一种测定豆浆中AGEs含量的方法与流程

本发明涉及食品检测
技术领域：
，更具体地，涉及一种测定豆浆中ages(晚期糖化终末产物)含量的方法。
背景技术：
：ages是食品和生物体中由美拉德反应产生的高度氧化的化合物。在食品加工过程中ages可由美拉德反应产生，也可由糖分解中间产物或脂质过氧化反应产物经复杂变化产生。大量研究表明，食源性ages与肾衰竭、糖尿病、老年痴呆症、慢性心力衰竭等疾病的发展有关，长期摄入将对人体造成潜在危害。因此，检测食品中ages的含量具有重要的意义。已报道的ages检测方法主要有：酶联免疫法、荧光光谱法、液相质谱、气相质谱等。酶联免疫法操作简便、快速，结果具有一定的可靠性，但所需试剂盒通常需要特定的储存条件且有效期较短，作为消耗品价格较高。荧光光谱法、液相质谱、气相质谱等仪器分析法测试结果准确可靠，但样本测试前通常涉及复杂的前处理过程、相关设备昂贵且需要操作者具有一定的学术背景，并不适用于中小企业或者消费者使用。目前还没有利用紫外-可见分光光度计测定食品体系中ages含量的方法。技术实现要素：本发明的目的在于针对现有技术中缺乏简单、快速、成本低廉的ages含量检测方法，提供一种测定豆浆中ages含量的方法。本发明的上述目的是通过以下方案予以实现的：一种测定豆浆中ages含量的方法，包括如下步骤：取混合均匀的豆浆样品加热后，迅速冷却，并取上清液，检测其a420nm值；然后将检测到的值带入以下式1中换算，即可计算得到豆浆中ages的含量；y＝2964.88-2879.40e(-1.51x)式1；其中x为a420nm值；y值即为ages的含量。食品体系ages的生成通常伴随体系颜色的变化，美拉德反应末期生成的棕色聚合物会使体系在420nm处的吸光度值(a420nm)增加；分析体系a420nm与ages含量的相关性，建立换算模型，开发紫外-可见分光光度计测定体系ages含量的方法，具有操作简便、费用低廉、具有一定可靠性的优势，便于中小企业乃至消费者了解食品中ages的时时含量。优选地，加热的温度为60～120℃下加热0～120min。优选地，加热的温度为80～100℃下加热15～90min。优选地，所述迅速冷却为在冰浴条件下冷却。优选地，所述a420nm值采用紫外-可见分光光度计检测得到。优选地，所述式1中，x的取值范围为0.00～1.55。优选地，所述式1的相关系数的平方r2≥0.94。优选地，所述豆浆中还可加入糖类物质；所述糖类物质包括葡萄糖、果糖、麦芽糖、半乳糖或蔗糖中的一种或多种。与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：本发明通过摸索豆浆体系加热过程中，体系中a420nm与ages含量的相关性得到式1所示换算公式，然后通过式1所示公式，只需要简单的检测豆浆体系的a420nm值即可准确得到豆浆中ages的含量；所述方法简单、快速、准确性高，只需要利用紫外-可见分光光度计即可，操作简单，对仪器设备要求低，仪器成本和检测成本均较低，且操作简单无需专业培训；弥补了现阶段中小企业及消费者测定ages含量技术的缺失。附图说明图1为豆浆模拟体系a420nm值与ages含量拟合曲线。图2为ages测量值与ages计算值(依据a420nm值与ages含量拟合公式计算)线性关系图。具体实施方式下面结合具体实施例对本发明做出进一步地详细阐述，所述实施例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。下述实施例中所使用的试验方法如无特殊说明，均为常规方法；所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，为可从商业途径得到的试剂和材料。实施例1豆浆中a420nm与ages含量的相关性摸索豆浆加热后，体系中a420nm值与ages含量的相关性，具体过程如下：配制豆浆模拟体系：分别在0.05、0.1或0.2m的磷酸盐缓冲液(ph5.0、ph7.0或ph8.0)中分别溶解大豆分离蛋白和糖类物质(葡萄糖、果糖、麦芽糖、半乳糖或蔗糖)，使大豆分离蛋白的终浓度分别为1、2、4或6mg/ml，使糖类物质的终浓度为0.1、0.2、0.4或0.6m。混合均匀后，备用。将模拟体系分别置于60℃、80℃、100℃、120℃下加热0、15、30、45、60、90、120min，将加热后的样品迅速冰水浴，之后离心得上清液，利用紫外-可见分光光度计测定上述上清液的a420nm值，取上述上清液用磷酸盐缓冲液(与上清液体系相同)稀释10倍，而后以荧光测量波长为λex/λem＝370nm/440nm处荧光强度，检测到的荧光强度即表征为体系中ages的检测含量。上述检测得到不同条件下荧光强度和a420nm值(图1)，拟合后建立ages含量(y)与a420nm(x)的换算公式为：y＝2964.88-2879.40e(-1.51x)，r2＝0.94式1实施例2式1公式可行性的探究豆浆模拟体系中对利用紫外-可见分光光度计测定ages含量的可行性进行初步探讨，即对式1公式可行性的探究。具体过程如下：配制豆浆模拟体系：在0.2m的磷酸盐缓冲液(ph7.0)中溶解大豆分离蛋白和葡萄糖，使大豆分离蛋白的终浓度2mg/ml，使葡萄糖的终浓度为0.2m。混合均匀后，备用。将模拟体系分别置于100℃下加热0、15、30、45、60、90、120min，将加热后的样品迅速冰水浴，之后离心得上清液，利用紫外-可见分光光度计测定上述上清液的a420nm值，利用实施例1中得到的式1公式计算体系ages含量，得到体系ages含量计算值；取上述上清液用磷酸盐缓冲液(与上清液体系相同)稀释10倍，而后以荧光测量波长为λex/λem＝370nm/440nm处强度表征体系荧光性ages含量，得到体系ages含量测量值。表1中显示了100℃加热不同时间下豆浆模拟体系的a420nm值，利用该值代入实施例1中建立的a420nm与ages含量换算公式(1)，即可利用a420nm值计算得到体系ages含量。同时，利用荧光光谱仪测定体系ages含量，得到体系ages含量测量值。通过比较可知豆浆模拟体系中ages含量计算值与测量值之间均无显著性差异(p＞0.05)。表明，本发明所述方法准确度较高，可以利用紫外-可见分光光度计测定豆浆模拟体系ages含量。由表1可知本方法的标准偏差(sd)范围为：3.52～59.97，相对标准偏差(rsd)范围为：0.56～6.84％，表明本发明所述方法精密度较高，重现性较好。表1100℃加热不同时间下豆浆模拟体系a420nm值、ages含量计算值和测量值时间/mina420nm值ages含量计算值ages含量测量值00.01±0.01124.15±5.70120.54±2.38150.05±0.01294.82±20.16257.80±15.10300.14±0.00634.15±3.52629.77±12.86450.20±0.01835.87±32.15828.70±14.23600.28±0.011078.15±25.641043.21±14.81900.42±0.031436.98±59.971430.57±37.701200.51±0.011631.64±26.171638.50±39.06注：“*”表示ages含量测量值与计算值有显著性差异实施例3采用实施例1中的公式和方法检测速溶豆浆中(添加葡萄糖)ages含量。选择常见速溶食品——纯豆粉，根据《中华人民共和国国内贸易行业标准——豆浆类》(sb/t10633-2011)中普通型豆浆蛋白质含量要求(2.9g/100g)，加蒸馏水冲调制得豆浆，对利用紫外-可见分光光度计和分光测色仪测定ages含量的可行性进行进一步的探讨。配制豆浆体系：在蒸馏水中溶解纯豆粉和葡萄糖，使纯豆粉的终浓度为2.9g/100g，使葡萄糖的终浓度为0.2m。混合均匀后，备用。将模拟体系分别置于100℃下加热30和60min，将加热后的样品迅速冰水浴，之后离心得上清液，利用紫外-可见分光光度计测定上述上清液的a420nm值，利用实施例1中得到的式1计算体系ages含量，得到体系ages含量计算值；取上述上清液用蒸馏水稀释10倍，而后以荧光测量波长为λex/λem＝370nm/440nm处强度表征体系荧光性ages含量，得到体系ages含量测量值。表2100℃加热不同时间下豆浆体系(葡萄糖)a420nm值、ages含量计算值和测量值表2中显示了100℃加热不同时间下豆浆体系的a420nm值，利用该值代入实施例1中建立的a420nm与ages含量换算公式(1)，即可利用a420nm值计算得到体系ages含量。同时，利用荧光光谱仪测定体系ages含量，得到体系ages含量测量值。通过比较可知样品的ages含量计算值与测量值之间均无显著性差异(p>0.05)。表明，本发明所述方法在实际豆浆体系中应用具有较高的准确度，可以利用紫外-可见分光光度计测定豆浆体系ages含量。由表2可知在实际豆浆体系中本方法的标准偏差(sd)范围为：16.85～24.65，相对标准偏差(rsd)范围为：2.68～3.31％，均在实施例2所得范围之内，表明本发明所述方法在实际体系应用中具有较高的精密度和重现性。上述验证过程，加热温度在60～120℃时，均可行，且验证结果与100℃的验证结果一致。实施例4采用实施例1中的公式和方法检测速溶豆浆(添加果糖)中ages含量。选择常见速溶食品——纯豆粉，根据《中华人民共和国国内贸易行业标准——豆浆类》(sb/t10633-2011)中普通型豆浆蛋白质含量要求(2.9g/100g)，加蒸馏水冲调制得豆浆，对利用紫外-可见分光光度计测定ages含量的可行性进行进一步的探讨。配制豆浆体系：在蒸馏水中溶解纯豆粉和果糖，使纯豆粉的终浓度为2.9g/100g，使果糖的终浓度为1.0m。混合均匀后，备用。将模拟体系分别置于100℃下加热30和60min，将加热后的样品迅速冰水浴，之后离心得上清液，利用紫外-可见分光光度计测定上述上清液的a420nm值，利用实施例1中得到的式1计算体系ages含量，得到体系ages含量计算值；取上述上清液用蒸馏水稀释10倍，而后以荧光测量波长为λex/λem＝370nm/440nm处强度表征体系荧光性ages含量，得到体系ages含量测量值。表3100℃加热不同时间下豆浆体系(果糖)a420nm值、ages含量计算值和测量值时间/mina420nm值ages含量计算值ages含量测量值300.17±0.00733.14±7.69720.45±49.26600.24±0.01964.25±41.24951.08±30.84表3中显示了100℃加热不同时间下豆浆体系的a420nm值，利用该值代入实施例1中建立的a420nm与ages含量换算公式(1)，即可利用a420nm值计算得到体系ages含量。同时，利用荧光光谱仪测定体系ages含量，得到体系ages含量测量值。通过比较可知样品的ages含量计算值与测量值之间均无显著性差异(p>0.05)。表明，本发明所述方法在实际豆浆体系中应用具有较高的准确度，可以利用紫外-可见分光光度计测定豆浆体系ages含量。由表3可知在实际豆浆体系中本方法的标准偏差(sd)范围为：7.69～41.24，相对标准偏差(rsd)范围为：1.05～4.28％，均在实施例2所得范围之内，表明本发明所述方法在实际体系应用中具有较高的精密度和重现性。上述验证过程，加热温度在60～120℃时，均可行，且验证结果与100℃的验证结果一致。实施例5采用实施例1中的公式和方法检测速溶豆浆中(未额外添加糖类物质)ages含量。选择常见速溶食品——纯豆粉，根据《中华人民共和国国内贸易行业标准——豆浆类》(sb/t10633-2011)中普通型豆浆蛋白质含量要求(2.9g/100g)，加蒸馏水冲调制得豆浆，对利用紫外-可见分光光度计测定ages含量的可行性进行进一步的探讨。配制豆浆体系：在蒸馏水中溶解纯豆粉，使纯豆粉的终浓度为2.9g/100g。混合均匀后，备用。将模拟体系分别置于100℃下加热30和60min，将加热后的样品迅速冰水浴，之后离心得上清液，利用紫外-可见分光光度计测定上述上清液的a420nm值，利用实施例1中得到的式1计算体系ages含量，得到体系ages含量计算值；取上述上清液用蒸馏水稀释10倍，而后以荧光测量波长为λex/λem＝370nm/440nm处强度表征体系荧光性ages含量，得到体系ages含量测量值。表4100℃加热不同时间下豆浆体系(无糖)a420nm值、ages含量计算值和测量值时间/mina420nm值ages含量计算值ages含量测量值300.007±0.000115.76±0.00110.14±5.26600.009±0.001124.34±4.29121.31±3.84表4中显示了100℃加热不同时间下豆浆体系的a420nm值，利用该值代入实施例1中建立的a420nm与ages含量换算公式式1，即可利用a420nm值计算得到体系ages含量。同时，利用荧光光谱仪测定体系ages含量，得到体系ages含量测量值。通过比较可知样品的ages含量计算值与测量值之间均无显著性差异(p>0.05)。表明，本发明所述方法在实际豆浆体系中应用具有较高的准确度，可以利用紫外-可见分光光度计测定豆浆体系ages含量。由表4可知在实际豆浆体系中本方法的标准偏差(sd)范围为：0.00～4.29，相对标准偏差(rsd)范围为：0.00～3.45％，均在实施例2所得范围之内，表明本发明所述方法在实际体系应用中具有较高的精密度和重现性。上述验证过程，加热温度在60～120℃时，均可行，且验证结果与100℃的验证结果一致。最后所应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，对于本领域的普通技术人员来说，在上述说明及思路的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动，这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明权利要求的保护范围之内。当前第1页12