一种真菌荧光染色液的制备及其应用的制作方法

本发明涉及荧光染色液领域，尤其涉及一种真菌荧光染色液的制备及其应用。
背景技术：
：在我国，常见的机会性真菌有念珠菌、曲霉菌、隐球菌、马尔尼菲蓝状菌等。随着免疫功能低下患者的增多，真菌感染的发生率也越来越高，然而与细菌相比，真菌感染虽然少见但是却比细菌感染死亡率却高出60％-90％。真菌感染主要分为浅部真菌感染，主要表现在皮肤癣菌病、马拉色菌毛囊炎等；深部真菌感染，主要表现为念珠菌病、曲霉菌病、镰刀菌病等；因此，真菌检测对临床的诊断与治疗尤为重要，随着真菌检测技术的发展，有越来越多的方法可以应用于真菌的检测和鉴定。常见的检测方法有荧光染色法、派克墨水染色法、乳酸酚棉蓝染色法、过碘酸雪夫(pas)染色法等等。然而，派克墨水染色法、乳酸酚棉蓝染色法、过碘酸雪夫(pas)染色法等，却也有着步骤繁杂，反应时间长等缺点。通常，常规的真菌镜检采用荧光染色法，其具有特异性高、反应时间短等优点。然而目前现有的荧光染色液存在着适用性低以及对真菌的染色效果差等缺点。技术实现要素：有鉴于此，本发明提供一种真菌荧光染色液及其应用方法，能够解决荧光染现有色液的技术问题。本发明提供的技术方案：一种真菌荧光染色液及其应用方法，制备方法包括以下步骤：(1)称取一定的荧光增白剂至烧杯中，加入二甲亚砜、聚乙二醇，超声至完全溶解得到溶液a；(2)称取一定量的氢氧化钾至烧杯中，用超纯化水进行溶解，后加入氯化钠分散后得到溶液b；(3)将溶液b缓慢加入溶液a中，加入一定量的刚果红，超声至完全溶解，最后进行定容并摇匀，得到真菌荧光染色液c；优选地，步骤(1)中，溶液a内，荧光增白剂、二甲亚砜、聚乙二醇的质量分数分别为0.5-0.7％、65-68％、32-34％；优选地，步骤(2)中，溶液b内，氢氧化钾、超纯水、氯化钠所占质量分数分别为12-14％、85-87％、1.5-3.5％；进一步优选地，步骤(3)中，刚果红的总占比为0.4-0.5％，且用纯化水定容到100ml；所述所述荧光增白剂为荧光增白剂31；本发明荧光染色液使用的标本包括：各种痰液、尿液、皮屑、甲屑、耳鼻喉科样本、毛发、肺泡灌洗液、阴道分泌物、组织切片等等；本发明荧光染色液的应用方法如下步骤：a)取试样样本在载玻片上，滴加荧光染色液c以覆盖淹没整个样本为准，染色1-3min；b)将载玻片盖上盖玻片进行压片，用棉签吸去多余染色液；c)置于荧光显微镜下观察；有益效果①本发明配置的真菌荧光染色液可操作性更佳：检测时间短，适用于大样本，快速检测；②检测灵敏度高：检测阳性率99％，降低漏检率及假阴性发生率；③视野更清晰：镜下真菌形态(菌丝、袍子)更易于鉴别。附图说明图1为采用皮肤组织作为样本，使用本发明真菌荧光染色液在荧光显微镜下真菌形态；图2为采用皮肤组织作为样本，使用莱芙时代真菌荧光染色液在荧光显微镜下真菌形态。具体实施方式下面结合具体实施方式，来进一步说明本发明。但本发明不限于以下实施例。本发明实施例的试剂原料如表1所示：原料名称规格控制指标1二甲亚砜分析纯gb/t21395-20082荧光增白剂31试剂级企标3聚乙二醇试剂级gb22114-20084氢氧化钾分析纯gb/t2306-20085氯化钠分析纯gb/t1266-20066刚果红试剂级gb/t2917.1-20027纯化水自制企标实施例11、配方组成如下表所示2、配置方法如下：将溶解均匀的溶液b缓慢加入溶液a中，在加入25mg的刚果红，超声溶解，最后定容至100ml并摇匀，得到荧光染色液c，分装备用；3、真菌荧光染色液的使用方法a)将载玻片放置在水平位置上，直接向样本上滴几滴荧光染色液c，染色液以覆盖过淹没整个样品为准，使其中成分与多聚物进行充分的接触，持续2-3min；b)3分钟后，盖上盖玻片，吸去多余染色液；c)置于荧光显微镜下观察即可。4、采用本发明的真菌荧光染色液与莱芙时代的真菌荧光染色液进行对比，采用皮肤组织作为样本，通过对比图1与图2，可以发现，相较于图2中，图1中真菌的图像视野更为凸显、更为清晰完整。本发明的真菌荧光染色液性能更优。当前第1页12