨酸各1mg，置于10mL容量瓶中，乙醇溶解并稀释到刻度，摇匀，作为对照品溶液。精密称量N-(对甲苯磺酰基)-DL-丙氨酸10mg,置于10mL容量瓶中，乙醇溶解并稀释到刻度，摇匀，作为供试品母液。分别精密吸取对照品及供试品母液各5μL进入液相色谱，参照N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸和N-(对甲苯磺酰基)-D-丙氨酸对照品保留时间，完成对N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸及其对映异构体的分析。
实验结果：N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸和N-(对甲苯磺酰基)-D-丙氨酸两个对映异构体的分离度为7.2，N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸及其对映异构体能够完全分离。
实施例8：N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸和N-(对甲苯磺酰基)-D-丙氨酸的分析分离
仪器与条件
色谱柱：OD-H(250×4.6mm,5.0μm)
流动相：正庚烷-乙醇-三氟乙酸(50:50：0.05)
柱温：20℃
流速：0.4mL/min
进样体积：10μL
样品浓度：0.1mg/mL
检测波长：220nm
实验步骤
分别精密量取N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸和N-(对甲苯磺酰基)-D-丙氨酸各1mg，置于10mL容量瓶中，乙醇溶解并稀释到刻度，摇匀，作为对照品溶液。精密称量N-(对甲苯磺酰基)-DL-丙氨酸10mg,置于10mL容量瓶中，乙醇溶解并稀释到刻度，摇匀，作为供试品母液。精密吸取供试品母液1mL,置于10mL容量瓶中，乙醇溶解并稀释到刻度，摇匀，作为供试品溶液。分别精密吸取对照品及供试品溶液各10μL进入液相色谱，参照N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸和N-(对甲苯磺酰基)-D-丙氨酸对照品保留时间，完成对N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸及其对映异构体的分析。
实验结果：N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸和N-(对甲苯磺酰基)-D-丙氨酸两个对映异构体的分离度为3.1，N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸及其对映异构体能够完全分离。
实施例9：N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸和N-(对甲苯磺酰基)-D-丙氨酸的分析分离
仪器与条件
色谱柱：OD-H(250×4.6mm,5.0μm)
流动相：环己烷-乙醇-三氟乙酸(60:40：0.16)
柱温：30℃
流速：0.8mL/min
进样体积：5μL
样品浓度：1mg/mL
检测波长：220nm
实验步骤
分别精密量取N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸和N-(对甲苯磺酰基)-D-丙氨酸各1mg，置于10mL容量瓶中，乙醇溶解并稀释到刻度，摇匀，作为对照品溶液。精密称量N-(对甲苯磺酰基)-DL-丙氨酸10mg,置于10mL容量瓶中，乙醇溶解并稀释到刻度，摇匀，作为供试品母液。分别精密吸取对照品及供试品母液各5μL进入液相色谱，参照N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸和N-(对甲苯磺酰基)-D-丙氨酸对照品保留时间，完成对N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸及其对映异构体的分析。
实验结果：N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸和N-(对甲苯磺酰基)-D-丙氨酸两个对映异构体的分离度为3.2，N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸及其对映异构体能够完全分离。
实施例10：N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸和N-(对甲苯磺酰基)-D-丙氨酸的制备分离
仪器与条件
色谱柱：IA-H(250×30mm,10.0μm)
流动相：正己烷-异丙醇-三氟乙酸水溶液(70:30：0.15)
流速：40.0mL/min
进样体积：10mL
样品浓度：10mg/mL
检测波长：220nm
制备步骤：分别精密量取N-(对甲苯磺酰基)-D-丙氨酸和N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸各10mg，置于10mL容量瓶中，乙醇溶解并稀释到刻度，摇匀，作为对照品溶液。精密称量N-(对甲苯磺酰基)-DL-丙氨酸100mg,置于10mL容量瓶中，乙醇溶解并稀释到刻度，摇匀，作为供试品溶液。分别吸取对照品及供试品溶液各10mL进入液相色谱，参照N-(对甲苯磺酰基)-D-丙氨酸和N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸对照品保留时间，分别接收对应主峰，浓缩，干燥，制得N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸34mg，N-(对甲苯磺酰基)-D-丙氨酸36mg。
实施例11：N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸和N-(对甲苯磺酰基)-D-丙氨酸的制备分离
仪器与条件
色谱柱：IA-H(250×10mm,10.0μm)
流动相：正庚烷-乙醇-三氟乙酸(50:50：0.05)
流速：4.0mL/min
进样体积：1mL
样品浓度：5mg/mL
检测波长：220nm
制备步骤：分别精密量取N-(对甲苯磺酰基)-D-丙氨酸和N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸各10mg，置于10mL容量瓶中，乙醇溶解并稀释到刻度，摇匀，作为对照品溶液。精密称量N-(对甲苯磺酰基)-DL-丙氨酸50mg,置于10mL容量瓶中，乙醇溶解并稀释到刻度，摇匀，作为供试品溶液。分别吸取对照品及供试品溶液各1mL进入液相色谱，参照N-(对甲苯磺酰基)-D-丙氨酸和N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸对照品保留时间，分别接收对应主峰，浓缩，干燥，制得N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸1.9mg，N-(对甲苯磺酰基)-D-丙氨酸2.1mg。
实施例12：N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸和N-(对甲苯磺酰基)-D-丙氨酸的制备分离
仪器与条件
色谱柱：IA-H(250×20mm,10.0μm)
流动相：环己烷-乙醇-三氟乙酸(60:40：0.16)
流速：19.0mL/min
进样体积：1mL
样品浓度：10mg/mL
检测波长：220nm
制备步骤：分别精密量取N-(对甲苯磺酰基)-D-丙氨酸和N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸各10mg，置于10mL容量瓶中，乙醇溶解并稀释到刻度，摇匀，作为对照品溶液。精密称量N-(对甲苯磺酰基)-DL-丙氨酸100mg,置于10mL容量瓶中，乙醇溶解并稀释到刻度，摇匀，作为供试品溶液。分别吸取对照品及供试品溶液各1mL进入液相色谱，参照N-(对甲苯磺酰基)-D-丙氨酸和N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸对照品保留时间，分别接收对应主峰，浓缩，干燥，制得N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸3.2mg，N-(对甲苯磺酰基)-D-丙氨酸3.5mg。
实施例13：N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸和N-(对甲苯磺酰基)-D-丙氨酸的制备分离
仪器与条件
色谱柱：AD-H(250×30mm,10.0μm)
流动相：正己烷-异丙醇-三氟乙酸水溶液(70:30：0.15)
流速：40.0mL/min
进样体积：10mL
样品浓度：10mg/mL
检测波长：220nm
制备步骤：分别精密量取N-(对甲苯磺酰基)-D-丙氨酸和N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸各10mg，置于10mL容量瓶中，乙醇溶解并稀释到刻度，摇匀，作为对照品溶液。精密称量N-(对甲苯磺酰基)-DL-丙氨酸100mg,置于10mL容量瓶中，乙醇溶解并稀释到刻度，摇匀，作为供试品溶液。分别吸取对照品及供试品溶液各10mL进入液相色谱，参照N-(对甲苯磺酰基)-D-丙氨酸和N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸对照品保留时间，分别接收对应主峰，浓缩，干燥，制得N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸31mg，N-(对甲苯磺酰基)-D-丙氨酸35mg。
实施例14：N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸和N-(对甲苯磺酰基)-D-丙氨酸的制备分离
仪器与条件
色谱柱：AD-H(250×30mm,10.0μm)
流动相：正庚烷-乙醇-三氟乙酸(50:50：0.05)
流速：4.0mL/min
进样体积：10mL
样品浓度：5mg/mL
检测波长：220nm
制备步骤：分别精密量取N-(对甲苯磺酰基)-D-丙氨酸和N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸各10mg，置于10mL容量瓶中，乙醇溶解并稀释到刻度，摇匀，作为对照品溶液。精密称量N-(对甲苯磺酰基)-DL-丙氨酸50mg,置于10mL容量瓶中，乙醇溶解并稀释到刻度，摇匀，作为供试品溶液。分别吸取对照品及供试品母液各10mL进入液相色谱，参照N-(对甲苯磺酰基)-D-丙氨酸和N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸对照品保留时间，分别接收对应主峰，浓缩，干燥，制得N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸19mg，N-(对甲苯磺酰基)-D-丙氨酸23mg。
实施例15：N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸和N-(对甲苯磺酰基)-D-丙氨酸的制备分离
仪器与条件
色谱柱：AD-H(250×10mm,10.0μm)
流动相：环己烷-乙醇-三氟乙酸(60:40：0.16)
流速：5.0mL/min
进样体积：1mL
样品浓度：10mg/mL
检测波长：220nm
制备步骤：分别精密量取N-(对甲苯磺酰基)-D-丙氨酸和N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸各10mg，置于10mL容量瓶中，乙醇溶解并稀释到刻度，摇匀，作为对照品溶液。精密称量N-(对甲苯磺酰基)-DL-丙氨酸100mg,置于10mL容量瓶中，乙醇溶解并稀释到刻度，摇匀，作为供试品溶液。分别吸取对照品及供试品溶液各1mL进入液相色谱，参照N-(对甲苯磺酰基)-D-丙氨酸和N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸对照品保留时间，分别接收对应主峰，浓缩，干燥，制得N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸4.2mg，N-(对甲苯磺酰基)-D-丙氨酸4.5mg。
实施例16：N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸和N-(对甲苯磺酰基)-D-丙氨酸的制备分离
仪器与条件
色谱柱：OD-H(250×30mm,10.0μm)
流动相：正己烷-异丙醇-三氟乙酸水溶液(70:30：0.15)
流速：40.0mL/min
进样体积：10mL
样品浓度：10mg/mL
检测波长：220nm
制备步骤：分别精密量取N-(对甲苯磺酰基)-D-丙氨酸和N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸各10mg，置于10mL容量瓶中，乙醇溶解并稀释到刻度，摇匀，作为对照品溶液。精密称量N-(对甲苯磺酰基)-DL-丙氨酸100mg,置于10mL容量瓶中，乙醇溶解并稀释到刻度，摇匀，作为供试品溶液。分别吸取对照品及供试品溶液各10mL进入液相色谱，参照N-(对甲苯磺酰基)-D-丙氨酸和N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸对照品保留时间，分别接收对应主峰，浓缩，干燥，制得N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸41mg，N-(对甲苯磺酰基)-D-丙氨酸47mg。
实施例17：N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸和N-(对甲苯磺酰基)-D-丙氨酸的制备分离
仪器与条件
色谱柱：OD-H(250×30mm,10.0μm)
流动相：正庚烷-乙醇-三氟乙酸(50:50：0.05)
流速：4.0mL/min
进样体积：10mL
样品浓度：5mg/mL
检测波长：220nm
制备步骤：分别精密量取N-(对甲苯磺酰基)-D-丙氨酸和N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸各10mg，置于10mL容量瓶中，乙醇溶解并稀释到刻度，摇匀，作为对照品溶液。精密称量N-(对甲苯磺酰基)-DL-丙氨酸50mg,置于10mL容量瓶中，乙醇溶解并稀释到刻度，摇匀，作为供试品溶液。分别吸取对照品及供试品母液各10mL进入液相色谱，参照N-(对甲苯磺酰基)-D-丙氨酸和N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸对照品保留时间，分别接收对应主峰，浓缩，干燥，制得N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸23mg，N-(对甲苯磺酰基)-D-丙氨酸20mg。
实施例18：N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸和N-(对甲苯磺酰基)-D-丙氨酸的制备分离
仪器与条件
色谱柱：OD-H(250×20mm,10.0μm)
流动相：环己烷-乙醇-三氟乙酸(60:40：0.16)
流速：18.0mL/min
进样体积：1mL
样品浓度：10mg/mL
检测波长：220nm
制备步骤：分别精密量取N-(对甲苯磺酰基)-D-丙氨酸和N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸各10mg，置于10mL容量瓶中，乙醇溶解并稀释到刻度，摇匀，作为对照品溶液。精密称量N-(对甲苯磺酰基)-DL-丙氨酸100mg,置于10mL容量瓶中，乙醇溶解并稀释到刻度，摇匀，作为供试品溶液。分别吸取对照品及供试品溶液各1mL进入液相色谱，参照N-(对甲苯磺酰基)-D-丙氨酸和N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸对照品保留时间，分别接收对应主峰，浓缩，干燥，制得N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸4.3mg，N-(对甲苯磺酰基)-D-丙氨酸4.6mg。