技术领域：
本发明涉及一种诊断牛亚急性瘤胃酸中毒的方法，具体涉及一种利用尿钙、尿ph、粪便酸性洗涤纤维诊断牛亚急性瘤胃酸中毒的方法。
背景技术：
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畜牧业作为农业农村经济的重要支柱产业之一，是实现“乡村振兴”和“脱贫攻坚”的重要抓手，关系到粮食安全、食品安全、节能减排、农民就业和国际贸易等农业农村农民的各个方面，是引领中国农业农村实现现代化和可持续发展的基础性和战略性需求。伴随我国奶牛及肉牛行业从传统零散的养殖模式转变为规模化、集约化、标准化养殖模式，以及高产育种选育推广，片面追求高产等因素，导致目前规模化牛场重要群发性普通病高发群发，给养殖业带来巨大经济损失。亚急性瘤胃酸中毒是泌乳期母牛及育肥期肉牛常见的营养代谢病，疾病导致母牛产奶量降低、肉牛育肥效益低下、死淘率增加、易于继发蹄叶炎等，给养牛业造成了严重的经济损失。目前亚急性瘤胃酸中毒诊断的金标准依然是穿刺瘤胃，检测瘤胃液ph，而上述诊断方法极易造成牛瘤胃损伤、造成牛群应激，不利于牛群疾病的群体检测，导致牛群亚急性瘤胃酸中毒诊断难的现状。本发明拟通过检测分析亚急性瘤胃酸中毒奶牛尿液及粪便成分特征，进而建立一种利用尿液和粪便指标诊断牛亚急性瘤胃酸中毒的方法。
技术实现要素：
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本发明的目的是为了克服上述现有技术存在的不足之处，而提供一种利用尿钙、尿ph、粪便酸性洗涤纤维诊断牛亚急性瘤胃酸中毒的方法。
本发明所采用的技术方案是：一种利用尿钙、尿ph、粪便酸性洗涤纤维诊断牛亚急性瘤胃酸中毒的方法，其中尿钙、尿ph、粪便酸性洗涤纤维均与牛亚急性瘤胃酸中毒密切相关，应用尿成分检测试剂盒测定牛尿钙、尿ph，用近红外法分析仪检测粪便酸性洗涤纤维含量，统计学分析表明尿钙、尿ph、粪便酸性洗涤纤维与牛亚急性瘤胃酸中毒的发生呈极显著负相关(p<0.01)，当尿钙<0.71mmol/l、尿ph<8.35或粪酸性洗涤纤维<29.95％时，可诊断奶牛患有亚急性瘤胃酸中毒。
上述方案中实验动物数量，检测指标尿钙、尿ph值、粪便酸性洗涤纤维均具有统计学意义。对亚急性瘤胃酸中毒组与健康组牛实验数据进行独立样本t检验，结果表明亚急性瘤胃酸中毒组牛尿钙极显著的低于健康组(p<0.01)，尿ph值、粪便酸性洗涤纤维极显著的低于健康组(p<0.01)。对实验数据进行person相关性分析发现尿钙、尿ph、粪便酸性洗涤纤维含量与亚急性瘤胃酸中毒均呈极显著负相关(p<0.01)。对实验数据进行roc曲线预警分析，尿钙、尿ph、粪酸性洗涤纤维曲线下面积分别为0.826、0.974、0.965，表明尿中尿钙、尿ph、粪酸性洗涤纤维对牛亚急性瘤胃酸中毒具有较好的预警作用。当尿钙<0.71mmol/l时诊断牛患有亚急性瘤胃酸中毒的敏感度83.33％，特异性70.00％；当尿ph<8.35时诊断牛患有亚急性瘤胃酸中毒的敏感度87.50％，特异性95.00％；当粪中酸性洗涤纤维<29.95％时诊断牛患有亚急性瘤胃酸中毒的敏感度100.00％，特异性81.82％。
本发明具有的有益效果是：本发明基于上述背景通过对亚急性瘤胃酸中毒牛与健康牛尿钙、尿ph、粪酸性洗涤纤维含量进行person相关性分析与roc曲线分析，确定当尿钙<0.71mmol/l、尿ph<8.35或粪中酸性洗涤纤维<29.95％可诊断牛患有亚急性瘤胃酸中毒，此方法可以非侵入性的群体监测牛群亚急性瘤胃酸中毒发病情况，为疾病的防控提供有效的技术支持，有效减少牧场经济损失。
具体实施方式：
下面结合实验对本发明进一步说明：
实施例
动物实验：于黑龙江省某采用自由卧栏、tmr(totalmixedrations全混合日粮)饲喂、年产奶量11.5吨的集约化奶牛养殖场随机选取2～3胎次产后7-14天新西兰荷斯坦奶牛44头，依据采食后6h瘤胃液ph值将其分为将其分为亚急性瘤胃酸中毒组(5.2<ph<5.8)及健康组(ph>6.2，无其他任何症状)，其中健康组24头，亚急性瘤胃酸中毒组20头。采集实验奶牛尿液与粪便。
粪便：从直肠中收集新鲜粪便200g，样品主要用于检测干物质(105℃)、酸性洗涤纤维(adf)、粗蛋白、粗脂肪、淀粉，所有检测指标均使用近红外法分析检测。
尿液：阴道按摩法收集奶牛排尿中间的尿液50ml，利用尿成分检测试剂盒检测尿ca、肌酐(crea)、尿素(bun)、尿酸(ua)、尿蛋白定量、ph。
数据分析：所有数据应用ibmspss19.0软件进行统计分析，计量资料用均数以x±s表示,采用独立样本t检验分析组间均值差异显著性；采用pearson直线相关性分析各指标与亚急性瘤胃酸中毒相关性，p<0.01为极显著相关；采用roc曲线分析显著性指标的预警值，曲线下面积大于0.5表示指标具有预警意义，在0.7～0.9之间表示具有一般的预警作用，大于0.9可以作为金指标进行诊断。
实验结果：结果如表1所示，亚急性瘤胃酸中毒奶牛尿液ca、ph极显著低于健康组，ua、upro水平显著高于健康组。结果如表2所示，亚急性瘤胃酸中毒奶牛粪便酸性洗涤纤维(adf)极显著低于健康组，粗蛋白水平显著高于健康组。
表1健康与亚急性瘤胃酸中毒奶牛尿生化指标差异性比较
表2健康与亚急性瘤胃酸中毒奶牛粪便成分差异性比较
表3亚急性瘤胃酸奶牛显著相关性指标
采用pearson直线相关性分析各指标与亚急性瘤胃酸中毒相关性，结果如表3所示，奶牛尿ca、尿ph、粪adf结果与亚急性瘤胃酸中毒存在极显著负相关(p<0.01)。
利用roc曲线分析尿钙、尿ph、粪酸性洗涤纤维指标对牛亚急性瘤胃酸中毒的预警作用，结果如表4所示，尿钙、尿ph、粪酸性洗涤纤维曲线下面积分别为0.826、0.974、0.965。表明尿中尿钙、尿ph、粪酸性洗涤纤维对牛亚急性瘤胃酸中毒具有较好的预警作用。当尿钙小于0.71mmol/l时诊断牛患有亚急性瘤胃酸中毒的敏感度83.33％，特异性70.00％，当尿ph<8.35时诊断牛患有亚急性瘤胃酸中毒的敏感度87.50％，特异性95.00％，当粪中酸性洗涤纤维<29.95时诊断牛患有亚急性瘤胃酸中毒的敏感度100.00％，特异性81.82％。
表4尿钙、尿ph、粪酸性洗涤纤维诊断参数
效果实施例
于黑龙江省某集约化繁育肉牛场选取产后5-14天西门塔尔泌乳母牛10头。采食后6h瘤胃液检测ph值；直肠中收集新鲜粪便200g，检测酸性洗涤纤维；阴道按摩法收集中段尿液50ml测尿钙、尿ph。依据尿钙<0.71mmol/l、尿ph<8.35、粪中酸性洗涤纤维<29.95％标准诊断牛亚急性瘤胃酸中毒，依据瘤胃液ph值评价诊断效果。
结果如表5所示，实际发生亚急性瘤胃酸中奶牛2头，依据尿钙<0.71mmol/l指标检出4头，依据尿ph<8.35指标检出3头，依据粪中酸性洗涤纤维<29.95％指标检出4头。
表5亚急性瘤胃酸中毒实施案例