一种洛索洛芬酸及其盐所含的有关物质的分离测定方法与流程

本发明涉及洛索洛芬酸及其盐质量控制领域，具体而言，涉及一种洛索洛芬酸及其盐所含的有关物质的分离测定方法。

背景技术：

洛索洛芬酸及其盐用于治疗类风湿关节炎、骨性关节炎、腰痛症、肩关节周围炎、颈肩腕综合征、牙痛的消炎和镇痛、手术后、外伤后、及拔牙后的镇痛和消炎、急性上呼吸道炎的解热和消炎。洛索洛芬及其盐中最常见的为洛索洛芬钠，化学名为2-[4-(2-氧代环戊烷-1-基甲基)苯基]丙酸钠二水合物，分子式c15h17nao3.2h2o。洛索洛芬钠结构式为：

在合成该化合物的过程中，有几步重要的中间体可能会由于去除不完全而影响药物的纯度和质量；降解杂质是在药物的生产或贮藏过程中产生的，无治疗作用或影响药物的稳定性和疗效，甚至危害人体健康，对于洛索洛芬及其盐的合成和降解主要控制的有关物质有5个，分别是：布洛芬相关杂质、布洛芬杂质k、氯索洛芬开环杂质、氯索洛芬相关杂质4及氯索洛芬相关杂质3，结构式分别为：

对于合成洛索洛芬钠过程中引入的有关物质和储存过程中的降解杂质，在原料药中是需要进行质量控制的，因此，实现洛索洛芬钠及其有关物质的分离，在洛索洛芬钠的合成和储存过程的质量控制方面具有重要的意义，但是目前在质量监控方面，现有技术中一直未有比较有效的方法。

有鉴于此，特提出本发明。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供一种洛索洛芬酸及其盐所含的有关物质的分离测定方法，该分离测定方法可以实现定量以及定性的测定洛索洛芬酸及其盐中所含的有关物质，从而有效的控制洛索洛芬酸及其盐的质量，更有效的对洛索洛芬酸及其盐产品实现质量监控，保证洛索洛芬酸及其盐相关产品的纯度，对提高相关产品的质量有实际的指导意义，此外该方法专属性强，准确度高，操作简便，值得广泛推广进行应用。

为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：

本发明实施例提供了一种洛索洛芬酸及其盐所含的有关物质的分离测定方法，包括如下步骤：

将洛索洛芬酸及其盐样品溶液注入液相色谱仪中进行分离检测；

其中，所述液相色谱仪的色谱柱为c8-c18柱或t3柱，流动相为水相与有机相的混合物。

本发明为了实现洛索洛芬酸及其盐产品的质量监控，提供了一种采用液相色谱仪对洛索洛芬酸及其盐药物或其制剂中所含的有关物质进行分离测定的方法，通过摸索测定方法过程中的具体操作参数，实现了对该药物及其制剂有效的质量检测，提供了一种非常有效的监控方法，也给后续操作提供了可参考的技术路线。

优选地，所述洛索洛芬酸及其盐样品溶液中的溶剂为甲醇、流动相或稀释剂，所述稀释剂为水相与有机相的混合物；

优选地，所述洛索洛芬酸及其盐为洛索洛芬酸金属盐、洛索洛芬酸铵盐中的任意一种或两种的混合。

优选地，作为进一步可实施的方式，所述有机相为甲醇、乙腈、丙醇、异丙醇、四氢呋喃中的任意一种或多种的混合，优选地为甲醇和乙腈，更优选为甲醇。

优选地，作为进一步可实施的方式，所述水相为水与三乙胺、二乙胺、冰乙酸、醋酸铵、醋酸盐中的任意一种或多种的混合，优选地为三乙胺和冰乙酸，更优选为冰乙酸。

该分离测定方法中，流动相和稀释剂都是由无机相和水相共同组成的，洛索洛芬酸及其盐样品可以采用甲醇、稀释剂或者流动相稀释溶解，形成样品溶液，所采用的色谱柱优选为c18柱或t3柱，分离效果好，最优选择t3柱。

优选地，作为进一步可实施的方式，上述形成的洛索洛芬酸及其盐样品溶液中，洛索洛芬酸及其盐的浓度为0.1-3mg/ml，更优地为2mg/ml。

优选地，作为进一步可实施的方式，流动相的流速为0.5-2.0ml/min之间，更优地为1.0ml/min。

优选地，作为进一步可实施的方式，液相色谱仪的检测波长为200-250nm之间，柱温为20-40℃之间。

更优地，液相色谱仪的最佳检测波长为235nm，柱温箱最佳温度为35℃。

优选地，作为进一步可实施的方式，洛索洛芬酸及其盐样品溶液的进样体积为10-30μl之间，优选地为20μl。

优选地，作为进一步可实施的方式，所述稀释剂中，有机相为甲醇，水相为水、冰乙酸、三乙胺的混合，其中水、冰乙酸、三乙胺的体积比为(900-1100)：(1-2)：(1-2)，有机相与水相的体积比为(30-50)：(50-70)；

优选地，水、冰乙酸、三乙胺的体积比为1000:2:1；

优选地，有机相与水相的体积比为40:60。

优选地，作为进一步可实施的方式，所述流动相中，有机相为甲醇，水相为水、冰乙酸、三乙胺的混合，其中水、冰乙酸、三乙胺的体积比为(900-1100)：(1-2)：(1-2)之间；

优选地，水、冰乙酸、三乙胺的体积比为1000:1:1。

优选地，作为进一步可实施的方式，液相色谱采用梯度洗脱程序，梯度洗脱程序为：

在＜18min内，有机相与水相的体积比为(40-41)：(59-60)；

在＞18min内，有机相与水相的体积比为(50-75)：(25-50)；

在＞55min内，有机相与水相的体积比为(40-41)：(59-60)。

本发明的高效液相色谱仪的型号，无特别要求，本发明采用的色谱仪为waters：2695+2998(pda)。

本发明上述具体的分离测定方法，实际操作时可以按照如下方法实现：

1)取洛索洛芬酸及其盐或含洛索洛芬酸及其盐的制剂样品适量，用甲醇、流动相或稀释液溶解样品，配制成每1ml含洛索洛芬酸0.1-3mg的样品溶液。

2)设置流动相流速为0.5-2.0ml/min，流动相流速优选为1.0ml/min，检测波长为200～250nm，最佳检测波长为235nm，柱温箱温度为20-50℃，柱温箱温度最佳为30℃。

3)取1)的样品溶液10-50μl，注入液相色谱仪，完成洛索洛芬酸及其盐与有关物质的分离测定，其中：高效液相色谱仪的型号，无特别要求，采用的色谱仪型号为waters：2695+2998(pda)。

下面给出一个具体的液相色谱操作方法：

样品配制：洛索洛芬酸及其盐样品采用稀释剂溶解，浓度为2mg/ml；

稀释剂：甲醇：[水：三乙胺：冰乙酸＝1000:1:2]＝400:600；

色谱柱：t3(4.6×250mm，5μm)；

流速：1.0ml/min；

检测波长：235nm；

柱温：30℃；

进样量：20μl；

流动相：水相：水：三乙胺：冰乙酸(1000:1:1)有机相：甲醇，具体洗脱程序见下表1。

表1梯度洗脱程序

本发明通过采用t3色谱柱，能够有效的分离洛索洛芬酸及其盐有关物质，解决了洛索洛芬酸及其盐与有关物质的分离测定问题，从而确保了洛索洛芬酸及其盐原料药的质量可控。

与现有技术相比，本发明的有益效果为：

(1)本发明的洛索洛芬酸及其盐所含的有关物质的分离测定方法，该分离测定方法可以实现定量以及定性的测定洛索洛芬酸及其盐中所含的有关物质，从而有效的控制洛索洛芬酸及其盐的质量，更有效的对洛索洛芬酸及其盐产品实现质量监控，对提高相关产品的质量有实际的指导意义，此外；

(2)本发明的洛索洛芬酸及其盐所含的有关物质的分离测定方法专属性强，准确度高，操作简便，值得广泛推广进行应用，能够创造更为广阔的经济效益。

附图说明

为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1为本发明实施例1的洛索洛芬钠及其有关物质的hplc图；

图2为本发明实施例2的洛索洛芬钠及其有关物质的hplc图；

图3-5为本发明实施例3的洛索洛芬钠及其有关物质hplc图；

图6为本发明实施例3的空白溶剂的hplc图；

图7为本发明实施例4的洛索洛芬钠及其有关物质hplc图；

图8为本发明实施例4的空白溶剂的hplc图。

具体实施方式

下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。

实施例1

具体分离测定方法按照如下步骤操作进行：

样品配制：洛索洛芬酸及其盐样品采用稀释剂溶解，浓度为2mg/ml，并将洛索洛芬酸及其盐样品注入液相色谱仪中；

稀释剂：甲醇：[水：三乙胺：冰乙酸＝1000:1:1]＝40:60；

色谱柱：t3(4.6×250mm，5μm)；

流速：0.5ml/min；

检测波长：200nm；

柱温：20℃；

进样量：10μl；

流动相：水相：水：三乙胺：冰乙酸(900:1:1)有机相：甲醇，具体洗脱程序见下表2。

表2梯度洗脱程序

本发明通过采用t3色谱柱，能够有效的分离洛索洛芬酸及其盐有关物质，按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图，结果见附图1，图1中保留时间为41.081的色谱峰为洛索洛芬钠，其余色谱峰为洛索洛芬钠各杂质峰。

实施例2

具体分离测定方法按照如下步骤操作进行：

样品配制：洛索洛芬酸及其盐样品采用稀释剂溶解，浓度为0.5mg/ml，并将洛索洛芬酸及其盐样品注入液相色谱仪中；

稀释剂：甲醇：[水：三乙胺：冰乙酸＝1100:1:2]＝50:50；

色谱柱：t3(4.6×250mm，5μm)；

流速：1.0ml/min；

检测波长：250nm；

柱温：40℃；

进样量：30μl；

流动相：水相：水：三乙胺：冰乙酸(1100:2:1)有机相：甲醇，具体洗脱程序见下表3。

表3梯度洗脱程序

本发明通过采用t3色谱柱，能够有效的分离洛索洛芬酸及其盐有关物质，按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图，结果见附图2，图2中保留时间为34.146的色谱峰为洛索洛芬钠，其余色谱峰为洛索洛芬钠各杂质峰。

实施例3

具体分离测定方法按照如下步骤操作进行：

样品配制：洛索洛芬酸及其盐样品采用稀释剂溶解，浓度为3mg/ml，并将洛索洛芬酸及其盐样品注入液相色谱仪中；

稀释剂：甲醇：[水：三乙胺：冰乙酸＝900:1:1]＝30:70；

色谱柱：t3(4.6×250mm，5μm)；

流速：2.0ml/min；

检测波长：235nm；

柱温：25℃；

进样量：20μl；

流动相：水相：水：三乙胺：冰乙酸(1000:1:2)有机相：甲醇，具体洗脱程序见下表4。

表4梯度洗脱程序

本发明通过采用t3色谱柱，能够有效的分离洛索洛芬酸及其盐有关物质，按上述条件进行高效液相色谱分析，3个样品均记录色谱图，色谱图的结果分别参见图3-5，图3中保留时间为35.055min的色谱峰为洛索洛芬钠，其余色谱峰为洛索洛芬钠各杂质峰。图4中，保留时间为35.052min的色谱峰为洛索洛芬钠，可以看出在该条件下洛索洛芬钠与其杂质可以完全分离，图5中保留时间为34.443min的色谱峰为洛索洛芬钠，可以看出在该条件下洛索洛芬钠与其杂质可以完全分离。虽然每个样品的保留时间可能有些不同，但是本发明的分离测定方法均可以实现完全分离，图6为不含有样品时空白试剂的液相色谱图，用于与上述图3-5的色谱图对比来用。

实施例4

具体分离测定方法按照如下步骤操作进行：

样品配制：洛索洛芬酸及其盐样品采用甲醇溶解，浓度为1mg/ml，并将洛索洛芬酸及其盐样品注入液相色谱仪中；

色谱柱：thermo，bdshypersilc8，4.6×250mm，5μm；

流速：1.0ml/min；

检测波长：235nm；

柱温：30℃；

进样量：20μl；

流动相：水相：水：三乙胺：冰乙酸(1000:1:2)有机相：甲醇，具体洗脱程序见下表4。

表5梯度洗脱程序

本发明通过采用c8色谱柱，能够有效的分离洛索洛芬酸及其盐有关物质，按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图，结果见附图7-8，图7中保留时间为25.158的色谱峰为洛索洛芬钠，其余色谱峰为洛索洛芬钠各杂质峰,图8为不含有样品时空白试剂的液相色谱图。

尽管已用具体实施例来说明和描述了本发明，然而应意识到，在不背离本发明的精神和范围的情况下可以作出许多其它的更改和修改。因此，这意味着在所附权利要求中包括属于本发明范围内的所有这些变化和修改。