一种Wright-Giemsa染色试剂及其制备方法与流程

本发明涉及化学试剂制备技术领域，具体涉及一种wright-giemsa染色试剂及其制备方法。

背景技术：

血涂片染色在医学检验实验室中应用极广，是观察血细胞形态的重要技术，血涂片染色质量的好坏直接影响血细胞形态的辨认及疾病的诊断。血细胞染色液种类很多，国际血液学标准化委员会(icsh)推荐罗曼诺夫斯基(romanowsky)染色为标准染色法，这种染色液的主要组分为天青b和伊红y，并要求天青b含量应在80％以上，但由于天青b价格很高，romanowsky染色法在各国很难普及。

国内医学检验实验室多采用wright-giemsa染色法主要用于血细胞的染色，还可用于骨髓涂片、阴道分泌物细胞涂片、脱落细胞涂片等的染色。临床上一般购买商品化染色液或自行配置，试剂质量各异，染色效果很难满意。商品化的试剂以珠海baso公司生产的wright-giemsa染液最为常见，在临床检验工作中，珠海baso公司生产的染液主要的染色缺点是：颗粒着色较明显，如中性颗粒增粗、a颗粒粗及多、淋巴细胞及单核细胞易见颗粒；胞浆偏蓝，有的细胞边缘易出现红色。

综上所述，现有技术的染色试剂也存在着制备成本高，染色偏碱，染色时间长，颗粒着色不明显或看不到颗粒的缺陷，亟待进一步改进。

技术实现要素：

本发明实施例的目的在于提供一种wright-giemsa染色试剂及其制备方法，用以解决现有染液着染色偏碱，染色时间长，颗粒着色不明显或看不到颗粒以及成本高的问题。

为实现上述目的，本发明实施例提供一种wright-giemsa染色试剂，所述wright-giemsa染色试剂由第一wright-giemsa染液和第二wright-giemsa染液混合而成，其中，所述第二wright-giemsa染液包括以下质量份数的组分，wright染料10-20份、giemsa染料1-5份、甲醇4000-5000份。

优选的，所述第二wright-giemsa染液还包括甘油。

优选的，所述第二wright-giemsa染液包括以下质量份数的组分，wright染料12-15份、giemsa染料2-4份、甘油1-5份、甲醇4500-4800份。

优选的，所述第二wright-giemsa染液包括以下质量份数的组分，wright染料10份、giemsa染料2份、甘油3份、甲醇5000份。

优选的，所述第一wright-giemsa染液为成品wright-giemsa染液。

优选的，所述第一wright-giemsa染液和所述第二wright-giemsa染液的混合比例为1：2。

本发明实施例还提供一种制备所述的wright-giemsa染色试剂，先制备第二wright-giemsa染液：

按照配比取wright染料、giemsa染料、甲醇、甘油；

将wright染料和giemsa染料粉碎形成混合物粉末，然后加入甘油，直至无粉末颗粒沉淀，形成混合液，静置12-16小时；

将所述混合液中，加入甲醇，研磨至数次至甲醇用完，形成第二wright-giemsa染液；

再将第一wright-giemsa染液与第二wright-giemsa染液混合形成wright-giemsa染色试剂。

所述第二wright-giemsa染液每天振荡1-3min。

优选的，所述混合液静置12-16小时后，再研磨20-80分钟。

本发明实施例具有如下优点：

本发明实施例通过将成品basowright-giemsa染液与本发明实施例的basowright-giemsa染液进行混合，得到新的wright-giemsa染液，其具有着色明显，染色效果好，染出的细胞分辨率好，制备简单，成本低的优点。

附图说明

图1为本发明实施例提供的对比例中涂片的染色显微镜照片图。

图2为本发明实施例的wright-giemsa染色试剂涂片的染色显微镜照片图。

具体实施方式

以下由特定的具体实施例说明本发明的实施方式，熟悉此技术的人士可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点及功效。

本发明实施例中，第一wright-giemsa染液为成品wright-giemsa染液。具体的，第一wright-giemsa染液为珠海贝索生物技术有限公司(baso)生产的wright-giemsa染液。

本发明实施例提供一种wright-giemsa染色试剂，wright-giemsa染色试剂由第一wright-giemsa染液和第二wright-giemsa染液混合而成，其中，第二wright-giemsa染液包括以下质量份数的组分，wright染料10-20份、giemsa染料1-5份、甲醇4000-5000份。第二wright-giemsa染液还包括甘油。较佳的，其中，第二wright-giemsa染液包括以下质量份数的组分，wright染料12-15份、giemsa染料2-4份、甘油1-5份、甲醇4500-4800份。

本发明的实施例将珠海贝索baso生产的wright-giemsa染液与本发明实施例提供的wright-giemsa染液以一定比例的混合，达到涂片染色效果好，容易辨析各个结构，且成本低的优点。

实施例1

本发明实施例中，第二wright-giemsa染液包括以下质量份数的组分，wright染料10份、giemsa染料1份、甘油1份、甲醇4000份。

本发明实施例中，第二wright-giemsa染色试剂的制备过程为，按照配比取wright染料、giemsa染料、甲醇、甘油；

将wright染料和giemsa染料粉碎形成混合物粉末，然后加入甘油，直至无粉末颗粒沉淀，形成混合液，静置12-16小时，再研磨20分钟；

将混合液中，加入甲醇，研磨至数次至甲醇用完，第二wright-giemsa染液每天振荡1-3min，形成第二wright-giemsa染液；

将第一wright-giemsa染液与本发明实施例制备的第二wright-giemsa染液按照体积比1:2充分混合形成wright-giemsa染色试剂。

实施例2

本发明实施例中，第二wright-giemsa染液包括以下质量份数的组分，wright染料20份、giemsa染料5份、甘油5份、甲醇5000份。

本发明实施例中，第二wright-giemsa染色试剂的制备过程为，按照配比取wright染料、giemsa染料、甲醇、甘油；

将wright染料和giemsa染料粉碎形成混合物粉末，然后加入甘油，直至无粉末颗粒沉淀，形成混合液，静置12-16小时，再研磨30分钟；

将混合液中，加入甲醇，研磨至数次至甲醇用完，第二wright-giemsa染液每天振荡1min，形成第二wright-giemsa染液；

将第一wright-giemsa染液与本发明实施例制备的第二wright-giemsa染液按照体积比1:2充分混合形成wright-giemsa染色试剂。

实施例3

本发明实施例中，第二wright-giemsa染液包括以下质量份数的组分，wright染料15份、giemsa染料2份、甘油3份、甲醇4500份。

本发明实施例中，第二wright-giemsa染色试剂的制备过程为，按照配比取wright染料、giemsa染料、甲醇、甘油；

将wright染料和giemsa染料粉碎形成混合物粉末，然后加入甘油，直至无粉末颗粒沉淀，形成混合液，静置10小时，再研磨40分钟；

将混合液中，加入甲醇，研磨至数次至甲醇用完，第二wright-giemsa染液每天振荡1min，形成第二wright-giemsa染液；

将第一wright-giemsa染液与本发明实施例制备的第二wright-giemsa染液按照体积比1:2充分混合形成wright-giemsa染色试剂。

实施例4

本发明实施例中，第二wright-giemsa染液包括以下质量份数的组分，wright染料16份、giemsa染料3份、甘油4份、甲醇4600份。

本发明实施例中，第二wright-giemsa染色试剂的制备过程为，按照配比取wright染料、giemsa染料、甲醇、甘油；

将wright染料和giemsa染料粉碎形成混合物粉末，然后加入甘油，直至无粉末颗粒沉淀，形成混合液，静置11小时，再研磨40分钟；

将混合液中，加入甲醇，研磨至数次至甲醇用完，第二wright-giemsa染液每天振荡2min，形成第二wright-giemsa染液；

将第一wright-giemsa染液与本发明实施例制备的第二wright-giemsa染液按照体积比1:2充分混合形成wright-giemsa染色试剂。

实施例5

本发明实施例中，第二wright-giemsa染液包括以下质量份数的组分，wright染料19份、giemsa染料4份、甘油4份、甲醇4800份。

本发明实施例中，第二wright-giemsa染色试剂的制备过程为，按照配比取wright染料、giemsa染料、甲醇、甘油；

将wright染料和giemsa染料粉碎形成混合物粉末，然后加入甘油，直至无粉末颗粒沉淀，形成混合液，静置12小时，再研磨50分钟；

将混合液中，加入甲醇，研磨至数次至甲醇用完，第二wright-giemsa染液每天振荡3min，形成第二wright-giemsa染液；

将第一wright-giemsa染液与本发明实施例制备的第二wright-giemsa染液按照体积比1:2充分混合形成wright-giemsa染色试剂。

上述实施例1至实施例5中制备的wright-giemsa染色试剂，需要密闭避光保存，一般的密闭保存3个月以上使用。

本发明实施例1-5中的第二wright-giemsa染液是通过购买各个组分进行配置而成，而第一wright-giemsa染液是购买的成品wright-giemsa染液。

对比例

1、准备涂片；

2、加入成品的珠海baso生产的wright-giemsa染色试剂，在涂片上滴加1滴wright-giemsa染色试剂，让人色液覆盖整个涂片膜，静置0.5-1min；

3、加入磷酸盐缓冲液，加入比例为wright-giemsa染色试剂的2-3倍，用洗耳球吹气混匀，染色静置5-10min，染色时间以低倍镜下观看有核细胞染色程度判断，待低倍镜下观察染色良好后，直接用水流冲洗，注意不要先倒掉人色液再冲洗；

4、显微镜下观察染色效果，如图1所示。

试验例

1、准备涂片；

2、加入本发明实施例的wright-giemsa染色试剂，在涂片上滴加1滴wright-giemsa染色试剂，让人色液覆盖整个涂片膜，静置0.5-1min；

3、加入磷酸盐缓冲液，加入比例为wright-giemsa染色试剂的2-3倍，用洗耳球吹气混匀，染色静置5-10min，染色时间以低倍镜下观看有核细胞染色程度判断，待低倍镜下观察染色良好后，直接用水流冲洗，注意不要先倒掉人色液再冲洗；

4、显微镜下观察染色效果，如图2所示。

如图1和图2所示，对比例中basowright-giemsa染液染色涂片，和本发明实施例的染色涂片的试验效果，使用本发明实施例的得到的wright-giemsa染液能呈现出清晰的细胞染色效果，细胞的胞浆、胞核、颗粒等均能获得满意的染色效果，染出的细胞分辨率好；并且本发明实施例的配方简单、成本低廉、非常有利于临床检验实验室推广。本发明实施例的wright-giemsa染液染色时间短。

虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施例对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。