本发明涉及生物医药技术领域，具体地说，涉及晚期糖基化终产物cml作为心肌缺血再灌注损伤早期诊断标志物，以及应用pyridorin抑制cml的生成从而减轻心肌缺血再灌注损伤。
背景技术：
近年来，随着老龄化社会的来临，人民生活质量的提高及cvd危险因素的广泛流行，我国cvd的发病率及死亡率逐年增长。国家心血管中心最新发布的《中国心血管病报告》中指出，我国目前cvd死亡占城乡居民总死亡原因的首位，农村为45.01％，城市为42.61％，高于肿瘤及其他系统疾病(图1)。其中，缺血性心脏病(ischemicheartdisease，ihd)尤其是冠心病(coronaryheartdisease，chd)是导致cvd死亡的首要病因。而急性心肌梗死(acutemyocardialinfarction，ami)则是导致冠心病死亡的主要原因。近年来，随着药物及器械治疗的发展以及全国各地区多条急性心梗绿色通道的共同努力，急性心梗的罪犯血管得到了早期、及时的开通，使得ami死亡率大大降低。然而，罪犯血管供血范围内的缺血心肌再灌注后会发生组织细胞代谢功能障碍及结构破坏进一步加重的现象，即心肌缺血/再灌注损伤(myocardialischemia/reperfusioninjury，miri)。miri导致缺血心肌的坏死范围扩大，心肌组织纤维化加重，心脏的负性重塑导致心功能下降，最终发展为心衰(heartfailure，hf)。hf的发生导致急性心梗患者的远期生活质量大大降低。因此，如何有效地干预及治疗罪犯血管开通后的miri是降低ami死亡率及提高患者远期生活治疗亟待解决的问题。
研究表明，血清和组织中晚期糖基化终末产物水平与糖尿病慢性并发症的程度明显相关，ages可以诱导血管和肾脏基底膜蛋白的结构和功能改变，引起炎症和细胞代谢改变，目前ages的实际化学结构尚不清楚，体内已被鉴别出来的糖基化产物主要有：羧甲基赖氨酸(carboxy-methyl-lysine,cml)和戊糖苷(pentosidine)。pyridorin是一种强效晚期糖化终产物(ages)口服抑制剂，能够有效预制cml的生成，pyridorin被用于糖尿病肾病的治疗。现有技术中，关于晚期糖基化终产物cml作为心肌缺血再灌注损伤的早期诊断标志物及应用pyridorin抑制cml的生成从而减轻心肌缺血再灌注损伤，目前还未见报道。
技术实现要素：
本发明的第一个目的是针对现有技术中的不足，提供晚期糖基化终产物cml或其检测试剂的用途。
本发明的第二个目的是针对现有技术中的不足，提供一种检测心肌缺血再灌注损伤的诊断试剂盒。
本发明的第三个目的是针对现有技术中的不足，提供pyridorin的制药用途。
为实现上述第一个目的，本发明采取的技术方案是：
晚期糖基化终产物cml或其检测试剂的用途，用于制备检测心肌缺血再灌注损伤的诊断试剂或试剂盒。
作为本发明的一个优选实施方案，所述检测是指受试个体外周血检测。
作为本发明的一个优选实施方案，所述检测是指离体心肌组织样品检测。
作为本发明的一个优选实施方案，晚期糖基化终产物cml检测试剂是cml的特异性抗体。
为实现上述第二个目的，本发明采取的技术方案是：
一种检测心肌缺血再灌注损伤的诊断试剂盒，所述试剂盒包含检测晚期糖基化终产物cml表达的试剂。
作为本发明的一个优选实施方案，所述检测晚期糖基化终产物cml表达的试剂是cml的特异性抗体。
作为本发明的一个优选实施方案，所述检测是指受试个体外周血检测或离体心肌组织样品检测。
为实现上述第三个目的，本发明采取的技术方案是：
pyridorin在制备预防和/或治疗心肌缺血再灌注损伤的药物中的应用，所述药物改善缺血再灌注损伤后的心功能和心肌的梗死面积。
本发明还提供晚期糖基化终产物cml的用途，它被用作心肌缺血再灌注损伤的早期诊断标志物。
本发明通过westernblot，免疫荧光和ellisa实验发现，在心肌缺血再灌注后，晚期糖基化终产物cml的生成显著增加(图2，图3，图4)。
通过大量的动物实验，我们发现cml能够加重心肌的缺血再灌注损伤(图5，图6)。
我们通过实验发现应用pyridorin抑制cml的生成能够有效减轻心肌缺血再灌注损伤(图5，图6)。
本发明在动物水平验证心肌缺血再灌注后晚期糖基化终产物cml显著增加，因此可通过检测受试个体外周血或离体心肌组织样品中晚期糖基化终产物cml的水平，诊断和预示心肌缺血再灌注损伤。而应用抑制剂pyridorin能够有效减轻心肌的缺血再灌注损伤，因此抑制剂pyridorin可作为抗心肌的缺血再灌注损伤的活性成分，用于制备治疗心肌的缺血再灌注损伤的药物。本发明应用pyridorin抑制晚期糖基化终产物cml的生成，从而减轻心肌缺血再灌注损伤，为心肌缺血再灌注损伤的诊断和治疗提供新的有效的靶点。
附图说明
附图1为《中国心血管报告2016》公布的城乡死亡构成比。
附图2为westernblot实验结果。显示：c57小鼠心肌缺血再灌注后3小时及24小时cml的水平，在心肌缺血再灌注后，晚期糖基化终产物cml的生成显著增加。
附图3为elisa实验结果。显示：c57小鼠心肌缺血再灌注后3小时、24小时和48小时外周血中cml水平，在心肌缺血再灌注后，晚期糖基化终产物cml的生成显著增加。
附图4为免疫荧光实验结果。显示：c57小鼠缺血再灌注后24小时心肌组织中cml显著增加，在心肌缺血再灌注后，晚期糖基化终产物cml的生成显著增加。
附图5为干预小鼠动物实验结果。显示：增加小鼠体内cml水平，导致小鼠心肌缺血再灌注后24小时心功能显著下降；应用pyridorin抑制cml的产生，小鼠心肌缺血再灌注后24小时心功能明显改善。
附图6为干预小鼠动物实验结果。显示：增加小鼠体内cml水平，导致小鼠心肌缺血再灌注后24小时梗死面积增加；应用pyridorin抑制cml的产生，小鼠心肌缺血再灌注后24小时心肌梗死面积显著降低。
具体实施方式
下面结合具体实施方式，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明记载的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
本发明的技术路线是：
1)对野生型c57小鼠进行缺血再灌注损伤模型建立，分别取小鼠再灌注后3小时，24小时，48小时的血清及心肌组织。
2)通过elisa，wb和免疫荧光等技术检测心肌缺血再灌注损伤后小鼠外周血及心肌组织中的晚期糖基化终产物cml的水平。
3)结果发现，小鼠心肌缺血再灌注损伤后cml的水平较假手术组显著升高。
4)为进一步验证cml在心肌缺血再灌注损伤中的作用，我们在建立心肌缺血再灌注损伤模型后，给予小鼠外源性的cml，通过心超和染色的方法检测增加cml对小鼠心功能和梗死面积的影响。
5)结果发现，与单纯手术组相比，增加cml的水平，小鼠的心功能显著降低和梗死面积均显著增加。
6)为进一步验证pyridorin是否能够减轻心肌缺血再灌注损伤，我们在小鼠的饮用水中加入了pyridorin(1g/l)喂养一周后，建立心肌缺血再灌注损伤模型，通过心超和染色的方法检测pyridorin对小鼠心功能和梗死面积的影响。
7)结果发现，pyridorin能够有效改善小鼠缺血再灌注损伤后的心功能和心肌的梗死面积。
实施例1建立小鼠缺血再灌注损伤模型及检测晚期糖基化终产物cml的水平
实验材料：7-8周野生型c57b/6小鼠，cml抗体(ab27684,abcam,usa),cml检测试剂盒(oxiselecttmnε-(carboxymethyl)lysine(cml)competitiveelisakit，cellbiolabs，usa)
方法：1)取7-8周野生型c57b/6小鼠，2％异氟烷麻醉，打开小鼠左侧胸腔，6-0缝合线结扎前降支造成心肌缺血，40分钟后，松开线结，分别取松开线结后2小时，24小时，和48小时取小鼠心肌组织和外周血检测cml水平。2)外周血cml检测方法见cml检测试剂盒说明书。3)心肌组织cml检测方法：提取心肌组织蛋白质，采用westernblot检测心肌组织中cml的水平，或将心肌组织制成冰冻切片，采用免疫荧光的方法，用cml抗体检测心肌组织中cml的水平。
结果：小鼠心肌缺血再灌注损伤后cml的水平较显著升高。(图2,3,4)
实施例2cml对小鼠心功能和梗死面积的影响
实验材料：7-8周野生型c57b/6小鼠，cml试剂，evansblue染料，ttc染料
方法：1)取7-8周野生型c57b/6小鼠，2％异氟烷麻醉，打开小鼠左侧胸腔，6-0缝合线结扎前降支造成心肌缺血，40分钟后，松开线结，与心肌组织局部注射0.1mg/kgcml，缝合胸腔；2)24小时后，采用visualsonicsvevo2100影像系统检测小鼠心功能；3)2％异氟烷麻醉小鼠，打开胸腔，采用1％evansblue染料灌注小鼠心脏，取下小鼠心脏，将其切成4-5块，再将其放入盛有1％ttc的培养皿中，于37度孵育30分钟，在体式显微镜下观察心肌梗死面积。
结果：与单纯手术组相比，增加cml的水平，小鼠的心功能显著降低和梗死面积均显著增加，心功能降低。(图5，6)
实施例3pyridorin对心肌缺血再灌注损伤模型小鼠心功能和梗死面积的影响
实验材料：6-7周野生型c57b/6小鼠，pyridorin药物，evansblue染料，ttc染料
方法：1)取6-7周野生型c57b/6小鼠，在其饮用水中加入了pyridorin(1g/l)喂养一周后，采用上述方法建立心肌缺血再灌注模型；2)24小时后，采用visualsonics；vevo2100影像系统检测小鼠心功能；3)采用上述方法观察小鼠梗死面积。
结果：pyridorin能够有效改善小鼠缺血再灌注损伤后的心功能和心肌的梗死面积。(图5，6)
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员，在不脱离本发明方法的前提下，还可以做出若干改进和补充，这些改进和补充也应视为本发明的保护范围。