水环境中百菌清残留的检测分析方法与流程

本发明涉及检测技术领域，具体的说是一种水环境中百菌清残留的检测分析方法。

背景技术：

百菌清(chlorothalonil)化学名称为四氯间苯二腈，是一种非内吸性、广谱、高效的保护性杀菌剂，对多种作物的真菌病害具有防治作用。其杀菌机理是与真菌细胞中的磷酸甘油醛脱氢酶发生作用，结合脱氢酶体中含有半胱氨酸的蛋白质，使脱氢酶丧失活性，破坏真菌细胞的新陈代谢，从而导致真菌的死亡。

百菌清从生产开始，至今在世界农业生产中的使用已经超过50年，由于广泛和长期使用，在农作物和自然生态环境中都检测到百菌清的残留，对环境和食品安全具有潜在威胁。百菌清对人和哺乳动物低毒，会引起皮肤炎症、眼睛不适和胃肠刺激等症状，对鱼、贝类等水生生物高毒，美国国家环境保护总署已经将其列为可能使人类致癌的物质之一。我国2012年修订的《生活饮用水卫生标准》首次将百菌清列入了监测范围。

201210338528.0公开了一种快速、灵敏的检测果蔬表面农药(其中包括百菌清)残留的方法，以离子迁移谱技术为基本检测技术，采用正、负离子模式，建立了离子迁移谱检测农药残留的快速定性、半定量分析方法。将含有不同农药样品的采样薄片，烘干溶剂送入到离子迁移谱热解析进样器内进行检测分析获得检测信号，通过样品峰迁移时间和信号强度进行定性和半定量分析。该方法为定性和半定量分析，不能准确分析百菌清的具体含量水平。

因此，目前亟需研究出适用于水环境中百菌清残留的检测分析方法，为全面普查水环境中百菌清的含量水平及分布特征提供可靠的分析手段。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供水环境中百菌清残留的检测分析方法，该检测分析方法操作简单、方法可靠、回收率合理，其加标回收率为80～120％，rsd小于10％，并且检出限较低(检出限可以达到0.012μg/l)，在水生生物分析检测领域具有广阔的应用前景。

本发明解决其技术问题所采取的技术方案是：

水环境中百菌清残留的检测分析方法，包括以下步骤：

(1)水样前处理

①水样过滤后，置于分液漏斗中，然后加入氯化钠，待其溶解后加入萃取剂，振荡，静置分层，然后将萃取液转移至离心管中，重复萃取一次，合并萃取液，即得萃取液一；

②取无水硫酸钠置于带滤纸的漏斗中，用萃取剂淋洗，弃去此次淋洗液，然后将步骤(1)①得到的萃取液一通过该漏斗，并用萃取剂洗涤1-3次，得洗涤液，将上述通过漏斗的萃取液一和洗涤液一并通过干燥柱，得萃取液二，置于容器一中；

③将萃取液二旋转蒸发，并用萃取剂分1-3次清洗容器一，合并清洗容器一的的溶剂和旋转蒸发产物得到萃取液三，将萃取液三在氮吹仪上氮吹至近干，用萃取剂定容，即可得到待测样品；

上述萃取剂为正己烷和/或甲醇；例如萃取剂可以为为正己烷；萃取剂也可以为甲醇；萃取剂还可以为正己烷和甲醇的混合物。

(2)检测

①绘制标准曲线；此处所述的绘制标准曲线的方法可以采用现有检测分析技术领域内常用的标准曲线绘制方法，其所选取的标准液的浓度也不做限定。

②将步骤(1)得到的待测样品置于进样瓶中，用gc-ecd检测。

进一步地，所述氯化钠为经灼烧处理的氯化钠；

所述无水硫酸钠为经灼烧处理的无水硫酸钠。

更进一步地，所述氯化钠和无水硫酸钠的灼烧处理条件为：在380-520℃下灼烧2-8h，冷却后装入磨口玻璃瓶中，置于干燥器中保存。

进一步地，所述氯化钠和无水硫酸钠的灼烧处理条件为：450℃下灼烧4h，冷却后装入磨口玻璃瓶中，置于干燥器中保存。作用是除去分析纯试剂中的结合水，成为真正的无水状态的，提高检测准确性。

进一步地，步骤(2)①绘制标准曲线的方法为：配制百菌清浓度为20ppb、50ppb、100ppb、200ppb、400ppb、500ppb的标准溶液，用gc-ecd检测，绘制标准曲线；

更进一步地，所述步骤(2)中，gc-ecd检测时，

检测仪器为agilent7890a型气相色谱仪，

检测器为μ-ecd，

色谱柱类型为hp-5石英毛细管柱(30m×0.32mm×0.25μm)，

氮气流量为1ml/min，

进样量为1μl，

进样口温度为250℃。

更进一步地，该方法的水样加标回收率在80～120％，rsd小于10％，检出限为0.012μg/l，定量限为0.073μg/l。

更进一步地，本发明公开的水环境中百菌清残留的检测分析方法，包括以下步骤：

(1)水样前处理

①取100ml水样，经0.45μm滤膜过滤，置于250ml分液漏斗中，然后加入10g氯化钠，待其溶解后加入10ml正己烷，置于摇床上剧烈震荡10min，静置30min分层后，然后将萃取液转移至50ml塑料离心管中，重复萃取一次，合并萃取液，即得萃取液一；

②称取10g无水硫酸钠置于带滤纸的漏斗中，用正己烷淋洗，弃去此次淋洗液，然后将步骤(1)①得到的萃取液一通过该漏斗，并用萃取剂洗涤2次，得洗涤液，将上述通过漏斗的萃取液一和洗涤液一并通过干燥柱，得萃取液二，置于鸡心瓶中；

③将萃取液二旋转蒸发至2～3ml，然后分两次清洗鸡心瓶，旋转蒸发产物和两次清洗鸡心瓶的溶剂混合，氮吹至近干，用正己烷定容至1ml，过0.22μm的有机滤膜，即可得到待测样品；

此步骤中的无水硫酸钠和氯化钠经以下处理：450℃下灼烧4h，冷却后装入磨口玻璃瓶中，置于干燥器中保存；

(2)检测

①绘制标准曲线；

②将步骤(1)得到的待测样品置于进样瓶中，用gc-ecd检测，

检测仪器为agilent7890a型气相色谱仪，

检测器为μ-ecd，

色谱柱类型为hp-5石英毛细管柱(30m×0.32mm×0.25μm)，

氮气流量为1ml/min，

进样量为1μl，

进样口温度为250℃。

本发明的有益效果是：

1、本发明的检测分析方法，能够浓缩富集被测的百菌清，降低检出限(检出限低至0.012μg/l)，并改善方法的灵敏度，而高效灵敏、适应性高的分析仪器保证了水环境中百菌清检测结果的精确性。

2、本发明的检测分析方法的重复利用性、稳定性和回收率都得到显著提高，可对水环境中百菌清进行提取，扩大其应用范围。

3、水环境中百菌清残留的检测分析方法操作简单，可批量处理；节约溶剂。

4、水环境中百菌清残留的检测分析方法通过优化色谱、质谱条件和减少基质效应等来提高分离能力和灵敏度。

附图说明

图1标准校正曲线和基质匹配校正标准。

具体实施方式

下面通过具体的实施例对本发明进一步说明，应当指出，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干变型和改进，这些也应视为属于本发明的保护范围。

1、仪器与样品

1.1、仪器：

检测仪器为agilent7890a型气相色谱仪，安捷伦科技(中国)有限公司

检测器为μ-ecd，安捷伦科技(中国)有限公司

色谱柱类型为hp-5石英毛细管柱(30m×0.32mm×0.25μm)，

氮吹仪：dc12h系列氮气吹扫仪，上海安谱实验科技股份有限公司

1.2、样品：从以下采样区域采取的水样。

2、试验方法与结果

绘制标准曲线：配制百菌清浓度为20ppb、50ppb、100ppb、200ppb、400ppb、500ppb的标准溶液，用gc-ecd检测，用内标法定量，方法检出限(mdl)和方法定量限(mql)分别采用3倍和1倍信噪比进行计算，信噪比采用masshunter软件(agilent)对添加较低浓度百菌清的样品进行计算，以20ppb、50ppb、100ppb、200ppb、400ppb、500ppb为横坐标，相对应的峰面积为纵坐标，分别建立标准校正曲线和基质匹配校正曲线，如附图1所示。

实施例1：

(1)水样前处理

①取100ml水样，经0.45μm滤膜过滤，置于250ml分液漏斗中，然后加入10g氯化钠，待其溶解后加入10ml正己烷，置于摇床上剧烈震荡10min，静置30min分层后，然后将萃取液转移至50ml塑料离心管中，重复萃取一次，合并萃取液，即得萃取液一；

②称取10g无水硫酸钠置于带滤纸的漏斗中，用正己烷淋洗，弃去此次淋洗液，然后将步骤(1)①得到的萃取液一通过该漏斗，并用萃取剂洗涤2次，得洗涤液，将上述通过漏斗的萃取液一和洗涤液一并通过干燥柱，得萃取液二，置于鸡心瓶中；

③将萃取液二旋转蒸发至2～3ml，然后分两次清洗鸡心瓶，旋转蒸发产物和两次清洗鸡心瓶的溶剂混合，氮吹至近干，用正己烷定容至1ml，过0.22μm的有机滤膜，即可得到待测样品；

此步骤中的无水硫酸钠和氯化钠经以下处理：450℃下灼烧4h，冷却后装入磨口玻璃瓶中，置于干燥器中保存；

(2)检测

①绘制标准曲线；

②将步骤(1)得到的待测样品置于进样瓶中，用gc-ecd检测，

检测仪器为agilent7890a型气相色谱仪，

检测器为μ-ecd，

色谱柱类型为hp-5石英毛细管柱(30m×0.32mm×0.25μm)，

氮气流量为1ml/min，

进样量为1μl，

进样口温度为250℃。

本实施例中，检出限为0.012μg/l。

实施例2

与实施例1相比，区别之处仅在于，萃取溶剂正己烷替换为甲醇，其他条件和操作同实施例1。

本实施例中，检出限为0.012μg/l。

实施例3

与实施例1相比，区别之处仅在于，萃取溶剂正己烷替换为甲醇和正己烷1：1的混合溶剂，其他条件和操作同实施例1。

本实施例中，检出限为0.012μg/l。

采用实施例1的方法选取以下采样地点的水进行检测，选取的水中百菌清的检测结果如下表1。

本发明在样品测试过程中，每10个样品设定一组程序空白，控制样品加标平行和样品平行。控制样品是采用干净的基质(纯水)，程序空白考察提取过程中是否引入污染，控制样品加标平行和样品平行考察方法的准确性和重现性。

测定其加标回收率：

①取100ml水样，经0.45μm滤膜过滤，置于250ml分液漏斗中，添加百菌清的标准工作溶液，使其浓度为0.2μg/kg，然后加入10g氯化钠，待其溶解后加入10ml正己烷，置于摇床上剧烈震荡10min，静置30min分层后，然后将萃取液转移至50ml塑料离心管中，重复萃取一次，合并萃取液，即得萃取液一；

其他操作同实施例1。检测并计算其加标回收率，结果见下表1。

表1水环境中百菌清检测浓度

分别采用实施例2-3的方法选取以下采样地点的水样进行检测，水样中百菌清的检测结果如下表2。

测定其加标回收率：

①取100ml水样，经0.45μm滤膜过滤，置于250ml分液漏斗中，添加百菌清的标准工作溶液，使其浓度为0.2μg/kg，然后加入10g氯化钠，待其溶解后加入10ml正己烷，置于摇床上剧烈震荡10min，静置30min分层后，然后将萃取液转移至50ml塑料离心管中，重复萃取一次，合并萃取液，即得萃取液一；

其他操作分别同实施例2-3。检测并计算其加标回收率，结果见下表2。

表2水环境中百菌清检测浓度

上述仅为本发明优选的实施例，并不限制于本发明。对于所属领域的技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其他不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施例来举例说明。而由此方案所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明的保护范围之内。