本发明涉及检测试剂领域，具体涉及一种巯基化合物检测试剂及其制备方法和试剂盒。
技术背景
人乳头瘤病毒（hpv）是一种属于乳多空病毒科的乳头瘤空泡病毒a属，是球形dna病毒，能引起人体皮肤黏膜的鳞状上皮增殖。目前已分离出130多种，不同的型别引起不同的临床表现，根据侵犯的组织部位不同可分为:
（1）皮肤低危型：包括hpv1、2、3、4、7、10、12、15等与寻常疣、扁平疣、跖疣等相关；
（2）皮肤高危型：包括hpv5，8，14，17，20，36，38与疣状表皮发育不良有关，其他还与可能hpv感染有关的恶性肿瘤包括：外阴癌、阴茎癌、肛门癌、前列腺癌、膀胱癌；
（3）黏膜低危型如hpv-6，11，13，32，34，40，42，43，44，53，54等与感染生殖器、肛门、口咽部、食道黏膜；
（4）黏膜高危型hpv-16、18、30、31、33、35、39与宫颈癌、直肠癌、口腔癌、扁桃体癌等。
前述第（2）和（4）项信息表明，众多恶性肿瘤与hpv感染有关，因此hpv感染的早期检测至关重要，hpv感染后的一个重要指标就是人体代谢物（如尿液）或分泌物中巯基化合物的含量高于正常人。现有研究表明，hpv感染后引起恶性肿瘤的患者尿液或者分泌物中巯基化合物的含量较正常人明显升高，因此可以通过检测尿液或分泌物中的巯基化合物来进行hpv感染与否的筛查。
现有的巯基化合物检测法均针对巯基化合物还原性来设计，通过氧化巯基化合物使氧化试剂被还原并显色，再通过比色法测定巯基化合物含量，或直接通过观察颜色来判断结果是否为阳性。然而由于尿液或者分泌物中还含有其他还原性物质，目前的检测方法均需加入对照样来判断结果，而一般是通过加入氯化汞使巯基化合物被屏蔽而不与氧化试剂发生反应，从而降低显色程度作为对照。然而氯化汞为剧毒品，会造成操作危险以及环境污染，并且以对照的方式进行检测需要对照样品与被测样品之间有明显的显色差异，否则仅通过肉眼很难判断结果。
技术实现要素：
为了解决现有技术中存在的问题，本发明的目的之一在于提供一种巯基化合物检测试剂。
本发明的目的之二在于提供一种巯基化合物检测试剂的加工方法。
本发明的目的之三在于提供一种含有前述巯基化合物检测试剂的试剂盒。
本发明解决其技术问题采用的技术方案如下：
本发明提供的巯基化合物检测试剂是由三部分试剂组分混合配制而成，分别是磷钨酸试剂，醋酸缓冲液和屏蔽试剂，所述屏蔽试剂具有氧化性，呈透明无色，在一定条件下被还原后仍为无色。
本发明的工作原理是：当检测对象为正常人的尿液或者分泌物时，其中也含有还原性物质，如维生素c，普通的磷钨酸试剂与维生素c反应时会快速显色而变蓝，导致假阳性，而加入屏蔽试剂后，维生素c与屏蔽试剂优先反应，则不会再与磷钨酸试剂反应显色，此时显示阴性，为正常。当检测对象为hpv感染患者的时，其中含有大量巯基化合物，含量远高于正常尿液或者分泌物中所含有的还原性物质，此时屏蔽试剂优先与巯基化合物反应，然而不足以将其完全屏蔽，同时正常尿液或者分泌物中高活性的还原物质得到保护，其与磷钨酸试剂反应显色，从而得到阳性结果，为真阳性，即尿液或者分泌物中原有的高活性还原物质充当了巯基化合物的指示反应物。
另外，人尿液中有较高含量的尿酸也具有还原性，但其在碱性条件下还原性较高，而本发明所提供的检测试剂是偏酸性试剂，所以尿酸的干扰可排除。其它分泌物中若含有尿酸类还原性物质，通常也都是在碱性条件下还原型较高，同理，由于检测试剂偏酸性的条件限制，可以排除干扰。
优选的，所述磷钨酸试剂的制备方法如下：称取5±0.5g钨酸钠，溶解于40±5ml去离子水中，加85±0.5%浓磷酸4±0.5ml及沸石，加热至回流开始计时，持续沸腾回流2±0.5小时，停止加热，冷却至室温，然后定容至100±0.5ml保存在棕色试剂瓶中。
优选的，所述醋酸缓冲液的制备方法如下：分别配置2±0.5m醋酸钠溶液和2±0.5m醋酸溶液，并以体积比为5:1的方式将前后两者混合。
优选的，所述屏蔽试剂的制备方法如下：称取屏蔽剂25~100mg，溶解于100±0.5ml去离子水中，保存在棕色试剂瓶里。
优选的，所述巯基化合物检测试剂由磷钨酸试剂、醋酸缓冲液和屏蔽试剂按体积比2:1:1混合均匀获得。
一种巯基化合物检测试剂的制备方法，所述方法步骤如下：
步骤s1:称取5±0.5g钨酸钠，溶解于40±5ml去离子水中，加85±0.5%浓磷酸4±0.5ml及沸石，加热至回流开始计时，持续沸腾回流2±0.5小时，停止加热，冷却至室温，然后定容至100±0.5ml保存在棕色试剂瓶中;
步骤s2：分别配置2±0.5m醋酸钠溶液和2±0.5m醋酸溶液，并以体积比为5:1的方式将前后两者混合；
步骤s3：称取屏蔽剂50~100mg，溶解于100±0.5ml去离子水中，保存在棕色试剂瓶里；
步骤s4：将磷钨酸试剂、醋酸缓冲液和屏蔽试剂按体积比2:1:1混合均匀。
本发明还提供一种巯基化合物自查试剂盒，主要包含：取样器，测试试剂和测试管，测试试剂为本发明前述的巯基化合物检测试剂。
本发明的有益效果：本发明提供的巯基化合物检测试剂基于原理创新，具有安全无毒，操作简单，检测快速以及无需对照等优点。
具体实施方式
基于本发明所述原理，下面通过具体实施例，对本发明的技术方案做进一步的阐述。实施例中所用各种试剂均系市场采购，纯度采用分析纯。
本发明所提供的巯基化合物检测试剂具体实施步骤如下：
步骤s1、磷钨酸试剂制备：称取5g钨酸钠，溶解于40ml去离子水中，加85%浓磷酸4ml及沸石，加热至回流开始计时，持续沸腾回流2小时，停止加热，冷却至室温，然后定容至100ml保存在棕色试剂瓶中；
步骤s2、醋酸缓冲液：分别配置2m醋酸钠溶液和2m醋酸溶液，并以体积比为5:1的方式将前后两者混合；
步骤s3、屏蔽试剂：称取屏蔽试剂25~100mg，优选为50~100mg，溶解于100ml去离子水中，保存在棕色试剂瓶里；
步骤s4、巯基化合物检测试剂：将磷钨酸试剂，醋酸缓冲液和屏蔽试剂按体积比2:1:1混合均匀；
本发明用于检测：将与巯基化合物检测试剂按体积比1:2混合，静置10~15分钟，若混合液明显变蓝，则为阳性，否则为阴性。
如实施步骤s3所述，屏蔽试剂为氧化剂，溶于水，溶解后溶液透明无色，且一定条件下被还原后仍为无色，优选为碘酸钠，高碘酸钠。
为了使本发明更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的实施例仅用于解释本发明，并不用于限定本发明。
实施例1
巯基化合物检测试剂的制备。
磷钨酸试剂制备：称取5g钨酸钠，溶解于40ml去离子水中，加85%浓磷酸4ml及沸石，加热至回流开始计时，持续沸腾回流2小时，停止加热，冷却至室温，然后定容至100ml保存在棕色试剂瓶中；
醋酸缓冲液：分别配置2m醋酸钠溶液和2m醋酸溶液，并以体积比为5:1的方式将前后两者混合；
屏蔽试剂：称取碘酸钠50mg，溶解于100ml去离子水中，保存在棕色试剂瓶里；
巯基化合物检测试剂：将磷钨酸试剂，醋酸缓冲液和屏蔽试剂按体积比2:1:1混合均匀。
实施例2
巯基化合物检测试剂的制备。
屏蔽试剂：称取碘酸钠100mg，溶解于100ml去离子水中，保存在棕色试剂瓶里；
其余同实施例1
测试例1
以下以模拟尿样进行本发明检测试剂的效果测试。
模拟尿样1制备：称取500mgl-半胱氨酸与7mg维生素c，溶解于100ml水中；
模拟尿样2制备：称取7mg维生素c，溶解于100ml水中。
取模拟尿样1，100μl，与实施例1中的检测试剂200ul混合，静置10~15分钟，混合液变蓝，结果为阳性；取模拟尿样2，100μl，与实施例1中的检测试剂200ul混合，静置10~15分钟，混合液无变化，结果为阴性。
测试例2
以下以正常人尿样进行本发明检测试剂的效果测试。
正常人尿样1：早饭后第一次排出的，静置冷却至室温；
正常人尿样2：取正常人尿样1，25ml，向其中加入125mgl-半胱氨酸并溶解。
不含屏蔽试剂的磷钨酸试剂制备：将实施例1中的磷钨酸试剂，醋酸缓冲液按体积比为2:1混合均匀即可。
取正常人尿样1，100μl，与实施例2中的检测试剂200μl混合，静置10~15分钟，混合液颜色无变化，结果为阴性；取模拟尿样2，100μl，与实施例2中的检测试剂200μl混合，静置10~15分钟，混合液颜色变蓝，结果为阳性；取正常人尿样1，100μl，与不含屏蔽试剂的磷钨酸试剂200μl混合，静置10~15分钟，混合液颜色变蓝，结果为假阳性。
以上所述的实施例只是本发明的一种较佳的方案，并非对本发明作任何形式上的限制，在不超出权利要求所记载的技术方案的前提下还有其它的变体及改型。