利用试剂盒配方筛选蛋白质自组装条件的方法与流程

本发明属于生物材料领域，具体涉及一种利用试剂盒配方筛选蛋白质自组装条件的方法。

背景技术：

目前，对于蛋白质自组装体的相关研究已有很多文献报道。蛋白质自组装体因形貌多样性及其自身的稳定性等优点在食品加工及生物医药开发等领域有着广泛的应用前景(acar,h.,etal.,self-assemblingpeptide-basedbuildingblocksinmedicalapplications.advanceddrugdeliveryreviews,2017.110:p.65-79.)，蛋白质自组装体的相关研究正吸引着越来越多科学家的研究兴趣和重视。然而，目前尚无一种理论或理性手段可以指导目标蛋白质发生自组装溶液条件的配方。蛋白质自组装体的最终实现，均有赖于恰当的自组装溶液条件。现有研究均是基于已知可实现自组装的溶液条件(往往是偶然的发现)基础上，进一步开展自组装过程的相关研究(luo,q.,etal.,proteinassembly:versatileapproachestoconstructhighlyorderednanostructures.chemicalreviews,2016.116(22):p.13571-13632.)，而对于生物体这个巨型组装体而言，蛋白质自组装过程更是时时刻刻发生。研究蛋白质的自组装形成的条件不但能够揭示在蛋白质自组装过程中蛋白质分子之间，以及蛋白质分子与其它分子之间的相互作用，而且通过进一步分析形成的蛋白质自组装溶液条件组分，可以更精准地捕获蛋白质自组装过程，进而能够实现对特定蛋白质自组装体形成过程的有效控制，同时通过多种条件获取不同蛋白质自组装体，有利于拓展不同蛋白质自组装体的应用。因此，本领域对发现新的自组装条件提出了越来越迫切的需求。

技术实现要素：

为了克服现有方法实用性差的不足，本发明提供一种利用试剂盒配方筛选蛋白质自组装条件的方法。该方法首先配制蛋白质自组装筛选试剂盒，再选择拟实现自组装的目标蛋白，选择目标蛋白质的缓冲液，用所选的缓冲液配制蛋白质溶液作为蛋白质自组装过程的溶液，选择酶标条或96孔板作为蛋白质自组装过程的容器，将所配制的蛋白质溶液与蛋白质自组装筛选试剂盒中的试剂混合后加入酶标条或96孔板中，将酶标条或96孔板放入控温箱中，定点定时取样，利用光学显微镜、高分辨率扫描电镜观察蛋白质自组装后的形态。本发明使用预先配制的蛋白质自组装筛选试剂盒，分别与目标蛋白质混合，寻找蛋白质自组装的多种条件，解决了背景技术方法难以获得蛋白质自组装条件的技术问题。在目标蛋白质自组装条件未知或数量有限条件下，获得了10-20个不同的自组装条件，大幅提升获得自组装条件的能力，实用性好。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案：一种利用试剂盒配方筛选蛋白质自组装条件的方法，其特点是包括以下步骤：

步骤一、依据所设计的试剂盒配方表，配制蛋白质自组装筛选试剂盒。

步骤二、选择拟实现自组装的目标蛋白。

步骤三、选择目标蛋白质的缓冲液。

步骤四、用步骤三中的缓冲液配制1μg/ml-20mg/ml蛋白质溶液作为蛋白质自组装过程的溶液。

步骤五、选择酶标条或96孔板作为蛋白质自组装过程的容器。

步骤六、将步骤四中配制的1μg/ml-10mg/ml的蛋白质溶液与步骤一蛋白质自组装筛选试剂盒中的试剂分别按照体积比1:1混合，混合后加入步骤五中的酶标条或96孔板中，且每孔体积为500nl-10μl。

步骤七、将步骤六完成的酶标条或96孔板放入20℃控温箱中。

步骤八、对步骤七得到的样品，定点定时取样，利用光学显微镜、高分辨率扫描电镜观察蛋白质自组装后的形态。

本发明的有益效果是：该方法首先配制蛋白质自组装筛选试剂盒，再选择拟实现自组装的目标蛋白，选择目标蛋白质的缓冲液，用所选的缓冲液配制蛋白质溶液作为蛋白质自组装过程的溶液，选择酶标条或96孔板作为蛋白质自组装过程的容器，将所配制的蛋白质溶液与蛋白质自组装筛选试剂盒中的试剂混合后加入酶标条或96孔板中，将酶标条或96孔板放入控温箱中，定点定时取样，利用光学显微镜、高分辨率扫描电镜观察蛋白质自组装后的形态。本发明使用预先配制的蛋白质自组装筛选试剂盒，分别与目标蛋白质混合，寻找蛋白质自组装的多种条件，解决了背景技术方法难以获得蛋白质自组装条件的技术问题。在目标蛋白质自组装条件未知或数量有限条件下，获得了10-20个不同的自组装条件，大幅提升获得自组装条件的能力，实用性好。

下面结合附图和具体实施方式对本发明作详细说明。

附图说明

图1是本发明方法实施例1得到的乳球蛋白质不同组装体的体式显微镜照片。其中(a)是10mg/ml乳球蛋白在蛋白质筛选试剂盒表1条件5中孵育1天后获得的树枝状自组装体。(b)是10mg/ml乳球蛋白在蛋白质筛选试剂盒表1条件19中孵育1天后获得的球状自组装体。(c)是10mg/ml乳球蛋白在蛋白质筛选试剂盒表1条件86中孵育1天后获得的球状自组装体。

图2是本发明方法实施例2得到的乳球蛋白质不同组装体的高分辨率扫描电镜照片。(a)是1μg/ml乳球蛋白在蛋白质筛选试剂盒表1条件45中孵育1小时后获得的虫子状自组装体。(b)是1μg/ml乳球蛋白在蛋白质筛选试剂盒表1条件67中孵育1小时后获得的伞状乳球蛋白自组装体。

图3是本发明方法实施例3得到的胃蛋白酶不同组装体的体式显微镜照片。(a)是10mg/ml胃蛋白酶在蛋白质筛选试剂盒表1条件21中孵育1天后获得的丝状缠绕式自组装体。(b)是10mg/ml胃蛋白酶在蛋白质筛选试剂盒表1条件5中孵育1天后获得的刺状自组装体。(c)是10mg/ml胃蛋白酶在蛋白质筛选试剂盒表1条件75中孵育1天后获得的针状自组装体。

图4是本发明方法实施例4得到的血红蛋白不同组装体的体式显微镜照片。(a)是10mg/ml血红蛋白在蛋白质筛选试剂盒表1条件15中孵育1天后获得的银杏叶状自组装体。(b)是10mg/ml血红蛋白在蛋白质筛选试剂盒表1条件31中孵育1天后获得的花朵状自组装体。(c)是10mg/ml血红蛋白在蛋白质筛选试剂盒表1条件53中孵育1天后获得的团簇状自组装体。

具体实施方式

以下实施例参照图1-4。

实施例1。10mg/ml乳球蛋白利用蛋白质筛选试剂盒筛选不同自组装体的研究。

步骤一、依据本发明设计的试剂盒配方表，配制蛋白质自组装筛选试剂盒。蛋白质自组装筛选试剂盒配方如下表1。

表1

步骤二、选择乳球蛋白作为目标蛋白。

步骤三、选择ph＝7.2的hepesna作为缓冲液。

步骤四、用步骤三中的缓冲液配制10mg/ml乳球蛋白溶液1ml。

步骤五、选择酶标条作为容器。

步骤六、将步骤四种配置的乳球蛋白溶液10mg/ml与步骤一蛋白质筛选试剂盒中表1中的试剂按照体积比1:1混合，混合后加入步骤五所选的酶标条中，且每孔体积为500nl。

步骤七、将混合好的溶液放于20℃控温箱保存。

步骤八、每隔一天，对混合样品利用体式显微观察。

如图1所示。通过体式显微镜证明，得到了10mg/ml乳球蛋白的不同的自组装体。

实施例2。1μg/ml乳球蛋白利用蛋白质筛选试剂盒筛选不同自组装体的研究。

步骤一、依据本发明设计的试剂盒配方表，配制蛋白质筛选试剂盒。试剂盒配方见表1。

步骤二、选择乳球蛋白作为目标蛋白。

步骤三、选择ph＝7.2的hepesna作为缓冲液。

步骤四、用步骤三中的缓冲液配制1μg/ml乳球蛋白溶液1ml。

步骤五、选择96孔板作为容器。

步骤六、将步骤四中配制的蛋白质溶液1μg/ml与步骤一蛋白质筛选试剂盒中的试剂分别按照体积比1:1混合，混合后加入步骤五所选的96孔板中，且每孔体积为10μl。

步骤七、将混合好的溶液放于20℃控温箱保存。

步骤八、每隔一天，对混合样品利用高分辨率扫描电镜观察。

如图2所示。通过高分辨率扫描电镜证明，得到了1μg/ml乳球蛋白的不同的自组装体。

实施例3。10mg/ml胃蛋白酶利用蛋白质筛选试剂盒筛选不同自组装体的研究。

步骤一、依据本发明设计的试剂盒配方表，配制蛋白质筛选试剂盒。试剂盒配方见表1。

步骤二、选取胃蛋白酶作为目标蛋白。

步骤三、选取ph＝7.2hepesna作为缓冲液。

步骤四、用步骤三中的缓冲液配制15mg/ml胃蛋白酶溶液1ml。

步骤五、选择酶标条作为容器。

步骤六、将步骤四中配制的胃蛋白酶溶液15mg/ml与步骤一试剂盒中的试剂分别按照体积比1:1混合，混合后加入步骤五中的酶标条中，且每孔体积为5μl。

步骤七、将混合好的溶液放于20℃控温箱保存。

步骤八、每隔一天，对混合样品利用体式显微镜观察。

如图3所示。通过体式显微镜，得到了10mg/ml胃蛋白酶的不同的自组装体。

实施例4。10mg/ml血红蛋白利用蛋白质筛选试剂盒筛选不同自组装体的研究。

步骤一、依据本发明设计的试剂盒配方表，配制蛋白质筛选试剂盒。试剂盒配方见表1。

步骤二、选取分离纯化的血红蛋白作为目标蛋白。

步骤三、选取ph＝7.2hepesna作为缓冲液。

步骤四、用步骤三中的缓冲液配制20mg/ml血红蛋白溶液1ml。

步骤五、选择96孔板作为容器。

步骤六、将步骤四中配制的乳球蛋白溶液20mg/ml与步骤一试剂盒中的试剂分别按照体积比1:1混合，混合后加入步骤五中的96孔板中，且每孔体积为2μl。

步骤七、将混合好的溶液放于20℃控温箱保存。

步骤八、每隔一天，对混合样品利用体式显微镜观察。

如图4所示。通过体式显微镜，得到了10mg/ml血红蛋白的不同的自组装体。