一种非甾体抗炎药非罗考昔含量的测定方法与流程

本发明属于有机物含量检测
技术领域：
，尤其涉及一种非甾体抗炎药非罗考昔含量的测定方法。
背景技术：
：非罗考昔是一种重要的非甾体抗炎药，其作用主要是通过抑制环氧化酶-2(cox-2)的合成，来阻断花生四烯酸转化为前列腺素而发挥其解热、镇痛、抗炎的功效。cox-2是环氧化酶的一种亚型，主要负责合成前列腺素，调控疼痛、炎症及发烧，选择性抑制cox-2可以有效缓解骨关节炎疼痛，经fda批准，非罗考昔目前可以用于治疗马类动物的关节炎疾病以及由临床手术引起的急、慢性疼痛和炎症。不像其他作用于马类的非甾体抗炎药，非罗考昔是高选择性的环氧化酶-2抑制剂，经口服后，非罗考昔能够迅速地几乎完全被吸收，因此其具有很高的应用价值。非罗考昔，英文名：firocoxib，cas号为189954-96-9，分子式为c17h20o5s，分子量为336.40，熔点为，溶于极性溶剂(如甲醇、乙腈)，结构式如下式所示：现有技术中公开了通过高效液相色谱能够测定非罗考昔的纯度，但是没有具体的测试条件的相关记载，且存在准确度低的问题。技术实现要素：有鉴于此，本发明的目的在于提供一种非甾体抗炎药非罗考昔含量的测定方法。本发明具体限定了高效液相色谱测定非罗考昔含量的色谱条件，提高了检测方法的准确度。为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：本发明提供了一种非甾体抗炎药非罗考昔含量的测定方法，包括以下步骤：利用高效液相色谱分别测定非罗考昔标准品溶液和非罗考昔供试品溶液中非罗考昔的峰面积；根据所述峰面积，用外标法计算非罗考昔供试品溶液中非罗考昔的含量；所述高效液相色谱的色谱条件为：色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充物；流动相：乙腈、水和酸按体积比为40～60：40～60：0.005～0.1组成的混合溶液，所述酸为高氯酸、三氟乙酸或磷酸；流速：0.8～1.5ml/min；柱温：25℃～45℃；检测波长：288nm～292nm；进样量：5μl～20μl。优选地，所述检测波长为290nm。优选地，所述进样量10μl。优选地，所述流动相为乙腈、水和酸按体积比为45：55：0.05～0.1组成的混合溶液。优选地，所述流动相使用前用0.45μm滤膜过滤并脱气处理。优选地，所述色谱柱的长度为150mm、200mm或250mm。优选地，所述外标法的计算公式为供试品溶液中非罗考昔含量(％)＝(供试品溶液峰面积/标准品溶液峰面积)*(标准品溶液浓度/供试品溶液浓度)*100％。优选地，所述非罗考昔标准品溶液和非罗考昔供试品溶液中的稀释液独立地为甲醇、乙腈、甲醇水混合液或乙腈水混合液。优选地，所述甲醇水混合液中甲醇和水的体积比为1:1。优选地，所述乙腈水混合液中乙腈和水的体积比为1:1。优选地，所述非罗考昔标准品溶液和非罗考昔供试品溶液在使用前独立地用0.45μm滤膜过滤。本发明提供了一种非甾体抗炎药非罗考昔含量的测定方法，包括以下步骤：利用高效液相色谱分别测定非罗考昔标准品溶液和非罗考昔供试品溶液中非罗考昔的峰面积；根据所述峰面积，用外标法计算非罗考昔供试品溶液中非罗考昔的含量；所述高效液相色谱的色谱条件为：色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充物；流动相：乙腈、水和酸按体积比为40～60：40～60：0.005～0.1组成的混合溶液，所述酸为高氯酸、三氟乙酸或磷酸；流速：0.8～1.5ml/min；柱温：25℃～45℃；检测波长：288nm～292nm；进样量：5μl～20μl。本发明通过高效液相色谱进行含量分析检测，是一种简便、分离效果好、准确度高、精密度高的非罗考昔含量检测方法；其检测范围大，检测结果准确。实施例的数据表明，本发明提供的含量测定方法分析速度快，每个样品，运行时间30min即可完成；样品用量少，每次用量约10mg，进样量为10ul，可极大节省样品用量；精密度高，其峰面积的rsd为0.19％，证明其精密度较高；准确度高，平均回收率为99.3％，rsd为0.75％；检测范围大，在1～500μg/ml范围内，线性关系良好。附图说明图1为实施例1非罗考昔标准品的高效液相色谱谱图；图2为实施例1得到的标准曲线方程。具体实施方式本发明提供了一种非甾体抗炎药非罗考昔含量的测定方法，包括以下步骤：利用高效液相色谱分别测定非罗考昔标准品溶液和非罗考昔供试品溶液中非罗考昔的峰面积；根据所述峰面积，用外标法计算非罗考昔供试品溶液中非罗考昔的含量；所述高效液相色谱的色谱条件为：色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充物；流动相：乙腈、水和酸按体积比为40～60：40～60：0.005～0.1组成的混合溶液，所述酸为高氯酸、三氟乙酸或磷酸；流速：0.8～1.5ml/min；柱温：25℃～45℃；检测波长：288nm～292nm；进样量：5μl～20μl。本发明利用高效液相色谱分别测定非罗考昔标准品溶液和非罗考昔供试品溶液中非罗考昔的峰面积。在本发明中，优选采用岛津lc-20at高效液相色谱仪进行高效液相色谱分析。本发明对所述非罗考昔标准品溶液中非罗考昔标准品的来源没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的市售商品即可。在本发明中，所述检测波长优选为290nm。在本发明中，所述流动相为乙腈、水和酸按体积比优选为45：55：0.05～0.1组成的混合溶液，更优选为乙腈、水和三氟乙酸按体积比45：55：0.05组成的混合溶液或乙腈、水和高氯酸按体积比45：55：0.1组成的混合溶液或者乙腈、水和磷酸按体积比50:50:0.025组成的混合溶液。在本发明中，所述流动相优选为现用现配。在本发明中，所述流动相使用前优选用0.45μm滤膜过滤并脱气处理。本发明对所述脱气处理的具体方式没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的方法即可。在本发明中，所述色谱柱的长度优选为150mm、200mm或250mm。在本发明中，所述色谱柱优选为ymc、inertsil、hypersil或orbax的c18柱。在本发明中，所述进样量优选为10μl。在本发明中，所述非罗考昔标准品溶液和非罗考昔供试品溶液中的稀释液独立地优选为甲醇、乙腈、甲醇水混合液或乙腈水混合液。在本发明中，所述甲醇水混合液中甲醇和水的体积比优选为1:1。在本发明中，所述乙腈水混合液中乙腈和水的体积比优选为1:1。在本发明中，优选分别将10mg的非罗考昔标准品和非罗考昔供试品使用稀释剂稀释至25ml，分别得到所述非罗考昔标准品溶液和非罗考昔供试品溶液。在本发明中，所述非罗考昔标准品溶液和非罗考昔供试品溶液优选在使用前独立地用0.45μm滤膜过滤。得到所述非罗考昔标准品溶液和非罗考昔供试品溶液中非罗考昔的峰面积后，本发明根据所述峰面积，用外标法计算非罗考昔供试品溶液中非罗考昔的含量。在本发明中，所述外标法的计算公式优选为供试品溶液中非罗考昔含量(％)＝(供试品溶液峰面积/标准品溶液峰面积)*(标准品溶液浓度/供试品溶液浓度)*100％。下面结合实施例对本发明提供的一种非甾体抗炎药非罗考昔含量的测定方法进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。实施例1精密称量标准品10mg，置于25ml容量瓶中，加入乙腈溶解，用乙腈定容至刻度，摇匀后用0.45μm有机滤头过滤，得到标准品溶液；精密称取非罗考昔原料药约10mg，置于25ml容量瓶中，加入乙腈溶解，然后用乙腈定容至刻度，摇匀后用0.45μm有机滤头过滤，得到供试品溶液。色谱条件：岛津lc-20at高效液相色谱，inertsilods-3(250*4.6mm，5μm)；流动相：乙腈-水-高氯酸＝45:55:0.1(v/v/v)；检测波长290nm；流速1.5ml/min；柱温35℃；进样量10μl；采集时间30min。图1为非罗考昔标准品进行高效液相色谱得到的高效液相色谱图，由图1可以看出，本发明的含量测定方法能够实现非罗考昔含量的测定。按照上述色谱条件，对非罗考昔标准品和供试品进样，6次标准品溶液进样的峰面积平均值为10245219，rsd％为0.03％。非罗考昔供试品含量(％)＝(供试品峰面积/标准品峰面积)*(标准品浓度/供试品浓度)*100％根据外标法，将上述数值带入，得到供试品非罗考昔含量为98.4％。方法学考察：1、精密度考察；称取6份非罗考昔供试品，每个样品测定一次，记录6次测定的峰面积。由表1可以看出，6次测定的平均峰面积为10209051，峰面积的rsd为0.22％，结果表明本hplc法检测非罗考昔含量精密度高，重现性好。表1称取6份非罗考昔供试品的峰面积测定结果次数123456峰面积1018289710213165102363581018896710199326102335922、线性范围根据上述方法，配制浓度为500μg/ml的非罗考昔标准品，加入乙腈分别稀释成1μg/ml、10μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml、400μg/ml、500μg/ml的溶液，按照本方法进行线性回归，得到的标准方程如图2所示，回归方程为y＝25405x-33708，r2＝0.9999。结果表明，非罗考昔在1μg/ml～500μg/ml范围内，线性关系良好。3、准确度试验称取已知含量的非罗考昔供试品适量，分别加入一定量的非罗考昔标准品，配制成80％、100％、120浓度的样品，每个样品各配制3份，按上述方法测定，计算回收率。结果表明，该方法的平均回收率为99.3％，rsd为0.75％，则该方法准确度较好。实施例2样品及标准品配制同实例1色谱条件：岛津lc-20at高效液相色谱，ymctriartc18(150*4.6mm，3μm)；流动相：乙腈-水-磷酸＝50:50:0.025(v/v/v)；检测波长288nm；流速1.0ml/min；柱温40℃；采集时间30min。按上述色谱条件，对标准品连续进样6次，测的其平均峰面积为10213165，rsd为0.09％；按外标法计算非罗考昔供试品含量为98.2％。实施例3样品及标准品配制同实例1色谱条件：岛津lc-20at高效液相色谱，hypersilods-2(150*4.6mm，5μm)；流动相：乙腈-水-三氟乙酸＝55:45:0.05(v/v/v)；检测波长290nm；流速0.8ml/min；柱温35℃；采集时间30min。按上述色谱条件，对标准品连续进样6次，测的其平均峰面积为10246553，rsd为0.12％；按外标法计算非罗考昔供试品含量为98.1％。以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本
技术领域：
的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。当前第1页12