降钙素原PCT定量测定试剂盒的制作方法

本实用新型涉及试剂盒的技术领域，是一种降钙素原PCT定量测定试剂盒。

背景技术：

目前，PCT的检测方法较多，不仅可以定性亦可以做到定量检测。常用的方法有下述几种：放射免疫分析法、化学发光法、电化学发光法、透射免疫浊度法、干式免疫荧光法及胶体金比色法。

放射免疫分析法利用人工合成的多克隆抗体特异地识别和连接合成氨基酸降钙素原。该法检测耗时长（19～22h），而且有放射性元素的污染，使用受到限制。化学发光法（ILMA）运用双单克隆抗体（降钙素原抗体和抗降钙素原抗体），分别与PCT分子结合，可排除交叉反应。但该方法操作费时，操作人员必须具备专门的操作技能，2h后才可以出结果。电化学发光法灵敏度高、线性范围宽、适用面广，但电化学发光法测定需要专门的仪器及配套试剂，且多为进口，成本较为昂贵，在基层实验室很难开展。透射免疫浊度法是将样品中的PCT与试剂中的PCT单克隆抗体发生抗原-抗体反应，使反应液浊度增加，并在一定范围内反应液浊度与所加入抗原的量呈线性关系。但该方法准确度低。干式免疫荧光法运用免疫层析技术，将荧光标记的降钙素原单克隆抗体包被于试纸条上，检测样本与试纸条上的标记抗体混合，根据荧光抗体的信号强度测量降钙素原的含量。此方法制备简单，操作成本低，但由于标记抗体与抗原的结合为固相反应，使其反应不够充分，活性较差，影响检测结果。胶体金比色法采用胶体金技术，包括胶体金标记的抗降钙素原的单克隆抗体和用作包被的抗降钙素原多克隆抗体，当标本（血清或血浆）加入标本孔，金标单克隆抗体与标本中的PCT结合，形成金标记的抗原抗体复合物。该法具有快速简便，易观察的特点，但无法准确测定PCT含量，并且现有检测PCT含量的试剂盒防护性能较差，很容易在使用的过程中发生损坏。

技术实现要素：

本实用新型提供了一种降钙素原PCT定量测定试剂盒，克服了上述现有技术之不足，其能有效解决现有试剂盒无法准确定量测定PCT的问题，并且能够进一步解决现有试剂盒在使用过程中容易损坏的问题。

本实用新型的技术方案是通过以下措施来实现的：一种降钙素原PCT定量测定试剂盒包括盒体、盖体、试纸条，盒体与盖体之间设置有相互配合的卡扣结构，盖体通过卡扣结构扣合在盒体上，盖体上设置有加样孔、反应口，盒体内的底部设置有卡放试纸条的卡槽，试纸条设置在卡槽内，试纸条上包被有PCT单克隆抗体和羊抗鼠抗体，盖体与盒体都为三层结构，从外至内依次为抗菌层、硬质层、防水层。

下面是对上述实用新型技术方案的进一步优化或/和改进：

上述试纸条包括底板、玻璃纤维层、固相抗体反应膜、吸水纸，在底板上从左至右依次粘贴有玻璃纤维层、固相抗体反应膜、吸水纸，它们之间彼此紧密相连。

上述加样孔与试纸条上的玻璃纤维层相对应，反应口与试纸条上的固相抗体反应膜相对应，固相抗体反应膜为硝酸纤维素膜，硝酸纤维素膜上包被检测线与质控线，检测线包被PCT单克隆抗体，质控线包被羊抗鼠抗体。

上述卡扣结构为圆筒、插柱，盒体内侧壁的四周方向上设置有多个圆筒，盖体的下端面上设置有与圆筒相对应的多个插住。

上述抗菌层为抗菌纤维聚酯复合膜材质。

上述硬质层为药用塑料复合硬片材质。

上述防水层为塑料膜材质。

本实用新型结构合理而紧凑，其检测原理为免疫荧光双抗体夹心法，检测缓冲液中含有荧光染料标记的PCT单克隆抗体，试纸条上的检测线包被与标记抗体配对的PCT单克隆抗体，标记抗体与包被抗体为协同抗体，能与抗原的多个位点结合，形成双抗体夹心复合物，配对抗体与样本中的抗原紧密的结合在一起，可排除因检测样本中各种各样蛋白质的非特异性吸附产生的干扰，所形成的双抗体夹心免疫复合物稳定性好，具有灵敏度高，特异性强等优点，本实用新型以液相反应取代固相反应，与传统的试纸条检测方法相比，液相反应具有材料混合均一，稳定性好，反应活性高等优势，使本实用新型具有检测灵敏度高，准确性好，可定量检测等优点。

附图说明

附图1为本实用新型最佳实施例的主视剖视结构示意图。

附图2为本实用新型最佳实施例的俯视结构示意图。

附图中的编码分别为：1为盒体，2为盖体，3为加样孔，4为反应口，5为卡槽，6为底板，7为玻璃纤维层，8为硝酸纤维素膜，9为吸水纸，10为检测线，11为质控线，12为圆筒，13为插柱。

具体实施方式

本实用新型不受下述实施例的限制，可根据本实用新型的技术方案与实际情况来确定具体的实施方式。

在本实用新型中，为了便于描述，各部件的相对位置关系的描述均是根据说明书附图1的布图方式来进行描述的，如：上、下、左、右等的位置关系是依据说明书附图1的布图方向来确定的。

下面结合实施例及附图对本实用新型作进一步描述：

如附图1、2所示，该降钙素原PCT定量测定试剂盒包括盒体1、盖体2、试纸条，盒体1与盖体2之间设置有相互配合的卡扣结构，盖体2通过卡扣结构扣合在盒体1上，盖体2上设置有加样孔3、反应口4，盒体1内的底部设置有卡放试纸条的卡槽5，试纸条设置在卡槽5内，试纸条上包被有PCT单克隆抗体和羊抗鼠抗体，盖体2与盒体1都为三层结构，从外至内依次为抗菌层、硬质层、防水层。

本实用新型在实际使用过程，还包括ID芯片、检测缓冲液和配备的免疫荧光定量分析仪，使用过程中将ID芯片插入到仪器中，用移液器吸取血清或血浆加入到检测缓冲液中并充分混匀，吸取样本混合液加入到盖体2上的加样孔3内，室温放置15分钟，将盒体1插入到免疫荧光分析仪的样本槽中，按“检测”键，从免疫荧光分析仪的显示屏幕上可读取数据，使本实用新型具有检测灵敏度高，准确性好，可定量检测等优点，再加上盖体2与盒体1都为三层结构，可以大大提高本实用新型的安全性，降低了盒体1在使用过程中的损坏几率。

可根据实际需要，对上述降钙素原PCT定量测定试剂盒作进一步优化或/和改进：

如附图1、2所示，试纸条包括底板6、玻璃纤维层7、固相抗体反应膜、吸水纸9，在底板6上从左至右依次粘贴有玻璃纤维层7、固相抗体反应膜、吸水纸9，它们之间彼此紧密相连。

如附图1、2所示，加样孔3与试纸条上的玻璃纤维层7相对应，反应口4与试纸条上的固相抗体反应膜相对应，固相抗体反应膜为硝酸纤维素膜8，硝酸纤维素膜8上包被检测线10与质控线11，检测线10包被PCT单克隆抗体，质控线11包被羊抗鼠抗体。

底板6为低荧光特性，承载前述各种膜结构，其根据试纸条的形状对应裁剪而成，如本实施例为长条形，玻璃纤维层7为待检样品收集区，其前端搭接粘贴于底板6前端上，后端搭接覆盖于硝酸纤维素膜8前端。固相抗体反应膜承载了产品的毛细管运动，选择合适的固相抗体反应膜对提高产品的灵敏度起着重要的作用，因此本实用新型选用的固相抗体反应膜为硝酸纤维素膜8，硝酸纤维素膜8是一种低荧光特性膜，硝酸纤维素膜8的前端搭设于玻璃纤维层7与吸水纸9之间且搭接粘贴于底板6上。吸水纸9其前端覆盖于硝酸纤维素膜8后端一定长度，其后端搭接于底板6后端。

如附图1、2所示，卡扣结构为圆筒12、插柱13，盒体1内侧壁的四周方向上设置有多个圆筒12，盖体2的下端面上设置有与圆筒12相对应的多个插住。此种卡扣结构较为简单、常见，能够方便地将盖体2与盒体1固定在一起。

根据实际需要，抗菌层为抗菌纤维聚酯复合膜材质，硬质层为药用塑料复合硬片材质，防水层为塑料膜材质。用这样结构制成的盒体1与盖体2，其抗菌、防潮、强度好，抗挤压能力好，能够有效保证本实用新型在使用过程中的安全。

以上技术特征构成了本实用新型的最佳实施例，其具有较强的适应性和最佳实施效果，可根据实际需要增减非必要的技术特征，来满足不同情况的需求。

本实用新型最佳实施例的使用过程：

本实用新型在实际使用过程，还包括ID芯片、检测缓冲液和配备的免疫荧光定量分析仪，使用过程中将ID芯片插入到仪器中，用移液器吸取血清或血浆加入到检测缓冲液中并充分混匀，吸取样本混合液加入到盖体2上的加样孔3内，室温放置15分钟，将盒体1插入到免疫荧光分析仪的样本槽中，按“检测”键，从免疫荧光分析仪的显示屏幕上可读取数据。本实用新型工作原理为缓冲液中荧光标记的PCT抗体和血液中的PCT抗原结合形成抗原抗体复合物，当混合样本加到加样孔3内后，复合物通过层析作用扩散到硝酸纤维素膜8上，并被检测线10上的与标记抗体配对的PCT抗体所捕获，因此血液样本中PCT含量越高，检测线10上复合物积累量越多，荧光抗体的信号反映了被捕获的PCT数量。

由于PCT的浓度由荧光抗体的信号强度决定，因此检测缓冲液中的PCT单克隆抗体在整个检测过程中起着非常重要的作用，它既能与荧光染料结合，又能与PCT抗原结合，PCT单克隆抗体与PCT抗原的结合是自发的过程；而PCT单克隆抗体与荧光染料的结合则是一项人为的非常关键的操作，该产品制备过程中一个重要的环节就是荧光染料标记PCT单克隆抗体，标记荧光染料的PCT单克隆抗体要求性能稳定，溶于缓冲液后无沉淀。

本实用新型采用PCT协同抗体，表现为检测缓冲液中荧光染料标记的PCT单克隆抗体和盒体1中与标记抗体配对的PCT单克隆抗体，上述PCT协同抗体与样本中PCT抗原的不同位点结合形成双抗体夹心复合物，从而检测出样本中PCT的含量，本实用新型中的PCT协同抗体，整合了单抗和多抗的优势，不仅具有“生物导弹”能目标明确的与单一特异抗原决定簇结合的作用，还具有多克隆抗体可识别多个抗原表位的特点，使荧光标记的抗体和与其配对的抗体与样本中的抗原紧密的结合在一起，可排除因检测样本中各种各样蛋白质的非特异性吸附产生的干扰，所形成的双抗体夹心免疫复合物稳定性好，具有灵敏度高，特异性强等优点。