一种动物眼球病理切片的制作方法与流程

本发明涉及组织病理领域，尤其涉及一种动物眼球病理切片的制作方法。

背景技术：

眼科研究领域常规应用的病理技术涉及到眼球组织标本的制备，目前使用常规的固定液及常规的处理流程固定后的眼球标本容易出现眼球变形、眼球各层组织脱离的现象，尤其是视网膜组织的脱离；低质量的病理切片制约了眼科研究领域的高质量的病理研究；因此，非常有必要开发出新型的动物眼球专用固定液，并优化出使用程序，以制备出高质量的眼球病理切片，有助于提升视网膜相关研究的基础应用。

技术实现要素：

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种动物眼球病理切片的制作方法，有利于制备出高质量的眼球病理切片，以助于提升视网膜相关研究的基础应用。

本发明提供了一种动物眼球病理切片的制作方法，包括以下步骤：

(1)眼球摘取：剪断动物眼球外附属肌肉，分离出眼球；

(2)眼球固定：将分离出的眼球放入预冷至4.0℃的固定液内，放入温度设置为4.0℃的冰箱中固定48小时；

(3)眼球视杯的脱水透明：将(2)处理过的眼球依次用下列试剂处理：75％乙醇1h、90％乙醇1h、95％乙醇1h、95％乙醇1h、无水乙醇1-1.5h、无水乙醇1-1.5h、二甲苯1-2h、二甲苯1-2h；

(4)浸蜡包埋；将(3)处理过的眼球依次用下列试剂处理：石蜡1-2h、石蜡1-2h；处理后进行石蜡包埋；

(5)切片：按照设定厚度进行切片；

其中，在步骤(2)中，所述固定液的组成成分及体积比例如下：4％多聚甲醛溶液：无水乙酸：无水乙醇＝10：(1.5-2.0)：(8.0-8.5)。

作为本发明技术方案的进一步改进，在步骤(2)中，所述固定液的组成成分及体积比例如下：4％多聚甲醛溶液：无水乙酸：无水乙醇＝10：1.5：8.5。

作为本发明技术方案的进一步改进，在步骤(3)中，将(2)处理过的眼球依次用下列试剂处理：75％乙醇1h、90％乙醇1h、95％乙醇1h、95％乙醇1h、无水乙醇1h、无水乙醇1h、二甲苯1h、二甲苯1h；

在步骤(4)中，将(3)处理过的眼球依次用下列试剂处理：石蜡1h、石蜡1h。

作为本发明技术方案的进一步改进，在步骤(2)中，所述固定液的组成成分及体积比例如下：4％多聚甲醛溶液：无水乙酸：无水乙醇＝10：1.0：8.0。

作为本发明技术方案的进一步改进，在步骤(2)中，分离出的眼球放入固定液之前先使用针头在眼球的角膜中央部开设若干个小孔。

作为本发明技术方案的进一步改进，在步骤(3)中，将(2)处理过的眼球依次用下列试剂处理：75％乙醇1h、90％乙醇1h、95％乙醇1h、95％乙醇1h、无水乙醇1.5h、无水乙醇1.5h、二甲苯1.5h、二甲苯1.5h；

在步骤(4)中，将(3)处理过的眼球依次用下列试剂处理：石蜡2h、石蜡2h。

与现有技术相比，本发明具有以下有益技术效果：

本发明提供的一种动物眼球病理切片的制作方法，通过使用改进后的固定液，并优化出使用程序，所制备出的眼球病理切片，经过he染色后在显微镜下观察显示，眼球各层组织紧密连接、结构平整，细胞形态非常好，排列规则；因此，使用本发明固定液及相应的程序可以维持小动物及大动物眼球组织非常好的结构，避免各层组织出现脱离、变形，避免目前常规规定液固定后造成的固定性视网膜脱离，非常有助于提升眼球标本制作的质量，避免视网膜与色素上皮的脱离，制备高质量的石蜡及冰冻切片，较好地服务于眼科研究领域。

附图说明

图1为本发明实施例一所制作的小鼠视网膜切片在四倍物镜下的照片；

图2为本发明实施例一所制作的小鼠视网膜切片在四十倍物镜下的照片；

图3为本发明的本发明实施例二所制作的流产胎儿视网膜切片在四倍物镜下的照片。

具体实施方式

下面将结合实施例和附图来详细说明本发明，这些实施例和附图仅起说明性作用，并不局限于本发明的应用范围。本发明不限于下述实施方式或实施例，凡不违背本发明精神所做出的修改及变形，均应包括在本发明范围之内。

本发明提供了一种动物眼球病理切片的制作方法，包括以下步骤：

(1)眼球摘取：剪断动物眼球外附属肌肉，分离出眼球；

(2)眼球固定：将分离出的眼球放入预冷至4.0℃的固定液内，放入温度设置为4.0℃的冰箱中固定48小时；

(3)眼球视杯的脱水透明：将(2)处理过的眼球依次用下列试剂处理：75％乙醇1h、90％乙醇1h、95％乙醇1h、95％乙醇1h、无水乙醇1.5h、无水乙醇1.5h、二甲苯1.5h、二甲苯1.5h；

(4)浸蜡包埋；将(3)处理过的眼球依次用下列试剂处理：石蜡2h、石蜡2h；处理后进行石蜡包埋；

(5)切片：按照设定厚度进行切片；

其中，在步骤(2)中，所述固定液的组成成分及体积比例如下：4％多聚甲醛溶液：无水乙酸：无水乙醇＝10：(1.5-2.0)：(8.0-8.5)。

实施例一

本实施例提供了一种动物眼球病理切片的制作方法，包括以下步骤：

(1)眼球摘取：剪断小动物眼球外附属肌肉，分离出眼球；本实施例以小动物的眼球进行示例说明，小动物为8周龄c57小鼠，当然也可以采用其他眼球壁厚度较小的小动物眼球，例如大鼠眼球等。

(2)眼球固定：将分离出的眼球放入预冷至4.0℃的固定液内，放入温度设置为4.0℃的冰箱中固定48小时；所述固定液的组成成分及体积比例如下：4％多聚甲醛溶液：无水乙酸：无水乙醇＝10：(1.5-2.0)：(8.0-8.5)。

(3)眼球视杯的脱水透明：将(2)处理过的眼球依次用下列试剂处理：75％乙醇1h、90％乙醇1h、95％乙醇1h、95％乙醇1h、无水乙醇1h、无水乙醇1h、二甲苯1h、二甲苯1h。

(4)浸蜡包埋；将(3)处理过的眼球依次用下列试剂处理：石蜡1h、石蜡1h；处理后进行石蜡包埋。

(5)切片：按照设定厚度进行切片；设定厚度为4微米，并进行he染色，照相观察。

如图1和图2所示，经过he染色后在显微镜下观察显示，小鼠眼球各层组织紧密连接、结构平整，细胞形态非常好，排列规则。

实施例二

本实施例提供了一种动物眼球病理切片的制作方法，包括以下步骤：

(1)眼球摘取：剪断大动物眼球外附属肌肉，分离出眼球；本实施例以大动物的眼球进行示例说明，大动物为24周流产胎儿，当然也可以采用其他眼球壁厚度较大的大动物眼球，例如兔子眼球、猫眼球、猪眼球、猴子眼球等。

(2)眼球固定：先使用针头在眼球的角膜中央部开设若干个小孔，例如使用33g针头在角膜中央部扎4个小孔，以加速固定液渗透；然后，将分离出的眼球放入预冷至4.0℃的固定液内，放入温度设置为4.0℃的冰箱中固定48小时；所述固定液的组成成分及体积比例如下：4％多聚甲醛溶液：无水乙酸：无水乙醇＝10：2.0：8.0。

(3)眼球视杯的脱水透明：将(2)处理过的眼球依次用下列试剂处理：75％乙醇1h、90％乙醇1h、95％乙醇1h、95％乙醇1h、无水乙醇1h、无水乙醇1h、二甲苯1h、二甲苯1h。

(4)浸蜡包埋；将(3)处理过的眼球依次用下列试剂处理：石蜡2h、石蜡2h；处理后进行石蜡包埋。

(5)切片：按照设定厚度进行切片；设定厚度为4微米，并进行he染色，照相观察。

如图3所示，经过he染色后在显微镜下观察显示，24周流产胎儿眼球各层组织紧密连接、结构平整，细胞形态非常好，排列规则。

最后说明的是，本文应用了具体个例对本发明的原理及实施方式进行了阐述，以上实施例的说明只是用于帮助理解本发明的核心思想，在不脱离本发明原理的情况下，还可对本发明进行若干改进和修饰，这些改进和修饰也落入本发明的保护范围内。