一种基于MRM-IDA-EPI模式同时定性定量分析酸枣叶总黄酮中6种成分的方法与流程

文档序号:20612918发布日期:2020-05-06 19:47阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种基于mrm-ida-epi模式同时定性定量分析酸枣叶总黄酮中6种成分的方法,其特征在于:酸枣叶总黄酮样品用70%甲醇超声提取,稀释2倍后过0.45μm微孔滤膜得供试品溶液;用超高效液相色谱-串联四极杆复合线性离子阱质谱技术,以多反应监测数据依赖扫描-触发增强子离子扫描获得mrm的定量离子对和epi二级全扫描离子碎片定性数据,一次进样同时定性、定量分析;采用系列浓度对照品溶液建立同时测定芦丁、金丝桃苷、槲皮苷、槲皮素-3-o-葡萄糖苷、槲皮素-3-o-洋槐糖苷、槲皮素6种成分的标准曲线,对以上化合物进行鉴定。

2.根据权利要求1所述的一种基于mrm-ida-epi模式同时定性定量分析酸枣叶总黄酮中6种成分的方法,其特征在于:相当于原药材的总黄酮中槲皮素-3-o-洋槐糖苷、芦丁、金丝桃苷、槲皮素-3-o-葡萄糖苷、槲皮素-3-鼠李糖苷、槲皮素的含量分别为1.04、0.83、0.01、0.03、0.02、0.0005%。

3.根据权利要求1所述的一种基于mrm-ida-epi模式同时定性定量分析酸枣叶总黄酮中6种成分的方法,其特征在于:具体步骤如下:

(1)供试品溶液的制备:精密称定酸枣叶总黄酮粉末10mg,置具塞瓶中,精密加入浓度为70%甲醇25ml,称定质量,超声提取20min;放置室温,再称定质量,用70%甲醇补足减失质量;甲醇稀释2倍后0.45μm微孔滤膜滤过,取续滤液,即得供试品溶液;

(2)混合对照品溶液的制备:精密称定对照品,加70%的甲醇制备成浓度均为1mg/ml的槲皮素-3-o-洋槐糖苷和芦丁单一对照品储备液,加70%的甲醇制备成浓度均为0.02mg/ml的金丝桃苷、槲皮素-3-o-葡萄糖苷、槲皮苷和槲皮素单一对照品溶液;分别精密吸取上述单一对照品储备液混合,加入甲醇制成浓度分别为50μg/ml槲皮素-3-o-洋槐糖苷,52.8μg/ml芦丁,0.544μg/ml金丝桃苷,1.034μg/ml槲皮素-3-o-葡萄糖苷,1.014μg/ml槲皮苷,0.148μg/ml槲皮素的混合对照品溶液;

(3)检测:将以上获得的供试品溶液与对照品溶液注入超高效液相色谱-串联四极杆复合线性离子阱质谱仪,按以下色谱、质谱条件进行检测:

色谱条件:色谱柱为acquityuplc®hsst3,150mm×2.1mm,1.8µm,流动相为:a-b=乙腈-含有0.1%甲酸的水,梯度洗脱:0~5min,15%a;5~13min,15~16%a;13~17min,16%a;17~20min,16~16.5%a;20~24min,16.5~100%a;流速为0.3ml/min;柱温35℃;进样量2µl;

质谱条件:离子源:电喷雾离子源esi;扫描模式:mrm负离子扫描;源喷射电压is为-4500v;雾化温度:550℃;气帘气curtaingas,n2:40.0psi;雾化气gs1,n2:50psi;辅助气gs2,n2:50psi;

6个定量离子对的ms1/ms2分别为609.4/301.0、609.4/301.1、463.2/301.2、463.2/301.2、447.2/301.2、301.1/151.2;

dp/ce分别为-80/-50、-100/-50、-60/-50、-100/-35、-50/-40、-50/-30;

mrm-ida-epi模式:ida参数:select1to1mostintensepeaks;选择动态背景扣除(alterdynamicbackgroundsubtractionofsurveyscan);阈值whichexceeds:500cps;质量偏差masstolerance:250mda;

epi参数设置为扫描范围:50-650da;扫描速率scanrate:1000da/s;离子阱动态填充dynamicfilltime;dp:-80ev;ep:-10ev;ces:-45±15ev;

(4)epi数据通过母离子质荷比、子离子扫描图谱等信息并且与对照品及参考文献比较,对酸枣叶总黄酮中6种化学成分进行结构确认,mrm定量数据采用标准曲线法分别计算酸枣叶总黄酮中6种成分的含量。

4.权利要求3所述方法的应用,其特征在于:在提取纯化所制备的酸枣叶总黄酮的工艺稳定性评价中的应用。


技术总结
本发明属中药活性成分含量测定技术领域,提供一种基于MRM‑IDA‑EPI模式同时定性定量分析酸枣叶总黄酮中6种成分的方法,酸枣叶总黄酮样品甲醇超声提取,稀释2倍后过微孔滤膜得供试品溶液;用UPLC‑QTRAP‑MS技术,以MRM‑IDA‑EPI获得MRM的定量离子对和EPI二级全扫描离子碎片定性数据,实现一次进样同时定性、定量分析;用系列浓度对照品溶液建立同时测定6种成分的标准曲线,6种化学成分的峰面积和浓度在测定浓度范围内均有良好的线性关系。重复性结果RSD值均小于5%,符合药典规定要求。所建立的方法稳定、可靠,24分钟内实现两对同分异构体的完全分离,该方法定量更准确。

技术研发人员:闫艳;付彩;杜晨晖;裴香萍
受保护的技术使用者:山西大学;山西中医药大学
技术研发日:2019.12.03
技术公布日:2020.05.05
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