一种PAMAM对客体小分子吸附量的NMR测定方法与流程

本发明属于主客体化学中主体分子对客体小分子吸附量的测定方法的领域，具体涉及一种pamam对客体小分子吸附量测定的核磁共振方法，本发明是一种基于核磁共振扩散排序谱，利用扩散排序谱技术(dosy)测定pamam对客体小分子吸附量测定的核磁共振方法。

背景技术：

聚酰胺-胺树状分子pamam具有精确的分子结构，大量的表面活性官能团，非极性的内部疏水结构，高度的几何对称性，相对可控的分子质量及纳米尺寸的特点，具有广泛的应用前景。可用于缓释药物载体、高效催化剂、信息存储材料、纳米材料的应用中，pamam作为主体分子与多种客体小分子之间的相互作用已广泛研究，目前，扩散排序谱技术dosy结合其它核磁共振方法如化学位移滴定、noe测定，弛豫时间，饱和转移差谱等测定方法可用于对pamam与客体小分子之间相互作用的发现。这些技术手段虽然很明确地证明了pamam与客体小分子之间存在相互作用，并可以指认其具体的作用方式，然而利用核磁方法对pamam吸附客体小分子具体吸附量的计算一直没有相应的方法步骤。

pamam对客体小分子吸附量的测定可以采用紫外分光光度法、平衡透析法、量热滴定等方法相结合进行测定。然而，这些方法的测定过程比较繁琐，所需的样品量较大，对吸附量的测试结果是一个相对范围，精确度不高。除此之外，这些方法的测定过程比较繁琐，所需的样品量较大，对发现pamam与客体小分子之间的作用机理有一定的局限性。

技术实现要素：

本发明是针对现有对pamam吸附客体小分子吸附量测定所采用的紫外分光光度法、平衡透析、量热滴定等方法结合存在的过程比较繁琐，所需的样品量比较大、对吸附量的测试结果误差大、精确度不高等缺陷，提供一种pamam对客体小分子吸附量的nmr测定方法。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：

本发明的一种pamam对客体小分子吸附量的nmr测定方法是基于核磁共振扩散排序谱，通过测定不同代数的pamam在溶液中的相对扩散系数，并绘制不同代数的pamam在溶液中的相对扩散系数与其分子量之间相关关系的标准曲线，然后再测定吸附客体小分子后的pamam在溶液中的相对扩散系数，并根据不同代数的pamam在溶液中的相对扩散系数与其分子量之间相关关系的标准曲线，计算得到吸附客体小分子后的pamam在溶液中分子量，从而计算出pamam对客体小分子的吸附量。本发明基于扩散排序谱对pamam吸附客体小分子吸附量的测定方法，在整个测试过程中，不会破坏样品，所需样品量少，无需对样品进行处理可以直接测定pamam吸附客体小分子前后的扩散系数，从而进一步进行数据分析直接得到pamam对客体小分子具体吸附量的数值。这个方法得到的结果是一个具体的数值，结果直观明了，具有广谱性，操作简单，结果准确，精确度高，适用于pamam对多种类型的客体小分子吸附量的测定。

进一步，所述nmr测定方法是基于双向梯度纵向涡流延迟即bppled脉冲序列或受激回波ste脉冲序列的核磁共振扩散排序谱。此脉冲是在核磁共振测定分子自扩散系数经典测试方法的基础上发展而来，实际操作中由于自扩散运动，分子的位置发生变化，造成磁化强度不可能完全重聚，从而引起信号的衰减，基于以上脉冲序列，能够极大地降低实验中屏蔽探头里出现的涡流效应，得到的谱图不出现相位发生畸变，谱峰重叠，不利于实验数据收集等问题，运用以上脉冲得到的数据更加准确。

更进一步，根据权利要求2所述的pamam对客体小分子吸附量的nmr测定方法，其特征在于：所述核磁共振扩散排序谱的测试步骤为：1)调整核磁共振波谱仪温度为273k至323k，气流为200～500lph，样品管不旋转；2)样品在设定的温度及气流下恒定10～30分钟；3)测出样品的一维氢核磁谱图；4)调出扩散排序谱脉冲，优化参数，采集二维图谱；5)由布鲁克topspin3.1或dynamicscenter2.2.4软件处理所得到的数据，获得样品的自扩散系数值。温度为273k至323k，气流为200～500lph，可以保证样品在测试过程中温度梯度和气流梯度对测试结果的影响；样品在设定的温度及气流下恒定10～30分钟，优化参数，可以使样品在测试过程中保持温度稳定，从而得到更准确的测试结果；若气流、温度不进行控制，测试参数不进行优化，则得到的测试结果误差很大；由布鲁克topspin3.1或dynamicscenter2.2.4软件处理所得到的数据，可以在最小误差范围内准确拟合出样品的自扩散系数，直接得到分子在溶液中的扩散速率值。

再进一步，所述步骤1)中的核磁共振波谱仪为带梯度场的400～600mhz液体核磁共振波谱仪，该梯度场的核磁共振波谱仪测定分子的扩散系数是通过逐步改变脉冲梯度场强度，得到一系列不同的谱，再对各信号进行拟合而得到的。

再进一步，所述步骤4)中的调出扩散排序谱脉冲，优化参数，采集二维图谱的过程中，每个核磁共振扩散排序谱采用的梯度场强度gpz6的取值范围在2％到98％之间；所使用的扩散时间δ为40～300ms；所使用的脉冲场梯度脉宽值δ/2为600～2500μs；所使用的脉冲扫描次数为8的倍数，即ns＝8*n；所使用的空扫次数为4的倍数，即ds＝4*n；所使用的二维图谱采样次数tdf1维为8～128次，所使用的采样点数tdf2维为16k～128k；以获取最大梯度场和最小梯度场下匹配比例范围为2％～10％的一维氢谱。优化参数更准确地得到分子在溶液中扩散速率值。

所述通过测定不同代数的pamam在溶液中的相对扩散系数，并绘制不同代数的pamam在溶液中的相对扩散系数与其分子量之间相关关系的标准曲线，具体操作步骤为：测定不同代数的pamam和内标物在溶液中的扩散速率，经拟合计算pamam在溶液中相对于所加入内标物的扩散速度的相对扩散系数，再以不同代数的pamam在溶液中的相对扩散系数的对数为横坐标，不同代数的pamam分子量的对数值为纵坐标，拟合得到不同代数的pamam在溶液中的相对扩散系数与其分子量之间相关关系的标准曲线。采用不同代数的pamam在溶液中的相对扩散系数与分子量关系的相关关系做标准曲线，简单方便，具有代表性，适用于pamam对多种客体小分子吸附量的测定，如均相催化剂，抗癌药物小分子、氨基酸，维生素，表面活性剂等。

再进一步，所述测定吸附客体小分子后的pamam在溶液中的相对扩散系数，具体操作步骤为：测定吸附客体小分子后的pamam及内标物在溶液中的扩散速率，进行拟合分别得到各自在溶液中的自扩散系数，再以pamam的自扩散系数除以内标物的自扩散系数，得到吸附客体小分子后的pamam在溶液中的相对扩散系数，基于加入内标物得到pamam在溶液中的相对扩散系数可以较大降低溶液环境及测试环境的影响，消除环境因素对pamam分子扩散速率测试值的影响。

再进一步，所述根据不同代数的pamam在溶液中的相对扩散系数与其分子量之间相关关系的标准曲线，计算得到吸附客体小分子后的pamam在溶液中分子量，从而计算出pamam对客体小分子的吸附量，具体操作步骤为：将吸附客体小分子后的pamam的相对扩散系数代入不同代数的pamam在溶液中的相对扩散系数与其分子量之间相关关系的标准曲线计算其分子量，用该分子量减去pamam的分子量后，除以客体小分子的分子量，既可得到pamam对客体小分子的吸附量。该方法克服了紫外分光光度法，平衡透析，量热滴定等方法存在的过程比较繁琐，所需的样品量比较大，对吸附量的测试结果误差大，不准确，精确度不高等缺陷，使所得结果更准确。

再进一步，所述步骤2)中的样品的制备过程具体步骤为：取不同代数的pamam及吸附客体小分子后的pamam样品和内标物溶解于同一溶剂中，配制350～450μl溶液于核磁共振样品管中，将上述样品管放入核磁共振波谱仪待测，其中所用内标物和溶剂与绘制标准曲线时所选用的内标物和溶剂相同，基于内标物与样品溶解于同一溶剂中，可以使样品制备更简单且实验误差减小，对于样品和内标物的扩散速率的测定结果更为准确。

再进一步，所述内标物为3-(三甲基硅基)-1-丙磺酸钠、四甲基硅烷或1,4-二氧六环中的一种或几种；所述溶剂为重水、氘代甲醇或氘代氯仿的一种或几种。所选内标物为不与pamam发生相互作用的内标物，且¹hnmr化学位移的信号不与pamam分子信号重叠，用pamam与内标物扩散速率的比值来得到不同pamam在溶液中的相对扩散系数，由于内标物与溶质分子处于同一环境，能够完全消除环境对扩散速率测试值的影响，使pamam在溶液中的相对扩散系数与分子量之间有明确的关系，能够通过pamam吸附客体小分子后的相对扩散速率来推测其分子量进而对吸附量进行计算，使该方法具有结果准确。

附图说明

图1是本发明实施例1的不同代数的pamam在重水中的相对扩散系数与其分子量之间相关关系的标准曲线。

图2为本发明中实施例2的不同代数的pamam在氘代氯仿中的相对扩散系数与其分子量之间相关关系的标准曲线。

图3为本发明中实施例3的不同代数的pamam在氘代甲醇中的相对扩散系数与其分子量之间相关关系的标准曲线。

图4为本发明中实施例4的不同代数的pamam在重水和氘代甲醇的混合溶液中的相对扩散系数与其分子量之间相关关系的标准曲线。

具体实施方式

实施例1：

本实施例中的一种pamam对5-氟尿嘧啶(fu)吸附量的nmr测定方法是基于双向梯度纵向涡流延迟即bppled脉冲序列核磁共振扩散排序谱，通过测定不同代数pamam在溶液中的相对扩散系数，并绘制不同代数的pamam在溶液中的相对扩散系数与其分子量之间相关关系的标准曲线，然后再测定吸附fu分子后的pamam在溶液中的相对扩散系数，并根据不同代数的pamam在溶液中的相对扩散系数与其分子量之间相关关系的标准曲线，计算得到吸附fu分子后的pamam在溶液中分子量，从而计算出pamam对fu分子的吸附量，具体包括以下步骤：

步骤一：核磁共振扩散排序谱的测试，具体为：

1)调整核磁共振波谱仪温度为273k，气流为200lph，样品管不旋转；所述核磁共振波谱仪为带梯度场的400mhz液体核磁共振波谱仪。

2)样品在设定的温度及气流下恒定10分钟；所述样品的制备过程具体步骤为：取g0，g2，g3，g3.5，g5不同代数的pamam各4mg及吸附三个摩尔比的fu分子后的pamam样品(fu：g3pamam＝50:1,25:1,fu：g5pamam＝100:1即g3+50fu，g3+25fu，g5+100fu)和5μl内标物1,4-二氧六环(取10μl1,4-二氧六环用重水稀释20倍)溶解于重水中，配制400μl溶液于核磁共振样品管中，将上述样品管放入核磁共振波谱仪待测，其中所用内标物和溶剂与绘制标准曲线时所选用的内标物和溶剂都是1,4-二氧六环和重水。

3)测出样品的一维氢核磁谱图；

4)调出扩散排序谱脉冲，优化参数，所述调出扩散排序谱脉冲，优化参数，采集二维图谱的过程中，首先设置梯度场强度gpz6的取值为2％，扩散时间δ(g0，g2，g3，g3.5，g5，g3+50fu，g3+25fu，g5+100fu体系)分别为40ms，80ms，100ms，100ms，200ms，200ms，200ms，200ms；梯度施加时间δ/2为1000μs，采集第一个一维氢谱；然后复制第一个脉冲序列，设置梯度场强度gpz6的取值为95％，改变梯度施加时间δ/2为(g0，g2，g3，g3.5，g5，g3+50fu，g3+25fu，g5+100fu体系的设置值分别为600μs，750μs，1300μs，1700μs，2200μs，1550μs,1800μs,2000μs)，在此条件下采集第二个氢谱；再复制第二个氢谱脉冲序列，一维图谱变二维图谱，所使用的脉冲扫描次数为16，即ns＝8*2；所使用的空扫次数为8，即ds＝4*2；所使用的二维图谱采样次数tdf1维为16次，所使用的采样点数tdf2维为16k；以获取最大梯度场和最小梯度场下匹配比例范围为5％的一维氢谱；采集二维图谱；

5)由布鲁克topspin3.1软件处理所得到的数据，获得样品的自扩散系数值。

步骤二：通过测定不同代数的pamam在溶液中的相对扩散系数，并绘制不同代数的pamam在溶液中的相对扩散系数与其分子量之间相关关系的标准曲线，具体为：测定g0，g2，g3，g3.5，g5不同代数的pamam和内标物1,4-二氧六环在溶液中的扩散速率，经拟合计算pamam在溶液中相对于所加入1,4-二氧六环的扩散速度的相对扩散系数(表1)，再以不同代数的pamam在溶液中的相对扩散系数的对数为横坐标，不同代数的pamam分子量的对数值为纵坐标(表2)，拟合得到不同代数的pamam在重水中的相对扩散系数与其分子量之间相关关系的标准曲线(图1)。

步骤三：测定吸附fu分子后的pamam在溶液中的相对扩散系数，具体为：测定吸附fu分子后的pamam及1,4-二氧六环在溶液中的扩散速率，进行拟合分别得到各自在溶液中的自扩散系数，再以pamam的自扩散系数除以1,4-二氧六环的自扩散系数，得到吸附fu分子后的pamam在溶液中的相对扩散系数(表3)。

步骤四：根据不同代数的pamam在重水中的相对扩散系数与其分子量之间相关关系的标准曲线，计算得到吸附fu分子后的pamam在溶液中分子量，从而计算出pamam对fu分子的吸附量(表4)，具体为：将吸附fu分子后的pamam的相对扩散系数代入不同代数的pamam在溶液中的相对扩散系数与其分子量之间相关关系的标准曲线计算其分子量，用该分子量减去pamam的分子量后，除以fu分子的分子量，既可得到pamam对fu分子的吸附量。

表1为本发明中pamam在重水中的相对扩散系数值及其相关数值。

表2为本发明中不同代数的pamam相对扩散系数的对数值和其对应分子量的对数的相关数值。

图1为本发明中不同代数的pamam在重水中的相对扩散系数与其分子量关系的相关关系的标准曲线。

表3为本发明中pamam吸附不同摩尔比的fu分子后相对扩散系数值及其相关数值。

表4为本发明中pamam对fu的吸附量计算的相关数值。

表1

表2

表3

表4

实施例2：

本实施例中的一种pamam对维生素b7吸附量的nmr测定方法是基于受激回波ste脉冲序列核磁共振扩散排序谱，通过测定不同代数pamam在溶液中的相对扩散系数，并绘制不同代数的pamam在溶液中的相对扩散系数与其分子量之间相关关系的标准曲线，然后再测定吸附维生素b7分子后的pamam在溶液中的相对扩散系数，并根据不同代数的pamam在溶液中的相对扩散系数与其分子量之间相关关系的标准曲线，计算得到吸附维生素b7分子后的pamam在溶液中分子量，从而计算出pamam对维生素b7分子的吸附量，具体包括以下步骤：

步骤一：核磁共振扩散排序谱的测试，具体为：

1)调整核磁共振波谱仪温度为323k，气流为500lph，样品管不旋转；所述核磁共振波谱仪为带梯度场的500mhz液体核磁共振波谱仪。

2)样品在设定的温度及气流下恒定30分钟；所述样品的制备过程具体步骤为：取g0，g2，g3，g3.5，g5不同代数的pamam各4mg及吸附四个摩尔比的维生素b7分子后的pamam样品(维生素b7：g5pamam＝10:1,25:1,50:1,70:1,即g5+10vb，g5+25vb，g5+50vb，g5+70vb)和1mg内标物四甲基硅烷溶解于氘代氯仿中，配制400μl溶液于核磁共振样品管中，将上述样品管放入核磁共振波谱仪待测，其中所用内标物和溶剂与绘制标准曲线时所选用的内标物和溶剂都是四甲基硅烷和氘代氯仿。

3)测出样品的一维氢核磁谱图；

4)调出扩散排序谱脉冲，优化参数，所述调出扩散排序谱脉冲，优化参数，采集二维图谱的过程中，首先设置梯度场强度gpz6的取值为2％，扩散时间δ(g0，g2，g3，g3.5，g5，g5+10vb，g5+25vb，g5+50vb，g5+70vb体系)分别为40ms，80ms，100ms，100ms，200ms，200ms，200ms，300ms，300ms；梯度施加时间δ/2为1000μs，采集第一个一维氢谱；然后复制第一个脉冲序列，设置梯度场强度gpz6的取值为98％，改变梯度施加时间δ/2为(g5+10vb，g5+25vb，g5+50vb，g5+70vb体系的设置值分别为600μs，750μs，1300μs，1700μs，2200μs，2000μs,2200μs,1200μs，1750μs)，在此条件下采集第二个氢谱；再复制第二个氢谱脉冲序列，一维图谱变二维图谱，所使用的脉冲扫描次数为32，即ns＝8*4；所使用的空扫次数为16，即ds＝4*4；所使用的二维图谱采样次数tdf1维为128次，所使用的采样点数tdf2维为128k；以获取最大梯度场和最小梯度场下匹配比例范围为2％的一维氢谱；采集二维图谱；

5)由布鲁克dynamicscenter2.2.4软件处理所得到的数据，获得样品的自扩散系数值。

步骤二：通过测定不同代数的pamam在溶液中的相对扩散系数，并绘制不同代数的pamam在溶液中的相对扩散系数与其分子量之间相关关系的标准曲线，具体为：测定g0，g2，g3，g3.5，g5不同代数的pamam和内标物四甲基硅烷在溶液中的扩散速率，经拟合计算pamam在溶液中相对于所加入四甲基硅烷的扩散速度的相对扩散系数(表5)，再以不同代数的pamam在溶液中的相对扩散系数的对数为横坐标，不同代数的pamam分子量的对数值为纵坐标(表6)，拟合得到不同代数的pamam在氘代氯仿中的相对扩散系数与其分子量之间相关关系的标准曲线(图2)。

步骤三：测定吸附维生素b7分子后的pamam在溶液中的相对扩散系数，具体为：测定吸附维生素b7分子后的pamam及四甲基硅烷在溶液中的扩散速率，进行拟合分别得到各自在溶液中的自扩散系数，再以pamam的自扩散系数除以1,4-二氧六环的自扩散系数，得到吸附维生素b7分子后的pamam在溶液中的相对扩散系数(表7)。

步骤四：根据不同代数的pamam在氘代氯仿中的相对扩散系数与其分子量之间相关关系的标准曲线，计算得到吸附维生素b7分子后的pamam在溶液中分子量，从而计算出pamam对维生素b7分子的吸附量(表8)，具体为：将吸附维生素b7分子后的pamam的相对扩散系数代入不同代数的pamam在溶液中的相对扩散系数与其分子量之间相关关系的标准曲线计算其分子量，用该分子量减去pamam的分子量后，除以维生素b7分子的分子量，既可得到pamam对维生素b7分子的吸附量。

表5为本发明中pamam在氘代氯仿的相对扩散系数值及其相关数值。

表6为本发明中不同代数的pamam相对扩散系数的对数值和其对应分子量的对数的相关数值。

图2为本发明中不同代数的pamam在氘代氯仿中的相对扩散系数与与其分子量关系的相关关系的标准曲线。

表7为本发明中pamam吸附不同摩尔比的维生素b7分子后相对扩散系数值及其相关数值。

表8为本发明中pamam对维生素b7的吸附量计算的相关数值。

表5

表6

表7

表8

实施例3

本实施例中的一种pamam对苯基丁氮酮吸附量的nmr测定方法是基于双向梯度纵向涡流延迟即bppled脉冲序列核磁共振扩散排序谱，通过测定不同代数pamam在溶液中的相对扩散系数，并绘制不同代数的pamam在溶液中的相对扩散系数与其分子量之间相关关系的标准曲线，然后再测定吸附苯基丁氮酮分子后的pamam在溶液中的相对扩散系数，并根据不同代数的pamam在溶液中的相对扩散系数与其分子量之间相关关系的标准曲线，计算得到吸附苯基丁氮酮分子后的pamam在溶液中分子量，从而计算出pamam对苯基丁氮酮分子的吸附量，具体包括以下步骤：

步骤一：核磁共振扩散排序谱的测试，具体为：

1)调整核磁共振波谱仪温度为298k，气流为400lph，样品管不旋转；所述核磁共振波谱仪为带梯度场的600mhz液体核磁共振波谱仪。

2)样品在设定的温度及气流下恒定20分钟；所述样品的制备过程具体步骤为：取g0，g2，g3，g3.5，g5不同代数的pamam各4mg及吸附四个摩尔比的苯基丁氮酮分子后的pamam样品(苯基丁氮酮：g5pamam＝5:1,10:1,20:1,30:1)和1mg内标物3-(三甲基硅基)-1-丙磺酸钠溶解于重水中，配制450μl溶液于核磁共振样品管中，将上述样品管放入核磁共振波谱仪待测，其中所用内标物和溶剂与绘制标准曲线时所选用的内标物和溶剂都是3-(三甲基硅基)-1-丙磺酸钠和重水。

3)测出样品的一维氢核磁谱图；

4)调出扩散排序谱脉冲，优化参数，所述调出扩散排序谱脉冲，优化参数，采集二维图谱的过程中，首先设置梯度场强度gpz6的取值为2％，扩散时间δ(g0，g2，g3，g3.5，g5，苯基丁氮酮：g5pamam＝5:1,10:1,20:1,30:1体系)分别为40ms，80ms，100ms，100ms，200ms，200ms，300ms，300ms，300ms；梯度施加时间δ/2为1000μs，采集第一个一维氢谱；然后复制第一个脉冲序列，设置梯度场强度gpz6的取值为95％，改变梯度施加时间δ/2为(苯基丁氮酮：g5pamam＝5:1,10:1,20:1,30:1体系的设置值分别为600μs，750μs，1300μs，1700μs，2200μs，2000μs，1200μs,1750μs，2500μs)，在此条件下采集第二个氢谱；再复制第二个氢谱脉冲序列，一维图谱变二维图谱，所使用的脉冲扫描次数为8，即ns＝8*1；所使用的空扫次数为4，即ds＝4*1；所使用的二维图谱采样次数tdf1维为8次，所使用的采样点数tdf2维为64k；以获取最大梯度场和最小梯度场下匹配比例范围为10％的一维氢谱；采集二维图谱；

5)由布鲁克dynamicscenter2.2.4软件处理所得到的数据，获得样品的自扩散系数值。

步骤二：通过测定不同代数的pamam在溶液中的相对扩散系数，并绘制不同代数的pamam在溶液中的相对扩散系数与其分子量之间相关关系的标准曲线，具体为：测定g0，g2，g3，g3.5，g5不同代数的pamam和内标物3-(三甲基硅基)-1-丙磺酸钠在溶液中的扩散速率，经拟合计算pamam在溶液中相对于所加入3-(三甲基硅基)-1-丙磺酸钠的扩散速度的相对扩散系数(表9)，再以不同代数的pamam在溶液中的相对扩散系数的对数为横坐标，不同代数的pamam分子量的对数值为纵坐标(表10)，拟合得到不同代数的pamam在重水中的相对扩散系数与其分子量之间相关关系的标准曲线(图3)。

步骤三：所述测定吸附苯基丁氮酮分子后的pamam在氘代甲醇中的相对扩散系数，具体为：测定吸附苯基丁氮酮分子后的pamam及3-(三甲基硅基)-1-丙磺酸钠(dss)在溶液中的扩散速率，进行拟合分别得到各自在溶液中的自扩散系数，再以pamam的自扩散系数除以3-(三甲基硅基)-1-丙磺酸钠的自扩散系数，得到吸附苯基丁氮酮分子后的pamam在溶液中的相对扩散系数(表11)。

步骤四：所述根据不同代数的pamam在氘代甲醇中的相对扩散系数与其分子量之间相关关系的标准曲线，计算得到吸附苯基丁氮酮分子后的pamam在溶液中分子量，从而计算出pamam对苯基丁氮酮分子的吸附量(表12)，具体为：将吸附苯基丁氮酮分子后的pamam的相对扩散系数代入不同代数的pamam在溶液中的相对扩散系数与其分子量之间相关关系的标准曲线计算其分子量，用该分子量减去pamam的分子量后，除以苯基丁氮酮分子的分子量，既可得到pamam对苯基丁氮酮分子的吸附量。

表9为本发明中pamam在重水中的相对扩散系数值及其相关数值。

表10为本发明中不同代数的pamam相对扩散系数的对数值和其对应分子量的对数的相关数值。

图3为本发明中不同代数的pamam在氘代甲醇中的相对扩散系数与与其分子量关系的相关关系的标准曲线。

表11为本发明中pamam吸附不同摩尔比的苯基丁氮酮分子后相对扩散系数值及其相关数值。

表12为本发明中pamam对苯基丁氮酮的吸附量计算的相关数值。

表9

表10

表11

表12

实施例4

本实施例中的一种pamam对霉酚酸吸附量的nmr测定方法是基于双向梯度纵向涡流延迟即bppled脉冲序列核磁共振扩散排序谱，通过测定不同代数pamam在溶液中的相对扩散系数，并绘制不同代数的pamam在溶液中的相对扩散系数与其分子量之间相关关系的标准曲线，然后再测定吸附霉酚酸分子后的pamam在溶液中的相对扩散系数，并根据不同代数的pamam在溶液中的相对扩散系数与其分子量之间相关关系的标准曲线，计算得到吸附霉酚酸分子后的pamam在溶液中分子量，从而计算出pamam对霉酚酸分子的吸附量，具体包括以下步骤：

步骤一：核磁共振扩散排序谱的测试，具体为：

1)调整核磁共振波谱仪温度为298k，气流为300lph，样品管不旋转；所述核磁共振波谱仪为带梯度场的600mhz液体核磁共振波谱仪。

2)样品在设定的温度及气流下恒定20分钟；所述样品的制备过程具体步骤为：取g0，g2，g3，g3.5，g5不同代数的pamam各4mg及吸附四个摩尔比的霉酚酸分子后的pamam样品(霉酚酸：g5pamam＝5:1,10:1,20:1,30:1)和5μl内标物1,4-二氧六环(取10μl1,4-二氧六环用重水和氘代甲醇混合溶液稀释20倍)溶解于重水和氘代甲醇混合溶液中，配制400μl溶液于核磁共振样品管中，将上述样品管放入核磁共振波谱仪待测，其中所用内标物和溶剂与绘制标准曲线时所选用的内标物和溶剂都是1,4-二氧六环和氘代甲醇和重水混合溶液。

3)测出样品的一维氢核磁谱图；

4)调出扩散排序谱脉冲，优化参数，所述调出扩散排序谱脉冲，优化参数，采集二维图谱的过程中，首先设置梯度场强度gpz6的取值为2％，扩散时间δ(g0，g2，g3，g3.5，g5，霉酚酸：g5pamam＝5:1,10:1,20:1,30:1体系)分别为40ms，80ms，100ms，100ms，200ms，200ms，200ms，300ms，300ms；梯度施加时间δ/2为1000μs，采集第一个一维氢谱；然后复制第一个脉冲序列，设置梯度场强度gpz6的取值为98％，改变梯度施加时间δ/2为(g0，g2，g3，g3.5，g5，霉酚酸：g5pamam＝5:1,10:1,20:1,30:1体系的设置值分别为600μs，750μs，1300μs，1700μs，2200μs，2000μs,1230μs，1360μs,1800μs)，在此条件下采集第二个氢谱；再复制第二个氢谱脉冲序列，一维图谱变二维图谱，所使用的脉冲扫描次数为16，即ns＝8*2；所使用的空扫次数为8，即ds＝4*2；所使用的二维图谱采样次数tdf1维为16次，所使用的采样点数tdf2维为16k；以获取最大梯度场和最小梯度场下匹配比例范围为2％的一维氢谱；采集二维图谱；

5)由布鲁克topspin3.1软件处理所得到的数据，获得样品的自扩散系数值。

步骤二：通过测定不同代数的pamam在溶液中的相对扩散系数，并绘制不同代数的pamam在溶液中的相对扩散系数与其分子量之间相关关系的标准曲线，具体为：测定g0，g2，g3，g3.5，g5不同代数的pamam和内标物1,4-二氧六环在溶液中的扩散速率，经拟合计算pamam在溶液中相对于所加入1,4-二氧六环的扩散速度的相对扩散系数(表13)，再以不同代数的pamam在溶液中的相对扩散系数的对数为横坐标，不同代数的pamam分子量的对数值为纵坐标(表14)，拟合得到不同代数的pamam在重水和氘代甲醇的混合溶液中的相对扩散系数与其分子量之间相关关系的标准曲线(图4)。

步骤三：所述测定吸附霉酚酸分子后的pamam在溶液中的相对扩散系数，具体为：测定吸附霉酚酸分子后的pamam及1,4-二氧六环在溶液中的扩散速率，进行拟合分别得到各自在溶液中的自扩散系数，再以pamam的自扩散系数除以1,4-二氧六环的自扩散系数，得到吸附霉酚酸分子后的pamam在溶液中的相对扩散系数(表15)。

步骤四：所述根据不同代数的pamam在重水和氘代甲醇的混合溶液中的相对扩散系数与其分子量之间相关关系的标准曲线，计算得到吸附霉酚酸分子后的pamam在溶液中分子量，从而计算出pamam对霉酚酸分子的吸附量(表16)，具体为：将吸附霉酚酸分子后的pamam的相对扩散系数代入不同代数的pamam在溶液中的相对扩散系数与其分子量之间相关关系的标准曲线计算其分子量，用该分子量减去pamam的分子量后，除以霉酚酸分子的分子量，既可得到pamam对霉酚酸分子的吸附量。

表13为本发明中pamam在重水和氘代甲醇的混合溶液中的相对扩散系数值及其相关数值。

表14为本发明中不同代数的pamam相对扩散系数的对数值和其对应分子量的对数的相关数值。

图4为本发明中不同代数的pamam在重水和氘代甲醇的混合溶液中的相对扩散系数与与其分子量关系的相关关系的标准曲线。

表15为本发明中pamam吸附不同摩尔比的霉酚酸分子后相对扩散系数值及其相关数值。

表16为本发明中pamam对霉酚酸的吸附量计算的相关数值。

表13

表14

表15

表16

为表明本发明具有测试结果直观明了，准确性高的优点，通过与紫外分光光度法，平衡透析，量热滴定等方法对g3pamam和g5pamam吸附5-氟尿嘧啶吸附量测试分析结果对比如下(表17)，通过本数据对比可知，本发明的结果更准确，精确到具体的数值。

表17为本发明中dosy方法对pamam吸附客体小分子吸附量测定与其他方法的对比

表17