一种中药制剂金嗓散结丸中黄芩苷的检测方法与流程

本发明属于中药质量检测技术领域，具体涉及一种中药制剂金嗓散结丸中黄芩苷的检测方法。

背景技术：

黄芩苷是一种黄酮类化合物,具有显著的生物活性，具有抑菌、利尿、抗炎、抗变态及解痉作用，并且具有较强的抗癌反应等生理效能，在临床医学已占有重要地位。黄芩苷作为药品检测标准中的检测项目，确定在金嗓散结丸中是否含有黄芩苷极其重要。

现有的检测方法为，取本品待测药品10g，研细，加甲醇40ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用稀盐酸调节ph值至2，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯提取液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取黄芩苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2015年版四部通则0502)试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶g薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5:3:1:1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1％三氯化铁乙醇溶液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

但是，采用现有的检测方法检出的供试品斑点不明显，影响质检人员准确的判断，进而影响产品的质量。

技术实现要素：

为了使供试品的检出斑点更明显，从而提高对中药制剂金嗓散结丸中黄芩苷的检测准确率，本发明提供了一种中药制剂金嗓散结丸中黄芩苷的检测方法。本发明要解决的技术问题通过以下技术方案实现：

本发明实施例提供了一种中药制剂金嗓散结丸中黄芩苷的检测方法，包括以下步骤：

取待检测中药制剂10g并研细，得到待检测中药制剂粉末；

在所述待检测中药制剂粉末中加入70％的乙醇40ml，加热回流1小时，将加热回流后的液体滤过，将滤过后的滤液蒸干，得到待处理的提取物质；

在所述待处理的提取物质中加水20ml，得到待处理溶液；

在所述待处理溶液中加入20ml石油醚，振摇提取杂质后，去除石油醚液，重复振摇提取步骤1次，得到提取后溶液，其中，所述石油醚沸程为60～90℃；

对所述提取后溶液进行ph值调整、加乙酸乙酯溶液后多次振摇提取、合并每次提取后的乙酸乙酯溶液、提纯溶解后，制成供试品溶液；

将黄芩苷粉末作为对照品，并将所述对照品制成对照品溶液；

将同等量的所述供试品溶液和所述对照品溶液分别点于同一硅胶g薄层板上；

以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水为展开剂，对所述硅胶g薄层板进行展开、取出、晾干处理，得到待检视硅胶g薄层板；

在所述待检视硅胶g薄层板上喷以三氯化铁乙醇溶液，以使得所述待检视硅胶g薄层板上显示所述供试品的斑点与所述对照品的斑点；

比对所述供试品的斑点与所述对照品的斑点，确定所述待检测中药制剂金嗓散结丸中是否含有黄芩苷。

在一个具体实施方式中，所述硅胶g薄层板为用4％的醋酸钠溶液制备的硅胶g薄层板。

在一个具体实施方式中，所述对所述提取后溶液进行ph值调整、加乙酸乙酯溶液后多次振摇提取、合并每次提取后的乙酸乙酯溶液、提纯溶解后，制成供试品溶液，包括步骤：

将所述提取后溶液的ph值调为2，得到调节后溶液；

在所述调整节后溶液中加入20ml乙酸乙酯溶液，振摇提取，收集第一次提取后的乙酸乙酯溶液，重复振摇提取步骤2次，分别收集第二次提取后的乙酸乙酯液以及第三次提取后的乙酸乙酯液；

将所述第一次提取后的乙酸乙酯液、所述第二次提取后的乙酸乙酯液、所述第三次提取后的乙酸乙酯液合并，得到提取溶液；

将所述提取溶液蒸干后，得到提纯物质，在所述提纯物质中加入1ml甲醇溶解，得到供试品溶液。

在一个具体实施方式中，所述将所述提取后溶液的ph值调为2，包括步骤：

检测所述提取后溶液的ph值；

在所述提取后溶液中加入盐酸，直至所述提取后溶液的ph值为2，停止加入盐酸。

在一个具体实施方式中，所述将黄芩苷作为对照品，并将所述对照品制成对照品溶液，包括步骤：

取黄芩苷粉末作为对照品；

在所述对照品中加入甲醇，制成所述对照品含量为1mg/ml的对照品溶液。

在一个具体实施方式中，所述将同等量的所述供试品溶液和所述对照品溶液分别点于同一硅胶g薄层板上，包括：

将10μl的所述供试品溶液和10μl的所述对照品溶液分别点于同一硅胶g薄层板上中。

在一个具体实施方式中，所述展开剂中，乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水的体积比为5﹕3﹕1﹕1。

在一个具体实施方式中，所述三氯化铁乙醇溶液中三氯化铁的浓度为5％。

在一个具体实施方式中，所述比对所述供试品的斑点与所述对照品的斑点，确定所述待检测中药制剂金嗓散结丸中是否含有黄芩苷包括：

判断在所述对照品的斑点的同一位置处，所述供试品是否存在与所述对照品斑点相同颜色的斑点，若存在，则判定在所述待检测中药制剂金嗓散结丸中含有黄芩苷；

若不存在，则判定在所述待检测中药制剂金嗓散结丸中未含有黄芩苷。

本发明实施例提供的中药制剂金嗓散结丸中黄芩苷的检测方法，与现有技术相比，具有如下优点和效果：

1、本发明供试品溶液的制备过程中，利用70％乙醇回流，提取出更多检测成分，对含有黄芩苷的溶液进行酸水解，使黄芩苷结构中的糖体和苷元分离开来，成为游离状态，提高了苷元在溶液中的含量，进而提高检测的准确性，加入石油醚可以更好的除杂消除图谱背景，进一步的提高了检测的准确性。

2、本发明中薄层板采用4％醋酸钠溶液制备的硅胶g板，可以有效的将供试品溶液和对照品溶液加样在薄层板上，以保证待检测的有效物质固定于薄层板上，进而保证检测结果的准确性。

附图说明

图1为采用现有技术对中药制剂金嗓散结丸中黄芩苷进行检测的结果图；

图2为采用本发明提供的中药制剂金嗓散结丸中黄芩苷检测方法对中药制剂金嗓散结丸中黄芩苷进行检测的检测结果图；

图3为另一种采用本发明提供的中药制剂金嗓散结丸中黄芩苷检测方法对中药制剂金嗓散结丸中黄芩苷进行检测的检测结果图。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明做进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。

实施例1

为了使供试品的检出斑点更明显，从而提高对中药制剂金嗓散结丸中黄芩苷的检测准确率，本发明提供了一种中药制剂金嗓散结丸中黄芩苷的检测方法，具体包括以下步骤：

s1、取待检测中药制剂10g并研细，得到待检测中药制剂粉末。

待检测中药制剂为金嗓散结丸。精密称定待检测中药制剂10g并研细，得到待检测中药制剂粉末，将待检测粉末置于锥形瓶中，可以按照以下方式实现：在符合药品检测标准的前提下，采用常规的研钵，将待检测中药制剂10g研磨、研细，制成粉末。

s2、在所述待检测中药制剂粉末中加入70％的乙醇40ml，加热回流1小时，将加热回流后的液体滤过，将滤过后的滤液蒸干，得到待处理的提取物质。

s3、在所述待处理的提取物质中加水20ml，得到待处理溶液。

s4、在所述待处理溶液中加入20ml石油醚，振摇提取杂质后，去除石油醚液，重复振摇提取步骤1次，得到提取后溶液，其中，所述石油醚沸程为60～90℃。

具体的，重复振摇提取步骤1次的实现方式如下：在所述待处理溶液中加入20ml石油醚，振摇提取溶液杂质后，去除石油醚后，再次在去除石油醚后的待处理溶液中加入20ml石油醚，振摇提取溶液杂质后，去除石油醚，得到提取后的溶液。

s5、对所述提取后溶液进行ph值调节、加乙酸乙酯溶液后多次振摇提取、合并每次提取后的乙酸乙酯溶液、提纯溶解后，制成供试品溶液。

s6、将黄芩苷粉末作为对照品，并将所述对照品制成对照品溶液。

在步骤s6中，上述黄芩苷可以为黄芩苷粉末，该步骤中，可以将上述黄芩苷粉末制成溶液作为对照品溶液，该黄芩苷粉末可以直接获得。

s7、将同等量的所述供试品溶液和所述对照品溶液分别点于同一硅胶g薄层板上。

上述步骤s7，可以减少采用多个硅胶g薄层板所带来的误差，提高了对黄芩苷检测的准确性。

s8、以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5:3:1:1)为展开剂，对所述硅胶g薄层板进行展开、取出、晾干处理，得到待检视硅胶g薄层板。

s9、在所述待检视硅胶g薄层板上喷以三氯化铁乙醇溶液，以使得所述待检视硅胶g薄层板上显示所述供试品的斑点与所述对照品的斑点。

具体的，上述三氯化铁乙醇溶液中，三氯化铁的浓度为5％。

s10、比对所述供试品的斑点与所述对照品的斑点，确定所述待检测中药制剂金嗓散结丸中是否含有黄芩苷。

本发明实施例提供的中药制剂中黄芩苷的检测方法，在供试品溶液的制备过程中，利用70％乙醇回流，提取出更多检测成分，对含有黄芩苷的溶液进行酸水解，使黄芩苷结构中的糖体和苷元分离开来，成为游离状态，提高了苷元在溶液中的含量，进而提高检测的准确性，加入石油醚可以更好的除杂消除图谱背景，进一步的提高了检测的准确性。在所述待检视硅胶g薄层板上喷以5％三氯化铁乙醇溶液，斑点显色清晰，大大增加薄层斑点检出效果，便于观察鉴别，保障了鉴别结果的准确性；上述检测方法简单、易操作，消除了原有黄芩苷鉴别的不确定性，是一种能够更全面、准确的鉴别中药制剂金嗓散结丸中黄芩苷的鉴别方法，上述修订后的鉴别方法满足药品检测标准，提高了药品的质量控制；上述检测方法，采用薄层色谱法，条件合理，方法可行，专属性强，重现性、耐用性均较好。

可选的，所述硅胶g薄层板可以为用4％的醋酸钠溶液制备的硅胶g薄层板。

采用4％醋酸钠溶液制备的硅胶g薄层板，可以有效的将供试品溶液和对照品溶液加样在薄层板上，以4％的醋酸钠溶液为粘合剂，可以使待检测的有效物质以及对照品溶液中的有效物质加样在硅胶g薄层板上，薄层斑点圆整清晰，消除图谱背景干扰，检测成分检出效果明显，分离度及复现性均较好，最终保证检测结果的准确性。

可选的，上述步骤s5可以按以下步骤s501-s504实现：

s501、将所述提取后溶液的ph值调为2，得到调节后溶液。

s502、在所述调整后溶液中加入20ml乙酸乙酯溶液，振摇提取，收集第一次提取后的乙酸乙酯溶液，重复振摇提取步骤2次，分别收集第二次提取后的乙酸乙酯液以及第三次提取后的乙酸乙酯液。

具体的，可以在调整后溶液中加入20ml乙酸乙酯溶液，振摇提取，收集第一次提取后的乙酸乙酯溶液后，在剩余溶液中加入20ml乙酸乙酯溶液，振摇提取，收集第二次提取后的乙酸乙酯溶液；在收集完第二次提取后的乙酸乙酯溶液后，在剩余溶液中加入20ml乙酸乙酯溶液，振摇提取，收集第三次提取后的乙酸乙酯溶液，经过上述三次提取，更加充分的将溶液中的黄芩苷提取至乙酸乙酯溶液中，提高检测的准确性。

s503、将所述第一次提取后的乙酸乙酯液、所述第二次提取后的乙酸乙酯液、所述第三次提取后的乙酸乙酯液合并，得到提取溶液。

s504、将所述提取溶液蒸干后，得到提纯物质，在所述提纯物质中加入1ml甲醇溶解，得到供试品溶液。

由于黄芩苷的组成结构中包含有糖体和苷元，将所述提取后溶液的ph值调为2，可以使黄芩苷进行酸水解，使黄芩苷结构中的糖体和苷元分离开来，成为游离状态，提高了苷元在溶液中的含量。采用上述供试品溶液的制备方法，更充分的将中药制剂金嗓散结丸中黄芩苷充分的提取，以备后续检测工作的进行，提高了检测准确性。

可选的，步骤s501中，可以按以下方式将所述提取后溶液的ph值调为2：

检测所述提取后溶液的ph值；

在所述提取后溶液中加入盐酸，直至所述提取后溶液的ph值为2，停止加入盐酸。

在本发明实施例中，可以对所述提取后溶液的ph值进行实时检测，具体的实时检测ph值时，可以用ph试纸检测或仪器检测。

可选的，步骤s6可以按以下步骤实现：

取黄芩苷粉末作为对照品；

在所述对照品中加入甲醇，制成所述对照品含量为1mg/ml的对照品溶液。

直接将黄芩苷粉末制备成对照品溶液，对比性强，且准确性高。

可选的，步骤s7可以按以下步骤实现：将10μl的所述供试品溶液和10μl的所述对照品溶液分别点于同一硅胶g薄层板上中。

可选的，步骤s10可以按以下步骤实现：

判断在所述对照品的斑点的同一位置处，所述供试品是否存在与所述对照品斑点相同颜色的斑点，若存在，则判定在所述待检测中药制剂金嗓散结丸中含有黄芩苷；

若不存在，则判定在所述待检测中药制剂金嗓散结丸中未含有黄芩苷。

进一步的，在所述待检视硅胶g薄层板上喷以三氯化铁乙醇溶液，本发明提供的中药制剂中黄芩苷的检测方法不对温度以及湿度进行限制，在实验室要求的温度及湿度的条件下，均可以采用本发明提供的中药制剂中黄芩苷的检测方法对黄芩苷进行检测，请参见图2，图2为采用本发明提供的中药制剂中黄芩苷检测方法对中药制剂中黄芩苷进行检测的检测结果图，其中，标号4为对照品的斑点，标号1-3为3种供试品的斑点，在温度为24℃，湿度为30％的条件下，得到上述图2中左侧的检测结果图，在温度为5℃，湿度为64％的条件下，得到上述图2中右侧的检测结果图；请参见图3，图3为另一种采用本发明提供的中药制剂中黄芩苷检测方法对中药制剂中黄芩苷进行检测的检测结果图，其中，标号1为对照品的斑点，标号2-5为供试品的斑点，在温度为24℃，湿度为20％的条件下，得到上述图3中左侧的检测结果图，在温度为5℃，湿度为64％的条件下，得到上述图3中右侧的检测结果图，图2、图3所展现的检测结果图中，供试品溶液的斑点与对照品溶液的斑点显示清晰，以使质检人员可以准确判断中药制剂中是否存在黄芩苷，从而保证中药制剂金嗓散结丸的质量。

实施例2

现有的检测手段为：取中药制剂金嗓散结丸10g，研细，加甲醇40ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用稀盐酸调节ph值至2，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯提取液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取黄芩苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2015年版四部通则0502)试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶g薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5:3:1:1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1％三氯化铁乙醇溶液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

利用现有技术方案对中药制剂金嗓散结丸中的黄芩苷进行检测，检测结果请参见图1，图1中，标号为4的是对照品的斑点，标号为1-3的是三种供试品的斑点，在温度为16℃，湿度为48％的条件下检测，得到上述图1所示的检测结果图，检测结果为：供试品色谱中，在与黄芩苷对照品色谱相应位置，供试品在色谱中显示基本相同颜色的斑点，但是斑点显示不明显，影响产品质量的判断；采用本发明提供的检测方法对中药制剂金嗓散结丸中的黄芩苷进行检测，检测结果参见图2，检测结果为：供试品色谱中，在与黄芩苷对照品色谱相应的位置显相同颜色的斑点，斑点显示明显。比较上述两种方案的检测结果发现，本发明提供的中药制剂中黄芩苷的检测方法检出斑点相对于现有技术的检出斑点更为明显，在经过色谱仪器分析验证后，本发明提供的中药制剂中黄芩苷的检测方法检出斑点更明显，检测结果更准确。

以上内容是结合具体的优选实施方式对本发明所作的进一步详细说明，不能认定本发明的具体实施只局限于这些说明。对于本发明所属技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干简单推演或替换，都应当视为属于本发明的保护范围。