本发明涉及一种治疗结肠炎药物质量检测方法，属药品
技术领域：
。技术背景治疗结肠炎药物具有补气活血，固肠止泻功能，用于气虚血瘀所致的泄泻，症见腹痛、腹泻、里急后重、黏液或脓血便血色紫暗或黑、肢体倦怠、舌淡或紫、脉濡细或弦涩；慢性溃疡性结肠炎见上述证候者。由黄芪550-650份、三七75-90份、白蔹550-700份、白及195-215份、乳香195-210份、五倍子195-210份为原料与辅料800-3000份制成（简称“结肠炎药物”），对慢性溃疡性结肠炎的各种症候有很好的疗效。本发明所述结肠炎药物处方为中医临床应用多年的验方，已有临床应用结果表明，本品对慢性溃疡性结肠炎的疗效确切、长期效果好、未见不良反应，在一定程度上弥补了化药只控制症状、长期效果差等缺陷。本发明所述结肠炎药物，现有技术没有可用于结肠炎药物质量检测方法，无法在生产和使用中有效保证产品质量，因此，为了保证结肠炎药物质量和临床用药效果，提供一套简便、可靠的质量标准非常重要。技术实现要素：本发明的目的是克服现有技术不足，提供一种治疗结肠炎药物质量检测方法，使药物在生产和使用中可有效的保证产品质量，从而保证药品疗效。本发明的目的通过以下技术方案实现：一种治疗结肠炎药物的质量检测方法，采用显微镜法鉴别三七、白及；用薄层色谱法鉴别黄芪、三七；用薄层色谱法鉴别五倍子；采用高效液相色谱法测定五倍子含量。一种治疗结肠炎药物质量检测方法，其特征在于包括以下步骤：（1）用显微镜法鉴别三七、白及：取检品，置显微镜下观察白及粉末特征：表皮细胞表面观垂周壁波状弯曲，少见，草酸钙针晶束存在于大的类圆形黏液细泡中，或随处散在，针晶长18-88μm，纤维成束，直径11-30μm，具人字形或椭圆形纹孔，梯纹导管及螺纹导管直径10-55μm；三七粉末特征：树脂道碎片含黄色分泌物，梯纹导管及螺纹导管直径10-55μm，即确定是含有白及、三七粉末的制剂。（2）用薄层色谱法鉴别黄芪、三七：取检品，称取5-10g，置具塞锥形瓶中，加三氯甲烷50ml，超声处理30分钟，滤过，残渣加甲醇50ml，置水浴上加热回流1-3小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml加热使溶解，用水饱和的正丁醇提取1-5次，每次20-40ml，合并正丁醇液，用0.25mol/l氢氧化钠溶液10-20ml洗涤一次，再用水10-30ml洗涤一次，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取黄芪甲苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为黄芪甲苷对照品溶液；再取人参皂苷rb1对照品、人参皂苷rg1对照品适量，加甲醇制成每1ml各含0.5mg的混合溶液，作为三七对照品溶液；吸取供试品溶液5-10μl、黄芪甲苷对照品溶液及三七对照品溶液各5-10μl，分别点于同一硅胶g薄层板上，以三氯甲烷∶甲醇∶水=10-15∶5-9∶1-3于10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以含硫酸1mol/l的乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；置365nm紫外光灯下检视，显相同的荧光斑点，即确定是含有黄芪、三七的制剂。（3）用薄层色谱法鉴别五倍子：取检品，称取1-5g，置具塞锥形瓶中，加甲醇50ml，置水浴上加热回流10-50分钟，取下，于0-5℃下放置3小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml，加热使溶解，冷却，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇5ml使溶解，作为供试品溶液；另取没食子酸对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；吸取供试品溶液及对照品溶液各5μl，分别点于同一硅胶gf254薄层板上，以三氯甲烷∶甲酸乙酯∶甲酸=3-7∶3-7∶1-3为展开剂，展开，取出，晾干，置254nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，即确定是含有五倍子的制剂。（4）用高效液相色谱法测定五倍子：色谱条件与系统适用性试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以含甲醇2-5mol/l的5-15mmol/l磷酸溶液为流动相；检测波长273nm；理论板数按没食子酸峰计算应不低于5000；精密称取没食子酸对照品用12mol/l甲醇制成12-120μg/ml的溶液，即得对照品溶液；取检品，称取1-5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入2-6mol/l盐酸50ml，密塞，称定重量，90℃-120℃加热2-5小时，放冷，再称定重量，用2-6mol/l盐酸补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液1ml，置50ml量瓶中，加12mol/l甲醇稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5-20μl，注入液相色谱仪，测定，即得；被测药物中五倍子含量按外标法以没食子酸计算。（5）用高效液相色谱法测定黄芪：色谱条件与系统适用性试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；13mol/l乙腈溶液为流动相；蒸发光散射检测器；理论板数按黄芪甲苷峰计算应不低于5000；精密称取黄芪甲苷对照品适量，加甲醇制成0.5mg/1ml的对照品溶液；取检品5-20g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加三氯甲烷100ml，超声30分钟，滤过，残渣加甲醇100ml，加热使微沸1-3小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml，用水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次30ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤2次，每次30ml，弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣加水5ml使溶解，通过内径1.5cm，长10cm的d101型大孔树脂柱，以水50ml洗脱，弃去水液，再用三氯甲烷5-20ml、乙酸乙酯5-20ml、7mol/l乙醇20-40ml洗脱，弃去洗脱液，继用甲醇40-100ml洗脱，收集洗脱液，30-60℃蒸干，用甲醇溶解并定容至5ml量瓶中，即得供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5-20μl，注入液相色谱仪，测定，即得；被测药物中黄芪含量按外标法以黄芪甲苷计算。至此，完成了本发明，本发明的有益效果是采用了多种方法对结肠炎药物进行全面的质量控制，可保证药物的质量，严格控制了所用药材，保证有效成分含量达到要求。为了进一步说明本发明对于结肠炎药物的质量可控性，以下通过本发明质量标准研究过程进一步说明本发明的有益效果。质量标准研究旨在进一步说明本发明的作用，而非本发明的限制。一、测定样品制备1制备结肠炎栓剂取黄芪600g、三七80g、乳香200g、五倍子200g、白蔹600g、白及200g。其中三七、乳香、五倍子、白及粉碎成细粉；黄芪、白蔹加水煎煮两次，每次1.5小时，合并煎液，滤过，减压浓缩至相对密度为1.15～1.20（80℃）的清膏，加入上述细粉，混匀，减压干燥，粉碎成细粉。另取混合脂肪酸甘油酯适量，于50～60℃加热熔化，加入上述细粉，混匀，浇模，冷却，制成1000粒，即得。2制备不含白及、三七的阴性栓剂取黄芪600g、乳香200g、五倍子200g、白蔹600g，照制备结肠炎栓剂的方法制成不含白及、三七的阴性栓剂。3制备不含黄芪、三七的阴性栓剂取乳香200g、五倍子200g、白蔹600g、白及200g，照制备结肠炎栓剂的方法制成不含黄芪、三七的阴性栓剂。4制备不含五倍子的阴性栓剂取黄芪600g、三七80g、乳香200g、白蔹600g、白及200g，照制备结肠炎栓剂的方法制成不含五倍子的阴性栓剂。二、质量标准研究过程1白及、三七鉴别取样品以水合氯醛装片，置显微镜下观察，检出显微特征：表皮细胞表面观垂周壁波状弯曲，少见；草酸钙针晶束存在于大的类圆形黏液细泡中，或随处散在，针晶长在18～88μm范围内；纤维成束，直径在11～30μm范围内，具人字形或椭圆形纹孔(白及)。树脂道碎片含黄色分泌物(三七)。取白及、三七阴性制剂同法检视，结果未检出上述显微特征。结果表明本法专属性较强，可有效对样品中白及、三七粉末进行鉴别。2黄芪、三七鉴别取本品4粒，剪碎，置具塞锥形瓶中，加三氯甲烷50ml，超声处理(功率200w，频率40khz)30分钟，滤过，残渣加甲醇50ml，置水浴上加热回流2小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml加热使溶解，用水饱和的正丁醇提取3次，每次30ml，合并正丁醇液，用0.25mol/l氢氧化钠溶液15ml洗涤一次，再用水20ml洗涤一次，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取黄芪甲苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为黄芪甲苷对照品溶液。再取人参皂苷rb1对照品、人参皂苷rg1对照品适量，加甲醇制成每1ml各含0.5mg的混合溶液，作为三七对照品溶液。取黄芪、三七阴性制剂同供试品溶液制备方法制备阴性溶液。照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10μl、黄芪甲苷对照品溶液及三七对照品溶液各5μl，分别点于同一硅胶g薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水(13∶7∶2)10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以含硫酸1mol/l的乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。结果供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；置紫外光灯(365nm)下检视，显相同的荧光斑点，阴性制剂在相应位置无斑点显示。表明本法鉴别黄芪、三七专属性强，其他原辅料无干扰。3五倍子鉴别色谱条件：以硅胶gf254为薄层板固定相；点样量为5µl；以三氯甲烷：甲酸乙酯：甲酸(5∶5∶1)为展开剂。供试品溶液制备：取样品2粒，剪碎，置具塞锥形瓶中，加甲醇50ml，置水浴上加热回流30分钟，取下，于0～5℃下放置3小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml，加热使溶解，冷却，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇5ml使溶解，即得。没食子酸对照品溶液制备：取没食子酸对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液。阴性溶液制备：取不含五倍子的阴性制剂同供试品溶液制备方法配制溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述溶液各5μl，分别点于同一硅胶gf254薄层板上，展开，取出，晾干，紫外光灯（365nm）下检视。结果显示供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。阴性溶液在相应位置无斑点。表明本法鉴别五倍子专属性强，其他原辅料无干扰。4含量测定五倍子中没食子酸含量测定方法采用高效液相色谱法，对结肠炎栓中没食子酸的含量测定进行方法学研究试验。4.1专属性试验色谱条件与系统适用性试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以含甲醇3.8mol/l的8.7mmol/l磷酸溶液为流动相；检测波长273nm；理论板数按没食子酸峰计算应不低于5000。精密称取没食子酸对照品用12mol/l甲醇制成每1ml含40μg的溶液，即得对照品溶液。取检品10粒，精密称定，剪碎，称取2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入4mol/l盐酸50ml，密塞，称定重量，100℃加热3.5小时，放冷，再称定重量，用4mol/l盐酸补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液1ml，置50ml量瓶中，加12mol/l甲醇稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液。阴性溶液制备取五倍子阴性制剂同法制备溶液。测定法精密吸取上述溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定。被测药物中五倍子含量按外标法以没食子酸进行计算。表1系统适用性试验结果项目理论板数重复性（n=7）分离度拖尾因子没食子酸对照品83000.10%——1.050供试品8500——2.4451.050结果显示本法测定没食子酸色谱峰重复性、理论板数、分离度、拖尾因子均符合高效液相色谱法中相应规定，表明本法测定系统适用性良好。专属性试验结果显示供试品溶液在与对照品溶液色谱峰保留时间内有相对应的色谱峰，阴性制剂在相应保留时间内无色谱峰。结果表明阴性对本法测定没食子酸无干扰，专属性强。4.2线性试验取每1ml含没食子酸0.1mg的对照品溶液，作为对照品线性贮备液。分别精密吸取1、3、5、7ml，置10ml量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，得不同浓度的线性溶液。分别精密各吸取线性溶液10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。表2没食子酸线性试验结果以没食子酸对照品的浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回归，得回归方程为：y=33038x-9506，r=1.0000。结果表明本法测定没食子酸进样量在0.12～1.2μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。4.3准确度试验取本品约1g（含没食子酸52.9992mg/g），精密称定6份，置具塞锥形瓶中，分别精密加入没食子酸对照品50mg，60℃水浴加热使熔化，混匀，精密加入4mol/l盐酸50ml，密塞，称定重量，置水浴上加热3.5小时，放冷，再称定重量，用4mol/l盐酸补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液1ml，置50ml量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得准确度溶液。分别精密吸取对照品溶液与准确度溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。表3准确度试验结果*注：110831-201204批没食子酸对照品含量为89.9%。结果表明本法测定没食子酸准确度良好。4.4耐用性试验4.4.1溶液稳定性试验取供试品溶液室温放置，分别于不同时间精密吸取供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。结果如下。表4供试品溶液稳定性试验结果时间0h4h5h8h9h12hrsd没食子酸峰面积1393145139785513963871393334138763513866680.33%结果显示供试品溶液室温放置12小时，没食子酸峰面积无明显变化，表明本法测定时供试品溶液在室温放置12小时内仍稳定，满足本法测定要求。4.4.2流动相比例耐用性试验改变色谱条件中流动相比例进行耐用性试验。结果如下。表5流动相比例进行耐用性试验结果试验结果显示本法测定没食子酸对流动相比例改变耐用性良好。4.4.3色谱柱耐用性试验采用不同厂牌、批号的色谱柱测定没食子酸含量。结果如下。表6流动相比例进行耐用性试验结果结果表明本法测定没食子酸不同厂牌批号色谱柱耐用性良好。4.5精密度试验4.5.1重复性试验照上法制备6份供试品溶液，测定结果如下。表7重复性试验结果结果表明本法测定没食子酸含量重复性良好。4.5.2中间精密度试验取样品，进行中间精密度试验，结果见各试验项下。4.5.3不同日期精密度试验取样品连续3日测定没食子酸含量。结果如下：表8不同日期精密度试验结果结果表明本法测定不同日期精密度良好。4.5.4不同人员精密度试验取样品分别由试验人员a、b在同一台高效液相色谱仪上测定没食子酸含量。得结果如下：表9不同人员精密度试验结果结果表明本法测定不同人员精密度良好。4.5.5不同仪器精密度试验取样品分别由同一试验人员在a、b两台高效液相色谱仪上测定没食子酸含量。得结果如下：表10不同仪器精密度试验结果结果表明本法测定不同仪器精密度良好。黄芪色谱条件以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；13mol/l乙腈溶液为流动相；蒸发光散射检测器。理论板数按黄芪甲苷峰计算应不低于5000。对照品溶液的制备精密称取黄芪甲苷对照品适量，加甲醇制成0.5mg/1ml的溶液，即得。供试品溶液的制备取本品10粒，精密称定，剪碎，置具塞锥形瓶中，加三氯甲烷100ml，超声30分钟，滤过，残渣加甲醇100ml，置80℃水浴保持微沸2小时，放冷，滤过，滤液蒸干。残渣加水30ml，用水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次30ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤2次，每次30ml，弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣加水5ml使溶解，通过d101型大孔树脂柱（内径1.5cm，长10cm），以水50ml洗脱，弃去水液，再用三氯甲烷10ml、乙酸乙酯10ml、7mol/l乙醇30ml洗脱，弃去洗脱液，继用甲醇50ml洗脱，收集洗脱液，40℃蒸干，用甲醇溶解并定容至5ml量瓶中，即得。结果显示供试品溶液在与对照品溶液色谱峰保留时间内有相对应的色谱峰，本法可用于检测本品中所含黄芪甲苷。具体实施方式实施例1：结肠炎栓剂按本发明质量标准检测方法测定1）用显微镜法鉴别三七、白及：取检品，置显微镜下观察白及粉末特征：表皮细胞表面观垂周壁波状弯曲，少见，草酸钙针晶束存在于大的类圆形黏液细泡中，或随处散在，针晶长18μm，纤维成束，直径11μm，具人字形或椭圆形纹孔，梯纹导管及螺纹导管直径10μm；三七粉末特征：树脂道碎片含黄色分泌物，梯纹导管及螺纹导管直径10μm，即确定是含有白及、三七粉末的制剂。2）用薄层色谱法鉴别黄芪、三七：取检品，称取5g，置具塞锥形瓶中，加三氯甲烷50ml，超声处理30分钟，滤过，残渣加甲醇50ml，置水浴上加热回流1小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml加热使溶解，用水饱和的正丁醇20ml提取，用0.25mol氢氧化钠溶液10ml洗涤，再用水10ml洗涤，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取黄芪甲苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为黄芪甲苷对照品溶液；再取人参皂苷rb1对照品、人参皂苷rg1对照品适量，加甲醇制成每1ml各含0.5mg的混合溶液，作为三七对照品溶液；吸取供试品溶液5μl、黄芪甲苷对照品溶液及三七对照品溶液各5μl，分别点于同一硅胶g薄层板上，以三氯甲烷：甲醇：水=10∶5∶1于10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以含硫酸1mol/l的乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；置365nm紫外光灯下检视，显相同的荧光斑点，即确定是含有黄芪、三七的制剂。3）用薄层色谱法鉴别五倍子：取检品，称取1g，置具塞锥形瓶中，加甲醇50ml，置水浴上加热回流10分钟，取下，于0℃下放置3小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml，加热使溶解，冷却，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇5ml使溶解，作为供试品溶液；另取没食子酸对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；吸取供试品溶液及对照品溶液各5μl，分别点于同一硅胶gf254薄层板上，以三氯甲烷：甲酸乙酯：甲酸=3∶3∶1为展开剂，展开，取出，晾干，置254nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，即确定是含有五倍子的制剂。4）采用高效液相色谱法测定五倍子：色谱条件与系统适用性试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以含甲醇2mol/l的5mmol/l磷酸溶液为流动相；检测波长273nm；理论板数按没食子酸峰计算应不低于5000。精密称取没食子酸对照品用12mol/l甲醇制成12μg/ml的溶液，即得对照品溶液；取检品，称取1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入2mol/l盐酸50ml，密塞，称定重量，90℃加热5小时，放冷，再称定重量，用2mol/l盐酸补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液1ml，置50ml量瓶中，加12mol/l甲醇稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液。分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，即得；被测药物中五倍子含量按外标法以没食子酸计算。5）采用高效液相色谱法测定黄芪：色谱条件与系统适用性试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；13mol/l乙腈溶液为流动相；蒸发光散射检测器；理论板数按黄芪甲苷峰计算应不低于5000。精密称取黄芪甲苷对照品适量，加甲醇制成0.5mg/1ml的对照品溶液。取检品5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加三氯甲烷100ml，超声30分钟，滤过，残渣加甲醇100ml，加热使微沸1小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml，用水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次30ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤2次，每次30ml，弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣加水5ml使溶解，通过内径1.5cm，长10cm的d101型大孔树脂柱，以水50ml洗脱，弃去水液，再用三氯甲烷5ml、乙酸乙酯5ml、7mol/l乙醇20ml洗脱，弃去洗脱液，继用甲醇40ml洗脱，收集洗脱液，30℃蒸干，用甲醇溶解并定容至5ml量瓶中，即得供试品溶液。分别精密吸取对照品溶液5μl、10μl与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，即得；被测药物中黄芪含量按外标法以黄芪甲苷计算。6）检验结果检验结果见表11：表11结肠炎栓检验结果结果显示均符合规定，表明本发明的方法能够有效的控制结肠炎栓的质量。实施例2：治疗结肠炎的肠溶颗粒剂按本发明质量标准检测方法测定。1）用显微镜法鉴别三七、白及：取检品，置显微镜下观察白及粉末特征：表皮细胞表面观垂周壁波状弯曲，少见，草酸钙针晶束存在于大的类圆形黏液细泡中，或随处散在，针晶长70μm，纤维成束，直径30μm，具人字形或椭圆形纹孔，梯纹导管及螺纹导管直径50μm；三七粉末特征：树脂道碎片含黄色分泌物，梯纹导管及螺纹导管直径60μm，即确定是含有白及、三七粉末的制剂。2）用薄层色谱法鉴别黄芪、三七：取检品，称取10g，置具塞锥形瓶中，加三氯甲烷50ml，超声处理30分钟，滤过，残渣加甲醇50ml，置水浴上加热回流3小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml加热使溶解，用水饱和的正丁醇提取5次，每次40ml，合并正丁醇液，用0.25mol氢氧化钠溶液20ml洗涤一次，再用水30ml洗涤一次，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取黄芪甲苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为黄芪甲苷对照品溶液；再取人参皂苷rb1对照品、人参皂苷rg1对照品适量，加甲醇制成每1ml各含0.5mg的混合溶液，作为三七对照品溶液；吸取供试品溶液10μl、黄芪甲苷对照品溶液及三七对照品溶液各10μl，分别点于同一硅胶g薄层板上，以三氯甲烷：甲醇：水=15∶9∶3于10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以含硫酸1mol/l的乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；置365nm紫外光灯下检视，显相同的荧光斑点，即确定是含有黄芪、三七的制剂。3）用薄层色谱法鉴别五倍子：取检品，称取5g，置具塞锥形瓶中，加甲醇50ml，置水浴上加热回流50分钟，取下，于5℃下放置3小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml，加热使溶解，冷却，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇5ml使溶解，作为供试品溶液；另取没食子酸对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；吸取供试品溶液及对照品溶液各5μl，分别点于同一硅胶gf254薄层板上，以三氯甲烷：甲酸乙酯：甲酸=7∶7∶3为展开剂，展开，取出，晾干，置254nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，即确定是含有五倍子的制剂。4）采用高效液相色谱法测定五倍子：色谱条件与系统适用性试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以含甲醇5mol/l的15mmol/l磷酸溶液为流动相；检测波长273nm；理论板数按没食子酸峰计算应不低于5000；精密称取没食子酸对照品用12mol/l甲醇制成120μg/ml的溶液，即得对照品溶液；取检品，称取5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入6mol/l盐酸50ml，密塞，称定重量，120℃加热2小时，放冷，再称定重量，用6mol/l盐酸补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液1ml，置50ml量瓶中，加12mol/l甲醇稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得；被测药物中五倍子含量按外标法以没食子酸计算。5）采用高效液相色谱法测定黄芪：色谱条件与系统适用性试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；13mol/l乙腈溶液为流动相；蒸发光散射检测器；理论板数按黄芪甲苷峰计算应不低于5000；精密称取黄芪甲苷对照品适量，加甲醇制成0.5mg/1ml的对照品溶液；取检品20g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加三氯甲烷100ml，超声30分钟，滤过，残渣加甲醇100ml，加热使微沸3小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml，用水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次30ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤2次，每次30ml，弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣加水5ml使溶解，通过内径1.5cm，长10cm的d101型大孔树脂柱，以水50ml洗脱，弃去水液，再用三氯甲烷20ml、乙酸乙酯20ml、7mol/l乙醇40ml洗脱，弃去洗脱液，继用甲醇100ml洗脱，收集洗脱液，60℃蒸干，用甲醇溶解并定容至5ml量瓶中，即得供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液10μl、20μl与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得；被测药物中黄芪含量按外标法以黄芪甲苷计算。6）检验结果检验结果见表12：表12结肠炎肠溶颗粒剂检验结果结果均符合本发明所述质量标准检测方法要求，表明本发明的方法能够有效的控制结肠炎肠溶颗粒剂的质量。实施例3：治疗结肠炎的肠溶胶囊剂按本发明质量标准检测方法测定。结果均符合本发明所述质量标准检测方法要求，表明本发明的方法能够有效的控制质量结肠炎肠溶胶囊剂的质量。1）用显微镜法鉴别三七、白及：取检品，置显微镜下观察白及粉末特征：表皮细胞表面观垂周壁波状弯曲，少见，草酸钙针晶束存在于大的类圆形黏液细泡中，或随处散在，针晶长90μm，纤维成束，直径20μm，具人字形或椭圆形纹孔，梯纹导管及螺纹导管直径43μm；三七粉末特征：树脂道碎片含黄色分泌物，梯纹导管及螺纹导管直径35μm，即确定是含有白及、三七粉末的制剂。2）用薄层色谱法鉴别黄芪、三七：取检品，称取6g，置具塞锥形瓶中，加三氯甲烷50ml，超声处理30分钟，滤过，残渣加甲醇50ml，置水浴上加热回流2小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml加热使溶解，用水饱和的正丁醇提取3次，每次30ml，合并正丁醇液，用0.25mol氢氧化钠溶液15ml洗涤一次，再用水20ml洗涤一次，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取黄芪甲苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为黄芪甲苷对照品溶液；再取人参皂苷rb1对照品、人参皂苷rg1对照品适量，加甲醇制成每1ml各含0.5mg的混合溶液，作为三七对照品溶液；吸取供试品溶液7μl、黄芪甲苷对照品溶液及三七对照品溶液各7μl，分别点于同一硅胶g薄层板上，以三氯甲烷：甲醇：水=12∶7∶2于10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以含硫酸1mol/l的乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；置365nm紫外光灯下检视，显相同的荧光斑点，即确定是含有黄芪、三七的制剂。3）用薄层色谱法鉴别五倍子：取检品，称取2g，置具塞锥形瓶中，加甲醇50ml，置水浴上加热回流30分钟，取下，于2℃下放置3小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml，加热使溶解，冷却，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇5ml使溶解，作为供试品溶液；另取没食子酸对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；吸取供试品溶液及对照品溶液各5μl，分别点于同一硅胶gf254薄层板上，以三氯甲烷：甲酸乙酯：甲酸=5∶5∶2为展开剂，展开，取出，晾干，置254nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，即确定是含有五倍子的制剂。4）采用高效液相色谱法测定五倍子：色谱条件与系统适用性试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以含甲醇3mol/l的10mmol/l磷酸溶液为流动相；检测波长273nm；理论板数按没食子酸峰计算应不低于5000.精密称取没食子酸对照品用12mol/l甲醇制成50μg/ml的溶液，即得对照品溶液。取检品，称取3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入4mol/l盐酸50ml，密塞，称定重量，100℃加热3小时，放冷，再称定重量，用4mol/l盐酸补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液1ml，置50ml量瓶中，加12mol/l甲醇稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液。分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；被测药物中五倍子含量按外标法以没食子酸计算。5）采用高效液相色谱法测定黄芪：色谱条件与系统适用性试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；13mol/l乙腈溶液为流动相；蒸发光散射检测器；理论板数按黄芪甲苷峰计算应不低于5000。精密称取黄芪甲苷对照品适量，加甲醇制成0.5mg/1ml的对照品溶液。取检品10g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加三氯甲烷100ml，超声30分钟，滤过，残渣加甲醇100ml，加热使微沸2小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml，用水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次30ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤2次，每次30ml，弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣加水5ml使溶解，通过内径1.5cm，长10cm的d101型大孔树脂柱，以水50ml洗脱，弃去水液，再用三氯甲烷10ml、乙酸乙酯10ml、7mol/l乙醇30ml洗脱，弃去洗脱液，继用甲醇80ml洗脱，收集洗脱液，40℃蒸干，用甲醇溶解并定容至5ml量瓶中，即得供试品溶液。分别精密吸取对照品溶液5μl、20μl与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，即得；被测药物中黄芪含量按外标法以黄芪甲苷计算。6）检验结果检验结果见表13：表13结肠炎肠溶胶囊剂检验结果结果均符合本发明所述质量标准检测方法要求，表明本发明的方法能够有效的控制结肠炎肠溶胶囊剂的质量。实施例4：治疗结肠炎的肠溶片剂按本发明质量标准检测方法测定。1）用显微镜法鉴别三七、白及：取检品，置显微镜下观察白及粉末特征：表皮细胞表面观垂周壁波状弯曲，少见，草酸钙针晶束存在于大的类圆形黏液细泡中，或随处散在，针晶长48μm，纤维成束，直径26μm，具人字形或椭圆形纹孔，梯纹导管及螺纹导管直径41μm；三七粉末特征：树脂道碎片含黄色分泌物，梯纹导管及螺纹导管直径39μm，即确定是含有白及、三七粉末的制剂。2）用薄层色谱法鉴别黄芪、三七：取检品，称取8g，置具塞锥形瓶中，加三氯甲烷50ml，超声处理30分钟，滤过，残渣加甲醇50ml，置水浴上加热回流3小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml加热使溶解，用水饱和的正丁醇提取4次，每次40ml，合并正丁醇液，用0.25mol氢氧化钠溶液20ml洗涤一次，再用水20ml洗涤一次，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取黄芪甲苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为黄芪甲苷对照品溶液；再取人参皂苷rb1对照品、人参皂苷rg1对照品适量，加甲醇制成每1ml各含0.5mg的混合溶液，作为三七对照品溶液；吸取供试品溶液10μl、黄芪甲苷对照品溶液及三七对照品溶液各8μl，分别点于同一硅胶g薄层板上，以三氯甲烷：甲醇：水=13∶8∶2于10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以含硫酸1mol/l的乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；置365nm紫外光灯下检视，显相同的荧光斑点，即确定是含有黄芪、三七的制剂。3）用薄层色谱法鉴别五倍子：取检品，称取4g，置具塞锥形瓶中，加甲醇50ml，置水浴上加热回流40分钟，取下，于4℃下放置3小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml，加热使溶解，冷却，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇5ml使溶解，作为供试品溶液；另取没食子酸对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；吸取供试品溶液及对照品溶液各5μl，分别点于同一硅胶gf254薄层板上，以三氯甲烷：甲酸乙酯：甲酸=6∶6∶3为展开剂，展开，取出，晾干，置254nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，即确定是含有五倍子的制剂。4）采用高效液相色谱法测定五倍子：色谱条件与系统适用性试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以含甲醇4mol/l的12mmol/l磷酸溶液为流动相；检测波长273nm；理论板数按没食子酸峰计算应不低于5000.精密称取没食子酸对照品用12mol/l甲醇制成40μg/ml的溶液，即得对照品溶液。取检品，称取4g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入5mol/l盐酸50ml，密塞，称定重量，110℃加热4小时，放冷，再称定重量，用5mol/l盐酸补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液1ml，置50ml量瓶中，加12mol/l甲醇稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液。分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各15μl，注入液相色谱仪，测定，即得；被测药物中五倍子含量按外标法以没食子酸计算。5）采用高效液相色谱法测定黄芪：色谱条件与系统适用性试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；13mol/l乙腈溶液为流动相；蒸发光散射检测器；理论板数按黄芪甲苷峰计算应不低于5000。精密称取黄芪甲苷对照品适量，加甲醇制成0.5mg/1ml的对照品溶液。取检品15g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加三氯甲烷100ml，超声30分钟，滤过，残渣加甲醇100ml，加热使微沸3小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml，用水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次30ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤2次，每次30ml，弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣加水5ml使溶解，通过内径1.5cm，长10cm的d101型大孔树脂柱，以水50ml洗脱，弃去水液，再用三氯甲烷20ml、乙酸乙酯20ml、7mol/l乙醇30ml洗脱，弃去洗脱液，继用甲醇90ml洗脱，收集洗脱液，50℃蒸干，用甲醇溶解并定容至5ml量瓶中，即得供试品溶液。分别精密吸取对照品溶液10μl、20μl与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；被测药物中黄芪含量按外标法以黄芪甲苷计算。6）检验结果检验结果见表14：表14结肠炎肠溶片剂检验结果结果均符合本发明所述质量标准检测方法要求，表明本发明的方法能够有效的控制质量结肠炎肠溶片剂的质量。实施例5：治疗结肠炎的灌肠剂按本发明质量标准检测方法测定。1）用显微镜法鉴别三七、白及：取检品，置显微镜下观察白及粉末特征：表皮细胞表面观垂周壁波状弯曲，少见，草酸钙针晶束存在于大的类圆形黏液细泡中，或随处散在，针晶长63μm，纤维成束，直径24μm，具人字形或椭圆形纹孔，梯纹导管及螺纹导管直径26μm；三七粉末特征：树脂道碎片含黄色分泌物，梯纹导管及螺纹导管直径31μm，即确定是含有白及、三七粉末的制剂。2）用薄层色谱法鉴别黄芪、三七：取检品，称取6g，置具塞锥形瓶中，加三氯甲烷50ml，超声处理30分钟，滤过，残渣加甲醇50ml，置水浴上加热回流2小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml加热使溶解，用水饱和的正丁醇提取2次，每次30ml，合并正丁醇液，用0.25mol氢氧化钠溶液12ml洗涤一次，再用水18ml洗涤一次，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取黄芪甲苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为黄芪甲苷对照品溶液；再取人参皂苷rb1对照品、人参皂苷rg1对照品适量，加甲醇制成每1ml各含0.5mg的混合溶液，作为三七对照品溶液；吸取供试品溶液10μl、黄芪甲苷对照品溶液及三七对照品溶液各10μl，分别点于同一硅胶g薄层板上，以三氯甲烷：甲醇：水=11∶6∶1于10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以含硫酸1mol/l的乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；置365nm紫外光灯下检视，显相同的荧光斑点，即确定是含有黄芪、三七的制剂。3）用薄层色谱法鉴别五倍子：取检品，称取2g，置具塞锥形瓶中，加甲醇50ml，置水浴上加热回流20分钟，取下，于1℃下放置3小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml，加热使溶解，冷却，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇5ml使溶解，作为供试品溶液；另取没食子酸对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；吸取供试品溶液及对照品溶液各5μl，分别点于同一硅胶gf254薄层板上，以三氯甲烷：甲酸乙酯：甲酸=4∶4∶1为展开剂，展开，取出，晾干，置254nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，即确定是含有五倍子的制剂。4）采用高效液相色谱法测定五倍子：色谱条件与系统适用性试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以含甲醇3mol/l的6mmol/l磷酸溶液为流动相；检测波长273nm；理论板数按没食子酸峰计算应不低于5000.精密称取没食子酸对照品用12mol/l甲醇制成60μg/ml的溶液，即得对照品溶液。取检品，称取2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入3mol/l盐酸50ml，密塞，称定重量，95℃加热3小时，放冷，再称定重量，用3mol/l盐酸补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液1ml，置50ml量瓶中，加12mol/l甲醇稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液。分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；被测药物中五倍子含量按外标法以没食子酸计算。5）采用高效液相色谱法测定黄芪：色谱条件与系统适用性试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；13mol/l乙腈溶液为流动相；蒸发光散射检测器；理论板数按黄芪甲苷峰计算应不低于5000。精密称取黄芪甲苷对照品适量，加甲醇制成0.5mg/1ml的对照品溶液。取检品8g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加三氯甲烷100ml，超声30分钟，滤过，残渣加甲醇100ml，加热使微沸2小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml，用水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次30ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤2次，每次30ml，弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣加水5ml使溶解，通过内径1.5cm，长10cm的d101型大孔树脂柱，以水50ml洗脱，弃去水液，再用三氯甲烷8ml、乙酸乙酯8ml、7mol/l乙醇12ml洗脱，弃去洗脱液，继用甲醇50ml洗脱，收集洗脱液，35℃蒸干，用甲醇溶解并定容至5ml量瓶中，即得供试品溶液。分别精密吸取对照品溶液5μl、20μl与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得；被测药物中黄芪含量按外标法以黄芪甲苷计算。6）检验结果检验结果见表15：表15结肠炎灌肠剂检验结果结果均符合本发明所述质量标准检测方法要求，表明本发明的方法能够有效的控制质量结肠炎灌肠剂的质量。实施例6：治疗结肠炎的肠溶丸剂按本发明质量标准检测方法测定。1）用显微镜法鉴别三七、白及：取检品，置显微镜下观察白及粉末特征：表皮细胞表面观垂周壁波状弯曲，少见，草酸钙针晶束存在于大的类圆形黏液细泡中，或随处散在，针晶长77μm，纤维成束，直径28μm，具人字形或椭圆形纹孔，梯纹导管及螺纹导管直径52μm；三七粉末特征：树脂道碎片含黄色分泌物，梯纹导管及螺纹导管直径50μm，即确定是含有白及、三七粉末的制剂。2）用薄层色谱法鉴别黄芪、三七：取检品，称取9g，置具塞锥形瓶中，加三氯甲烷50ml，超声处理30分钟，滤过，残渣加甲醇50ml，置水浴上加热回流3小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml加热使溶解，用水饱和的正丁醇提取4次，每次40ml，合并正丁醇液，用0.25mol氢氧化钠溶液20ml洗涤一次，再用水30ml洗涤一次，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取黄芪甲苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为黄芪甲苷对照品溶液；再取人参皂苷rb1对照品、人参皂苷rg1对照品适量，加甲醇制成每1ml各含0.5mg的混合溶液，作为三七对照品溶液；吸取供试品溶液10μl、黄芪甲苷对照品溶液及三七对照品溶液各6μl，分别点于同一硅胶g薄层板上，以三氯甲烷：甲醇：水=14∶8∶2于10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以含硫酸1mol/l的乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；置365nm紫外光灯下检视，显相同的荧光斑点，即确定是含有黄芪、三七的制剂。3）用薄层色谱法鉴别五倍子：取检品，称取4g，置具塞锥形瓶中，加甲醇50ml，置水浴上加热回流40分钟，取下，于4℃下放置3小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml，加热使溶解，冷却，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇5ml使溶解，作为供试品溶液；另取没食子酸对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；吸取供试品溶液及对照品溶液各5μl，分别点于同一硅胶gf254薄层板上，以三氯甲烷：甲酸乙酯：甲酸=6∶6∶3为展开剂，展开，取出，晾干，置254nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，即确定是含有五倍子的制剂。4）采用高效液相色谱法测定五倍子：色谱条件与系统适用性试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以含甲醇4mol/l的13mmol/l磷酸溶液为流动相；检测波长273nm；理论板数按没食子酸峰计算应不低于5000.精密称取没食子酸对照品用12mol/l甲醇制成90μg/ml的溶液，即得对照品溶液。取检品，称取4g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入5mol/l盐酸50ml，密塞，称定重量，115℃加热4小时，放冷，再称定重量，用5mol/l盐酸补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液1ml，置50ml量瓶中，加12mol/l甲醇稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液。分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各15μl，注入液相色谱仪，测定，即得；被测药物中五倍子含量按外标法以没食子酸计算。5）采用高效液相色谱法测定黄芪：色谱条件与系统适用性试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；13mol/l乙腈溶液为流动相；蒸发光散射检测器；理论板数按黄芪甲苷峰计算应不低于5000。精密称取黄芪甲苷对照品适量，加甲醇制成0.5mg/1ml的对照品溶液。取检品15g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加三氯甲烷100ml，超声30分钟，滤过，残渣加甲醇100ml，加热使微沸2小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml，用水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次30ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤2次，每次30ml，弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣加水5ml使溶解，通过内径1.5cm，长10cm的d101型大孔树脂柱，以水50ml洗脱，弃去水液，再用三氯甲烷15ml、乙酸乙酯15ml、7mol/l乙醇30ml洗脱，弃去洗脱液，继用甲醇90ml洗脱，收集洗脱液，50℃蒸干，用甲醇溶解并定容至5ml量瓶中，即得供试品溶液。分别精密吸取对照品溶液10μl、20μl与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；被测药物中黄芪含量按外标法以黄芪甲苷计算。6）检验结果检验结果见表15：表15结肠炎肠溶丸剂检验结果结果均符合本发明所述质量标准检测方法要求，表明本发明的方法能够有效的控制质量结肠炎肠溶丸剂的质量。当前第1页1 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