一种测定尿液中8-异构前列腺素F2α的装置和方法与流程

本发明涉及一种测定装置，尤其是一种测定尿液中8-异构前列腺素f2α的装置，还涉及测定方法，属于分析仪器领域。
背景技术：
：氧化应激是指体内氧化与抗氧化作用失衡，由自由基在体内产生倾向于氧化的一种负面作用，会导致中性粒细胞炎性浸润，蛋白酶分泌增加，产生大量氧化中间产物。在生物体内，由于自由基和其它高活性化学物质浓度低且寿命短,很难直接测定。因此，通过分析自由基、活性物质、氧化应激、自旋捕捉、dna标志物、脂质和蛋白质氧化应激、细胞荧光探针等检测方法在定性检测体内、体外活性物质和氧化损伤中可能出现错误和人为影响因素。8-羟基异构前列腺素f2α是代表性的氧化应激的重要生物标志物，其含量对于评估体内氧化损伤程度以及研究疾病病理过程都有重要作用。目前，8-异构前列腺素f2α可采用酶联免疫法、gc-ms和hplc/ms/ms进行分析。hplc-ms/ms法具有较好的灵敏度和选择性，适宜于8-异构前列腺素f2α的分析。由于尿样中该化合物含量较低，又存在有其他结构类似的化合物，样品通常是需要固相萃取或是液液萃取-固相萃取相结合的方式进行净化，浓缩后进行定量；样品前处理过程需多次转移，不但操作麻烦，而且引入分析误差的因素多。另一方面，尿样品基质背景复杂，采用hplc/ms/ms分析时，样品的基质效应也会影响分析结果。因此寻找一种有效、可靠、方便的方法测定8-羟基异构前列腺素f2α的含量，以此来评估卷烟烟气暴露对氧化应激的影响，是十分必要的。技术实现要素：本发明的目的是为了解决现有技术的不足，提供一种吸烟者尿液中8-异构前列腺素f2α测定装置和方法，该方法能满足吸烟者尿液中8-异构前列腺素f2α快速、准确测定的要求，为卷烟烟气暴露对氧化应激的影响评价提供了科学、简便的新方法。除非另有说明，本发明所采用的百分数均为质量百分数。为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：一种测定尿液中8-羟基异构前列腺素f2α的装置，所述的装置包括带进样口的六通阀、进样器、富集泵、分析泵、检测器、在线固相萃取柱、分析柱和色谱工作站；带进样口的六通阀用于固相萃取柱和分析柱之间的切换；固相萃的固相萃取材料为氧化石墨烯键合硅胶；样品富集时，待测样品从进样器进入到分析系统中，通过富集泵输送由带进样口六通阀的第七进样口进入，从第四口流出通过固相萃取柱，待测成分富集在固相萃取柱上，再经第一口和第六口排到废液中；在该状态下，分析泵的流动相由六通阀的第二口进入，从第四口流出；样品分析时，样品富集完后，通过六通阀切换，富集泵的流动相由六通阀的第五口排出，分析泵的流动相则由六通阀的第二口进，第一口流出，流经固相萃取柱，和样品富集相反的流向把固相萃取柱上富集的待分析成分洗脱下，并从第四口和第三口流出，流经分析柱分离，再通过检测器检测测定样品中待分析成分含量。本发明涉及的一种尿液中8-异构前列腺素f2α的测定方法，包括如下步骤：步骤（1），在制备好的样品进样后，用富集泵输送通过氧化石墨烯键合硅胶固相萃取柱富集，富集完后继续用2.0ml的流动相洗涤固相萃取组；步骤（2），样品富集完后，通过六通阀切换，用分析泵输送流动相，从和样品富集相反的流向洗脱固相萃取柱，洗脱下来的成分流经分析柱分离，再通过检测器检测测定样品中待分析成分含量；在线固相萃取装置样品富集和样品分析均为独立的管路，互不交叉，色谱分析和固相萃取富集同时进行。进一步地，步骤（1）中，样品的制备过程如下：取7.5ml采集的吸烟者尿液样品，加入内标工作液200µl，用甲醇定容到10ml；充分摇匀，在20h内带回到实验室，20000r/min高速离心10min；取上层清液约5.0ml，用0.25µm的针头过滤器过滤，供在线固相萃取富集用。进一步地，内标为氘带8-异构前列腺素f2α。进一步地，过柱介质为25%的甲醇，富集完成后继续用1.5-4.0ml的流动相洗涤样品，富集泵的流速为1.0ml/min；进样量为0.5~2.0ml。进一步地，超高效液相色谱质谱分析条件如下：色谱柱：watersacquityuplcbeh-c18，2.1*30mm，1.7µm；流动相：内含0.1%的乙酸铵的45%的甲醇，流速0.6ml/min；质谱条件如下：气体为高纯氮气；电喷雾离子源负离子扫描；多重反应检测；电喷雾电压为4500v，离子源温度：500℃；辅助气gas1压力为60psi，辅助气gas2压力为80psi，气帘气压力为20psi，碰撞气压为8psi；8-异构前列腺素f2α检测离子对为353.30/193.10，氘带内标检测离子对为357.30/197.10，离子驻留监测时间为100ms；去簇电压：80v，入口电压：10v，碰撞能量：30v，碰撞池出口电压：15v。本发明的进样器为液相色谱大体积进样器，进样量为0.01~5.0ml；富集泵为普通液相色谱泵，能够承受400bar的压力；分析泵为超高效液相色谱二元泵；可进行梯度洗脱；能够承受1200bar的压力；检测器为三重四级杆串联质谱，所述质谱电离源为电喷雾电离源；固相萃取柱规格为2.1*8mm，柱中装填的固相萃取材料为氧化石墨烯键合硅胶(go@sio2)，粒径为5.0µm；色谱柱为watersacquityuplcbeh-c18(2.1*30mm,1.7µm)；色谱工作站能同时控制所连接部件，实现固相萃取柱和分析柱之间的在线切换，以及样品分析数据的采集。具体分析过程如下：a、标准工作液的配制本发明中的标准品8-异构前列腺素f2α和内标物d4-8-异构前列腺素f2α购于美国(caymanchemicalco.)，纯度≥98%。先把标准品和内标物用甲醇配成浓度分别为1.0µg/ml的标准储备液和内标储备液。再把标准储备液和内标储备液用含25%甲醇的实际尿液逐级稀释，配成标准品浓度分别为5、20、100、200、500、1000、2000pg/ml，内标物浓度均为200pg/ml的系列标准工作液，供工作曲线用。最后，把内标储备液用甲醇逐级稀释，配成浓度分别为1.0ng/ml的内标工作液。、分析样品制备取7.5ml采集的吸烟者尿液样品，加入内标工作液200µl，用甲醇定容到10ml；充分摇匀，在20h内带回到实验室，20000r/min高速离心10min；取上层清液约5.0ml，用0.25µm的针头过滤器过滤，供在线固相萃取富集用。在本发明中，采用了氘带8-异构前列腺素f2α作为内标物，并且在样品采样时就加入内标物，内标法的使用可有效扣除样品储存、运输、前处理等过程中带来引入的误差，获得的分析结果更可靠。、固相萃取柱材料的选择和固相萃取柱的制备8-异前列腺素f2α的固相萃取净化一般采用反相固相萃取，本发明中比较了c-18、聚苯乙烯反相树脂、石墨化炭黑球、hilic、氧化石墨烯键合硅胶等固相萃取材料的萃取效果，发现氧化石墨烯键合硅胶对极性分子的8-羟基异构前列腺素f2α有很好的富集效果，能选择性吸附8-羟基异构前列腺素f2α，洗脱可逆性高，而且对尿液样品中糖类、蛋白质、尿酸、尿素、无机盐等含量大的成分具有很好的分离、净化效果，可有效避免常规固相萃取净化过程中尿液样品蛋白质等杂质残留而堵塞固相萃取柱和色谱柱的问题。本发明选择氧化石墨烯键合硅胶作为8-羟基异构前列腺素f2α的固相萃取材料。氧化石墨烯键合硅胶的制备方法：准确称取石墨烯和硝酸钠各50g，充分研磨后加入到10l的圆底烧瓶中。圆底烧瓶置于冰浴中，在搅拌条件下缓慢加入98%浓硫酸500ml，充分搅拌至均匀。然后缓慢加入充分研磨的高锰酸钾粉末，直至颜色变为墨绿色。然后将圆底烧瓶置于40℃水浴锅中搅拌下反应2-3h，当混合物变成粘稠状时，缓慢加入400ml超纯水，并将水浴温度升高至90℃，继续反应40min。然后在混合液中加入5l超纯水，然后逐滴加入300ml30%的过氧化氢继续反应2h。反应完成后，将反应液倒入10l的纯净水中，离心收集沉淀物，并用纯净水洗涤至中性，真空干燥可得氧化石墨烯。以n,n-二环己基碳二亚胺为偶联剂，通过氧化石墨烯表面的羧基与氨基化硅球表面的氨基反应键合，合成氧化石墨烯键合硅胶。6.0g的氧化石墨烯分散至750mldmf溶液中超声30min分散，然后加入6.0gn,n-二环己基碳二亚胺和100g氨基化硅球(粒径为5µm)，并于60℃水浴中快速搅拌下反应24h。反应结束后10000rpm离心10min收集沉淀，并用纯水和甲醇多次洗涤以除杂质，80℃烘干。得到氧化石墨烯键合硅胶。固相萃取柱装填：所得到氧化石墨烯键合硅胶填料采用匀浆装柱法，装入不锈钢固相萃取柱套(2.1*8mm)中，即可得到本发明的固相萃取柱。所述固相萃取柱在本发明方法的流动相条件下稳定，吸附和洗脱可逆，可多次重复使用。在线固相萃取富集条件氧化石墨烯键合硅胶为反相固相萃取材料，一般以水-极性有机溶剂(甲醇、乙腈、乙醇等)为介质过柱，本发明中对过柱介质进行了选择，结果表明用25%的甲醇为介质过柱，不但8-异构前列腺素f2α的富集效果好，而且样品净化效果好。因此，本发明选择25%甲醇介质过柱，富集泵输送样品通过固相萃取柱的流动相也为25%甲醇。实验表明：固相萃取柱富集完成后，继续用流动相洗涤可提升样品的净化效果，而且洗涤液体积在1.5~4.0ml范围对固相萃取的回收率没有影响，本发明选择富集完成后继续用2.0ml的流动相洗涤样品。富集泵的流速(即输送样品通过固相萃取柱的流速)对分析结果无显著影响，但流速太慢，样品富集需要的时间长；流速过高，色谱系统的反压大，固相萃取材料的使用寿命会缩短；因此，综合效果和时间考虑，本发明中选择富集泵的流速为1.0ml/min。本发明中采用实际尿液加标(加标浓度为2.0µg/ml)样品过柱的方法，测试了固相萃取柱的萃取容量，结果表明：过柱样品的体积在25ml以下，待测成分和内标均不会穿漏，加标样品的回收率在96.7%以上。在实际样品分析时，样品进样量越大，分析灵敏度越高，但在本发明中进样量在0.5~2.0ml范围内灵敏度即能满足实际样品分析的要求。因此，本发明选择样品进样量为0.5~2.0ml(视实际样品情况确定)。由于实际样品分析的进样量和浓度远小于萃取容量测试的进样量和浓度，在实际样品分析过程中，0.5~2.0ml的进样量不会超过固相萃取柱的萃取容量。、色谱、质谱分析条件的选择在线固相萃取富集完成后，通过六通阀切换，分析泵的流动相可把固相萃取柱上富集的8-异构前列腺素f2α洗脱下来，并通过分析柱分离。由于本发明中待测成分8-异构前列腺素f2α为极性化合物，选择watersacquityuplcbeh-c18(2.1*30mm,1.7µm)超高效液相色谱柱为分析柱。在选定色谱柱的情况下，进一步对分析泵的流动相条件就行了优化，结果表明：用45%的甲醇(内含0.1%的乙酸铵)为流动相，流速0.6ml/min，能把8-异构前列腺素f2α从固相萃取柱上洗脱下来，并能在分析柱上和干扰成分较好地分离，而且样品分析时间短，每个样品的分析周期只需5.0min，因此，本发明选用该流动相条件。本发明中质谱检测器为美国应用生物公司api-4000，通过针泵进样对质谱条件进行了优化，优化后选定的质谱条件为：气体为高纯氮气，选用电喷雾离子源负离子扫描，多重反应检测；电喷雾电压为4500v，离子源温度：500℃；辅助气gas1压力为60psi，辅助气gas2压力为80psi，气帘气压力为20psi，碰撞气压为8psi。8-异构前列腺素f2α检测离子对为353.30/193.10，氘带内标检测离子对为357.30/197.10，离子驻留监测时间为100ms。去簇电压(dp)为80v，入口电压(ep)为10v，碰撞能量(ce)为30v，碰撞池出口电压(cxp)为15v。在选定色谱、质谱条件下，尿液样品和内标的典型选择离子色谱图见图-2。、样品分析流程的确定在上述条件优化的基础上，确定了样品的分析流程。制备好的样品进样0.5~2.0ml，用富集泵以25%甲醇为流动相，1.0ml/min流速输送通过固相萃取柱，时间持续2.5~4.0min(包含了用2.0ml的流动相洗涤)。样品富集完后，通过六通阀切换，用分析泵以45%甲醇(内含0.1%的乙酸铵)为流动相，0.6ml/min的流速，从和样品富集相反的流向洗脱固相萃取柱，洗脱下来的成分流经分析柱分离(watersacquityuplcbeh-c18)，再通过检测器检测测定样品中待分析成分含量，色谱分析时间为6.0min。本发明在线固相萃取装置样品富集和样品分析均为独立的管路，互不交叉，可色谱分析和固相萃取富集同时进行。即在样品色谱分析的过程中，可进行下一个样品的富集，色谱分析完成后，下一个样品的固相萃取富集也同时完成，立即可进行色谱分析。和常规在线固相萃取分析方法相比，有效缩短了分析时间。、工作曲线、检测限和定量限为了进一步消除基质效应的干扰，除了采用同位素内标外，还采用在实际尿液样品中加标的方法制作工作曲线。即在实际尿液样品中加入不同浓度梯度的待测成分标准，通过“加标样品峰面积减去空白峰面积，再除以内标峰面积”与对应的浓度进行回归制作工作曲线；在制作工作曲线的过程中保持了工作曲线的基质和实际样品基质完全一致，有效避免了样品基质的干扰。在选定实验条件下，线性回归方程为a=1.028c+0.0102，相关系数r=0.9996，线性关系良好。将最低浓度的标准工作液再稀释后，以信噪比(s/n)=3和s/n=10时，对应的样品浓度计算检出限和定量限，本发明中方法的检出限和定量限(进样体积1.0ml)分别为0.82pg/ml和2.4pg/ml，本发明方法具有很高的灵敏度。、方法的回收率和精密度为验证方法的精密度和回收率，按标准曲线浓度范围在实际尿液样品中加入已知量的对照品贮备液，加入量设置高(500pg/ml)、中(200pg/ml)、低(80pg/ml)3个浓度水平，每一浓度分别进样测定7次，连续测定7d，计算回收率及日内相对标准偏差、日间相对标准偏差。本发明方法的日内回收率在92.2%～101.5%之间，日内相对标准偏差在2.8～3.2%之间；日间回收率在91.4%～97.5%之间，日间相对标准偏差在3.1～3.8%之间。说明方法具有较好的回收率和精密度。与现有技术相比，本发明具有如下优点：a、本发明针对8-异前列腺素f2α在尿液样品中含量低、尿液样品基质复杂的特点，采用在线固相萃取富集测定8-异前列腺素f2α，实现了样品在富集柱上高倍数富集，在色谱峰没有明显变宽的前提下使样品进样量提高近三个数量级，方法的分析灵敏度大大提高，可准确测定尿液样品中pg/ml数量级的8-异前列腺素f2α。b、本发明在线固相萃取装置样品富集和样品分析均为独立的管路，互不交叉，可色谱分析和固相萃取富集同时进行。即在样品色谱分析的过程中，可进行下一个样品的富集，色谱分析完成后，下一个样品的固相萃取富集也同时完成，立即可进行色谱分析。和常规在线固相萃取分析方法相比，有效缩短了分析时间。c、本发明首次采用氧化石墨烯键合硅胶对极性分子8-羟基异构前列腺素f2α进行固相萃取富集。该材料对8-羟基异构前列腺素f2α有很好的富集效果，能选择性吸附8-羟基异构前列腺素f2α，洗脱可逆性高，而且对尿液样品中糖类、蛋白质、尿酸、尿素、无机盐等含量大的成分具有很好的分离、净化效果，可有效避免常规固相萃取净化过程中尿液样品蛋白质等杂质残留而堵塞固相萃取柱和色谱柱的问题。d、本发明采用了氘带8-异构前列腺素f2α作为内标物，并且在样品采样时就加入内标物，可有效扣除样品储存、运输、前处理等过程引入的误差，获得的分析结果更可靠。e、本发明采用与样品富集相反的流向洗脱固相萃取柱，超高效液相色谱分析8-异构前列腺素f2α。采用和样品富集相反的流向洗脱可有效缩短洗脱路径，避免色谱峰扩宽；采用超高效液相色谱分析可有效缩短样品的分析时间，提高分析灵敏度。f、本发明采用在实际尿液样品中加标的方法制作工作曲线。即在实际尿液样品中加入不同浓度梯度的待测成分标准品，通过“加标样品峰面积减去空白峰面积，再除以内标峰面积”与对应的浓度进行回归制作工作曲线。在制作工作曲线的过程中保持了工作曲线的基质和实际样品基质完全一致，有效避免了样品基质对质谱离子化效率的影响，能获得更准确、可靠的分析结果。附图说明图1为本发明的样品富集状态下的装置的结构示意图；图2为本发明的样品分析状态下的装置的结构示意图；图3为实施例1的尿液样品和内标的典型选择离子色谱图，其中：a、样品；b、内标。具体实施方式下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有付出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。实施例1如图1所示，本实施例的测定尿液中8-羟基异构前列腺素f2α的装置，所述的装置包括带进样口的六通阀7、进样器6、富集泵5、分析泵2、检测器4、在线固相萃取柱1、分析柱3和色谱工作站。带进样口的六通阀7设有七个口，分别为第一口至第七口。检测器4与分析柱3一端连接，分析柱3另一端与第三口连接，分析泵2与第二口连接，富集泵5与进样器6连接，进样器6与第七口连通。带进样口的六通阀7用于固相萃取柱1和分析柱3之间的切换；固相萃的固相萃取材料为氧化石墨烯键合硅胶。样品富集时，待测样品从进样器6进入到本装置中，通过富集泵5输送由带进样口六通阀的第七进样口进入，从第四口流出通过固相萃取柱1，待测成分富集在固相萃取柱1上，再经第一口和第六口排到废液中；在该状态下，分析泵2的流动相由六通阀7的第二口进入，从第四口流出。如图2所示，样品分析时，样品富集完后，通过六通阀切换，富集泵5的流动相由六通阀的第五口排出，分析泵2的流动相则由六通阀的第二口进，第一口流出，流经固相萃取柱3，和样品富集相反的流向把固相萃取柱3上富集的待分析成分洗脱下，并从第四口和第三口流出，流经分析柱3分离，再通过检测器检测测定样品中待分析成分含量。本实施例基于上述装置的尿液中8-异构前列腺素f2α的测定方法，按以下进行：测试样品为非吸烟者尿液样品。取7.5ml采集的吸烟者尿液样品，加入内标工作液200µl，用甲醇定容到10ml；充分摇匀，在20h内带回到实验室，20000r/min高速离心10min；取上层清液约5.0ml，用0.25µm的针头过滤器过滤，供在线固相萃取富集用。样品进样量为2.0ml，进样后由富集泵以25%甲醇为流动相，1.0ml/min流速输送通过固相萃取柱富集。样品完全通过固相萃取柱后再继续输送2.0ml流动相洗涤固相萃取柱。在线固相萃取富集、洗涤完成后，通过六通阀切换，通过分析泵以45%甲醇(内含0.1%的乙酸铵)为流动相，流速0.6ml/min，从样品富集相反的流向，把待测成分8-异构前列腺素f2α洗脱下来，并通过分析柱[watersacquityuplcbeh-c18(2.1*30mm,1.7µm)超高效液相色谱柱]分离，通过选定的质谱条件检测。样品分析周期为6.0min。分析完后根据样品(待测成分峰面积/内标峰面积)由工作曲线计算得到8-羟基异构前列腺素f2α的含量。该样品中8-羟基异构前列腺素f2α含量为119.2pg/ml。尿液样品和内标的典型选择离子色谱图如图3所示，其中：a、样品；b、内标。实施例2本实施例的装置与实施例1相同。本实施例基于上述装置的尿液中8-异构前列腺素f2α的测定方法，按以下进行：测试样品为轻度吸烟者尿液样品。取7.5ml采集的吸烟者尿液样品，加入内标工作液200µl，用甲醇定容到10ml；充分摇匀，在20h内带回到实验室，20000r/min高速离心10min；取上层清液约5.0ml，用0.25µm的针头过滤器过滤，供在线固相萃取富集用。样品进样量为2.0ml，进样后由富集泵以25%甲醇为流动相，1.0ml/min流速输送通过固相萃取柱富集。样品完全通过固相萃取柱后再继续输送2.0ml流动相洗涤固相萃取柱。在线固相萃取富集、洗涤完成后，通过六通阀切换，通过分析泵以45%甲醇(内含0.1%的乙酸铵)为流动相，流速0.6ml/min，从样品富集相反的流向，把待测成分8-异构前列腺素f2α洗脱下来，并通过分析柱[watersacquityuplcbeh-c18(2.1*30mm,1.7µm)超高效液相色谱柱]分离，通过选定的质谱条件检测。样品分析周期为6.0min。分析完后根据样品(待测成分峰面积/内标峰面积)由工作曲线计算8-羟基异构前列腺素f2α的含量。该样品中8-羟基异构前列腺素f2α含量为164.6pg/ml。实施例3本实施例的装置与实施例1相同。本实施例基于上述装置的尿液中8-异构前列腺素f2α的测定方法，按以下进行：所测试样品为中度吸烟者尿液样品。取7.5ml采集的吸烟者尿液样品，加入内标工作液200µl，用甲醇定容到10ml；充分摇匀，在20h内带回到实验室，20000r/min高速离心10min；取上层清液约5.0ml，用0.25µm的针头过滤器过滤，供在线固相萃取富集用。样品进样量为1.5ml，进样后由富集泵以25%甲醇为流动相，1.0ml/min流速输送通过固相萃取柱富集。样品完全通过固相萃取柱后再继续输送2.0ml的流动相洗涤固相萃取柱。在线固相萃取富集、洗涤完成后，通过六通阀切换，通过分析泵以45%甲醇(内含0.1%的乙酸铵)为流动相，流速0.6ml/min，从样品富集相反的流向，把待测成分8-异构前列腺素f2α洗脱下来，并通过分析柱[watersacquityuplcbeh-c18(2.1*30mm,1.7µm)超高效液相色谱柱]分离，通过选定的质谱条件检测。样品分析周期为6.0min。分析完后根据样品(待测成分峰面积/内标峰面积)由工作曲线计算得到8-羟基异构前列腺素f2α的含量。该样品中8-羟基异构前列腺素f2α含量为186.6pg/ml。实施例4本实施例的装置与实施例1相同。本实施例基于上述装置的尿液中8-异构前列腺素f2α的测定方法，按以下进行：所测试样品为重度吸烟者尿液样品。取7.5ml采集的吸烟者尿液样品，加入内标工作液200µl，用甲醇定容到10ml；充分摇匀，在20h内带回到实验室，20000r/min高速离心10min；取上层清液约5.0ml，用0.25µm的针头过滤器过滤，供在线固相萃取富集用。样品进样量为1.0ml，进样后由富集泵以25%甲醇为流动相，1.0ml/min流速输送通过固相萃取柱富集。样品完全通过固相萃取柱后再继续输送2.0ml的流动相洗涤固相萃取柱。在线固相萃取富集、洗涤完成后，通过六通阀切换，通过分析泵以45%甲醇(内含0.1%的乙酸铵)为流动相，流速0.6ml/min，从样品富集相反的流向，把待测成分8-异构前列腺素f2α洗脱下来，并通过分析柱[watersacquityuplcbeh-c18(2.1*30mm,1.7µm)超高效液相色谱柱]分离，通过选定的质谱条件检测。样品分析周期为6.0min。分析完后根据样品(待测成分峰面积/内标峰面积)由工作曲线计算8-羟基异构前列腺素f2α的含量。该样品中8-羟基异构前列腺素f2α含量为240.3pg/ml。实际样品分析总结除了实施例1-4的情形，我们按建立的方法分析12名吸烟志愿者(每天抽吸：重度25-50支、中度15-25支、轻度5-15支)8-异构前列腺素f2α含量，并以不吸烟者为对照，所有结果见表-1。从表-1结果可看出，吸烟者尿液中的8-异构前列腺素f2α和吸烟量有一定相关性。顺序为：重度吸烟者>中度吸烟者>轻度吸烟者>不吸烟者。通过8-异构前列腺素f2α的测定可初步判断人体卷烟烟气暴露水平。表1、吸烟者尿液中的8-异构前列腺素f2α测定结果样品测定值(pg/ml)样品测定值(pg/ml)重度吸烟者-1224.0轻度吸烟者-1164.6重度吸烟者-2235.8轻度吸烟者-2158.0重度吸烟者-3240.3轻度吸烟者-3145.9中度吸烟者-1194.7不吸烟者-1126.4中度吸烟者-2190.8不吸烟者-2119.2中度吸烟者-3186.6不吸烟者-3130.5以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。当前第1页1 2 3