本发明涉及一种脂蛋白a检测试剂盒。
背景技术：
：脂蛋白(a)是一种与ldl(低密度脂蛋白)结构相近的人体血清中的蛋白，密度介于hdl(高密度脂蛋白)与ldl之间，脂蛋白(a)核心部分为中性脂质和apob-100分子，其外围包绕着亲水性的apo(a)，二者以二硫键共价连接；其中apo(a)是高度糖化的亲水性蛋白质，肽链长度很不一致，分子大小呈明显多态性；肝脏是lp(a)合成的主要场所，apo(a)在肝细胞内合成，能在肝细胞表面和apob-100结合后分泌到血液中。脂蛋白(a)是一种富含胆固醇的特殊大分子脂蛋白，表面由胆固醇及磷脂包裹，嵌有亲水性载脂蛋白，lp(a)可以进入并沉积在血管壁上，有促进动脉粥样硬化的作用。并与纤溶酶原(plg)结构同源，可以与纤维酶原竞争结合纤维蛋白位点，从而抑制纤维蛋白原水解作用，促进血栓形成。然而常规的脂蛋白(a)的检测方式不仅很难对不同大小的脂蛋白(a)进行精确检测，检测偏差较大，且容易因vc干扰而造成检测误差，影响使用者对脂蛋白(a)的检测效率、检测精确性与检测稳定性。技术实现要素：本发明主要解决现有技术所存在的技术问题，从而提供一种能够消除vc的干扰，有效提高脂蛋白a的检测效率、检测精确性与检测稳定性的脂蛋白a检测试剂盒。为解决上述问题，本发明采用如下技术方案，包括试剂r1与试剂r2，所述试剂r1包括70-80mmol/l抗vc干扰剂、100-130mmol/l甘氨酸缓冲液、0.7-2.5g/l牛血清白蛋白、20-35mmol/l十二烷基硫酸钠、8-17mmol/l甲酰胺、15-25mmol/l羊igg、3-8g/l4-羟乙基哌嗪乙磺酸和5-15g/l电解质，所述试剂r2包括30-50mg/l脂蛋白(a)单克隆抗体的胶乳微球、120-150mmol/l甘氨酸缓冲液、10-30mmol/lbsa、15-25mmol/l羊igg、10-30mmol/l乙二胺四乙酸、3-8mmol/l羟甲基纤维素钠和5-15g/l电解质；所述抗vc干扰剂包括30mmol/l磷酸盐、10g/l聚乙二醇、12mmol/l聚氧乙烯辛基苯基醚、3mmol/l盐酸胍、9mmol/l羟乙基哌秦乙硫磺酸、6mmol/l苯甲基磺酰氟与电解质。作为优选，所述试剂r1与试剂r2的混合体积比为1.7:1，其中试剂r1中甘氨酸缓冲液的ph值在6.5-7.0，试剂r2中甘氨酸缓冲液的ph值在7.0-7.5，且甘氨酸的主要物质分子量mr＝75.07。作为优选，所述磷酸盐缓冲液为磷酸氢二钠缓冲液，磷酸氢二钠缓冲液的ph值在7.5-8.0，磷酸氢二钠缓冲液的主要分子量mr＝178.05。作为优选，所述电解质为氯化镁、氯化钠、硫酸铵或氯化钙，即电解质包括但不限于氯化镁、氯化钠、硫酸铵、氯化钙，也可以是其他具有相类似性质电解质的一种或几种。作为优选，所述脂蛋白(a)单克隆抗体的胶乳微球30-40nm的粒径占总胶乳颗粒的60％，10-30nm粒径的乳胶颗粒占总体积的15％，40-80nm粒径的乳胶颗粒占总体积的25％。作为优选，一种脂蛋白a检测试剂盒的制备方法，包括以下步骤：(1)、首先将抗vc干扰剂进行按以下比例进行制备：首先取聚乙二醇10g/l、聚氧乙烯辛基苯基醚12mmol/l、盐酸胍3mmol/l、羟乙基哌秦乙硫磺酸9mmol/l、苯甲基磺酰氟6mmol/l与5g/l氯化钠进行混合，而后依次添加ph7.5的磷酸盐缓冲液30mmol/l进行稀释混匀，混合的温度控制在20℃±1℃；(2)、按以下比例配置好r1溶剂：取120mmol/l甘氨酸缓冲液、1.8g/l牛血清白蛋白、25mmol/l十二烷基硫酸钠、13mmol/l甲酰胺、20mmol/l羊igg、5g/l4-羟乙基哌嗪乙磺酸和12g/l氯化钠进行初步混合，混合完成后的溶液内添加步骤1中制备完成的抗vc干扰剂75mmol/l，并孵育10-15min，反应温度控制在25℃±1℃；(3)、按以下比例配置好r2溶剂：用移液器让130mmol/l甘氨酸缓冲液将40mg/l脂蛋白(a)单克隆抗体的胶乳微球进行稀释，得包被液；(4)、而后通过微孔板均匀的加入步骤3中的包被液，并同时依次添加20mmol/lbsa、20mmol/l羊igg、20mmol/l乙二胺四乙酸、5mmol/l羟甲基纤维素钠和12g/l电解质，温度控制在25℃±1℃，孵育30-50min。本发明的有益效果是：该脂蛋白a检测试剂盒加入了抗vc干扰剂，抗vc干扰剂包括30mmol/l磷酸盐、10g/l聚乙二醇、12mmol/l聚氧乙烯辛基苯基醚、3mmol/l盐酸胍、9mmol/l羟乙基哌秦乙硫磺酸、6mmol/l苯甲基磺酰氟与电解质，能够有效的消除了vc的干扰，从而增加脂蛋白a的检测精确性，步骤3与步骤4的制备能够有效的将脂蛋白(a)单克隆抗体的胶乳微球进行稀释、均分、孵育，具有灵敏度高、特异性好的特点，有效的提高了脂蛋白a的检测效率、检测精确性与检测稳定性。具体实施方式为了使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面结合具体实施例，进一步阐述本发明，但下述实施例仅仅为本发明的优选实施例，并非全部。基于实施方式中的实施例，本领域技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得其它实施例，都属于本专利的保护范围。实施例1一种脂蛋白a检测试剂盒包括试剂r1与试剂r2，所述试剂r1包括70-80mmol/l抗vc干扰剂、100-130mmol/l甘氨酸缓冲液、0.7-2.5g/l牛血清白蛋白、20-35mmol/l十二烷基硫酸钠、8-17mmol/l甲酰胺、15-25mmol/l羊igg、3-8g/l4-羟乙基哌嗪乙磺酸和5-15g/l电解质，所述试剂r2包括30-50mg/l脂蛋白(a)单克隆抗体的胶乳微球、120-150mmol/l甘氨酸缓冲液、10-30mmol/lbsa、15-25mmol/l羊igg、10-30mmol/l乙二胺四乙酸、3-8mmol/l羟甲基纤维素钠和5-15g/l电解质；所述抗vc干扰剂包括30mmol/l磷酸盐、10g/l聚乙二醇、12mmol/l聚氧乙烯辛基苯基醚、3mmol/l盐酸胍、9mmol/l羟乙基哌秦乙硫磺酸、6mmol/l苯甲基磺酰氟与电解质。所述试剂r1与试剂r2的混合体积比为1.7:1，试剂r1中甘氨酸缓冲液的ph值在6.5-7.0，试剂r2中甘氨酸缓冲液的ph值在7.0-7.5，且甘氨酸的主要物质分子量mr＝75.07。所述磷酸盐缓冲液为磷酸氢二钠缓冲液，磷酸氢二钠缓冲液的ph值在7.5-8.0，磷酸氢二钠缓冲液的主要分子量mr＝178.05。所述所述电解质为氯化镁、氯化钠、硫酸铵或氯化钙，即电解质包括但不限于氯化镁、氯化钠、硫酸铵、氯化钙，也可以是其他具有相类似性质电解质的一种或几种。所述脂蛋白(a)单克隆抗体的胶乳微球30-40nm的粒径占总胶乳颗粒的60％，10-30nm粒径的乳胶颗粒占总体积的15％，40-80nm粒径的乳胶颗粒占总体积的25％。一种脂蛋白a检测试剂盒的制备方法，包括以下步骤：(1)、首先将抗vc干扰剂进行按以下比例进行制备：首先取聚乙二醇10g/l、聚氧乙烯辛基苯基醚12mmol/l、盐酸胍3mmol/l、羟乙基哌秦乙硫磺酸9mmol/l、苯甲基磺酰氟6mmol/l与5g/l氯化钠进行混合，而后依次添加ph7.5的磷酸盐缓冲液30mmol/l进行稀释混匀，混合的温度控制在20℃±1℃；(2)、按以下比例配置好r1溶剂：取100mmol/l甘氨酸缓冲液、0.7g/l牛血清白蛋白、20mmol/l十二烷基硫酸钠、8mmol/l甲酰胺、15mmol/l羊igg、3g/l4-羟乙基哌嗪乙磺酸和5g/l氯化钠进行初步混合，混合完成后的溶液内添加步骤1中制备完成的抗vc干扰剂75mmol/l，并孵育10-15min，反应温度控制在25℃±1℃；(3)、按以下比例配置好r2溶剂：用移液器让120mmol/l甘氨酸缓冲液将30mg/l脂蛋白(a)单克隆抗体的胶乳微球进行稀释，得包被液；(4)、而后通过微孔板均匀的加入步骤3中的包被液，并同时依次添加10mmol/lbsa、15mmol/l羊igg、10mmol/l乙二胺四乙酸、3mmol/l羟甲基纤维素钠和5g/l电解质，温度控制在25℃±1℃，孵育30-50min。实施例2一种脂蛋白a检测试剂盒包括试剂r1与试剂r2，所述试剂r1包括70-80mmol/l抗vc干扰剂、100-130mmol/l甘氨酸缓冲液、0.7-2.5g/l牛血清白蛋白、20-35mmol/l十二烷基硫酸钠、8-17mmol/l甲酰胺、15-25mmol/l羊igg、3-8g/l4-羟乙基哌嗪乙磺酸和5-15g/l电解质，所述试剂r2包括30-50mg/l脂蛋白(a)单克隆抗体的胶乳微球、120-150mmol/l甘氨酸缓冲液、10-30mmol/lbsa、15-25mmol/l羊igg、10-30mmol/l乙二胺四乙酸、3-8mmol/l羟甲基纤维素钠和5-15g/l电解质；所述抗vc干扰剂包括30mmol/l磷酸盐、10g/l聚乙二醇、12mmol/l聚氧乙烯辛基苯基醚、3mmol/l盐酸胍、9mmol/l羟乙基哌秦乙硫磺酸、6mmol/l苯甲基磺酰氟与电解质。所述试剂r1与试剂r2的混合体积比为1.7:1，试剂r1中甘氨酸缓冲液的ph值在6.5-7.0，试剂r2中甘氨酸缓冲液的ph值在7.0-7.5，且甘氨酸的主要物质分子量mr＝75.07。所述磷酸盐缓冲液为磷酸氢二钠缓冲液，磷酸氢二钠缓冲液的ph值在7.5-8.0，磷酸氢二钠缓冲液的主要分子量mr＝178.05。所述所述电解质为氯化镁、氯化钠、硫酸铵或氯化钙，即电解质包括但不限于氯化镁、氯化钠、硫酸铵、氯化钙，也可以是其他具有相类似性质电解质的一种或几种。所述脂蛋白(a)单克隆抗体的胶乳微球30-40nm的粒径占总胶乳颗粒的60％，10-30nm粒径的乳胶颗粒占总体积的15％，40-80nm粒径的乳胶颗粒占总体积的25％。一种脂蛋白a检测试剂盒的制备方法，包括以下步骤：(1)、首先将抗vc干扰剂进行按以下比例进行制备：首先取聚乙二醇10g/l、聚氧乙烯辛基苯基醚12mmol/l、盐酸胍3mmol/l、羟乙基哌秦乙硫磺酸9mmol/l、苯甲基磺酰氟6mmol/l与5g/l氯化钠进行混合，而后依次添加ph7.5的磷酸盐缓冲液30mmol/l进行稀释混匀，混合的温度控制在20℃±1℃；(2)、按以下比例配置好r1溶剂：取120mmol/l甘氨酸缓冲液、1.8g/l牛血清白蛋白、25mmol/l十二烷基硫酸钠、13mmol/l甲酰胺、20mmol/l羊igg、5g/l4-羟乙基哌嗪乙磺酸和12g/l氯化钠进行初步混合，混合完成后的溶液内添加步骤1中制备完成的抗vc干扰剂75mmol/l，并孵育10-15min，反应温度控制在25℃±1℃；(3)、按以下比例配置好r2溶剂：用移液器让130mmol/l甘氨酸缓冲液将40mg/l脂蛋白(a)单克隆抗体的胶乳微球进行稀释，得包被液；(4)、而后通过微孔板均匀的加入步骤3中的包被液，并同时依次添加20mmol/lbsa、20mmol/l羊igg、20mmol/l乙二胺四乙酸、5mmol/l羟甲基纤维素钠和12g/l电解质，温度控制在25℃±1℃，孵育30-50min。实施例3一种脂蛋白a检测试剂盒包括试剂r1与试剂r2，所述试剂r1包括70-80mmol/l抗vc干扰剂、100-130mmol/l甘氨酸缓冲液、0.7-2.5g/l牛血清白蛋白、20-35mmol/l十二烷基硫酸钠、8-17mmol/l甲酰胺、15-25mmol/l羊igg、3-8g/l4-羟乙基哌嗪乙磺酸和5-15g/l电解质，所述试剂r2包括30-50mg/l脂蛋白(a)单克隆抗体的胶乳微球、120-150mmol/l甘氨酸缓冲液、10-30mmol/lbsa、15-25mmol/l羊igg、10-30mmol/l乙二胺四乙酸、3-8mmol/l羟甲基纤维素钠和5-15g/l电解质；所述抗vc干扰剂包括30mmol/l磷酸盐、10g/l聚乙二醇、12mmol/l聚氧乙烯辛基苯基醚、3mmol/l盐酸胍、9mmol/l羟乙基哌秦乙硫磺酸、6mmol/l苯甲基磺酰氟与电解质。所述试剂r1与试剂r2的混合体积比为1.7:1，试剂r1中甘氨酸缓冲液的ph值在6.5-7.0，试剂r2中甘氨酸缓冲液的ph值在7.0-7.5，且甘氨酸的主要物质分子量mr＝75.07。所述磷酸盐缓冲液为磷酸氢二钠缓冲液，磷酸氢二钠缓冲液的ph值在7.5-8.0，磷酸氢二钠缓冲液的主要分子量mr＝178.05。所述所述电解质为氯化镁、氯化钠、硫酸铵或氯化钙，即电解质包括但不限于氯化镁、氯化钠、硫酸铵、氯化钙，也可以是其他具有相类似性质电解质的一种或几种。所述脂蛋白(a)单克隆抗体的胶乳微球30-40nm的粒径占总胶乳颗粒的60％，10-30nm粒径的乳胶颗粒占总体积的15％，40-80nm粒径的乳胶颗粒占总体积的25％。一种脂蛋白a检测试剂盒的制备方法，包括以下步骤：(1)、首先将抗vc干扰剂进行按以下比例进行制备：首先取聚乙二醇10g/l、聚氧乙烯辛基苯基醚12mmol/l、盐酸胍3mmol/l、羟乙基哌秦乙硫磺酸9mmol/l、苯甲基磺酰氟6mmol/l与5g/l氯化钠进行混合，而后依次添加ph7.5的磷酸盐缓冲液30mmol/l进行稀释混匀，混合的温度控制在20℃±1℃；(2)、按以下比例配置好r1溶剂：取130mmol/l甘氨酸缓冲液、2.5g/l牛血清白蛋白、35mmol/l十二烷基硫酸钠、17mmol/l甲酰胺、25mmol/l羊igg、8g/l4-羟乙基哌嗪乙磺酸和15g/l氯化钠进行初步混合，混合完成后的溶液内添加步骤1中制备完成的抗vc干扰剂75mmol/l，并孵育10-15min，反应温度控制在25℃±1℃；(3)、按以下比例配置好r2溶剂：用移液器让150mmol/l甘氨酸缓冲液将50mg/l脂蛋白(a)单克隆抗体的胶乳微球进行稀释，得包被液；(4)、而后通过微孔板均匀的加入步骤3中的包被液，并同时依次添加30mmol/lbsa、25mmol/l羊igg、30mmol/l乙二胺四乙酸、8mmol/l羟甲基纤维素钠和15g/l电解质，温度控制在25℃±1℃，孵育30-50min。一、脂蛋白a检测试剂盒的脂蛋白a临床检查值范围如下表：正常范围小于35mmol/l小于14mg/dl交界性危险范围35～75mmol/l14～30mg/dl高度危险值75～125mmol/l30～50mg/dl极端高度危险值大于125mmol/l大于50mg/dl脂蛋白a检测试剂盒采用全自动生化仪进行检测：1、取200μl试剂r1和20μl血清样本混匀，控制温度在37℃±1℃，混匀后孵育时间5min；2、在混匀的溶液中添加100μl试剂r2进行反应，反应时间在180s，反应温度控制也在37℃±1℃；3、最后在主波长：540nm，副波长：620nm的条件下检测330s的吸光变化，检测方法采用连续监测法；4、通过读取的吸光度值的计算出脂蛋白(a)蛋白的浓度。二、取浓度35mg/l脂蛋白a的本发明在2-6℃的环境下保存结果如下表：其中变异系数＝stdev(1-5)/均值，这份表格测得本发明的脂蛋白a浓度均接近真实值，且测得的变异系数均小于1％，说明本发明的试剂盒能够长时间保存二部发生异变，具有优秀的性能稳定性，检测使用的精确性高的特点。三、干扰试验如下表在同一份人血清样品中分别加入抗坏血酸、血红蛋白、胆红素、甘油三酯(各10μmol/l/20μmol/l/40μmol/l/80μmol/l)的干扰物质后采用本发明的脂蛋白(a)试剂盒分别进行各样本中脂蛋白(a)浓度的检测，并与不添加干扰物质样本中脂蛋白(a)的浓度进行对比，并进行偏差计算：偏差值＝(对应样本中脂蛋白(a)的浓度-无添加样本中脂蛋白(a)的浓度)/无添加样本中脂蛋白(a)的浓度)。试验结果表明抗坏血酸、血红蛋白、胆红素、甘油三酯对本发明的脂蛋白(a)试剂检测的偏差值均≤3％(偏差值≤3％时对测值结果无影响)，说明本发明试剂不受干扰物的影响，对检测结果无显著干扰，使得本发明对干扰物具有优秀的抗干扰效果，保证了本发明试剂对脂蛋白(a)检测的精确性与稳定性。本发明的有益效果是：该脂蛋白a检测试剂盒加入了抗vc干扰剂，抗vc干扰剂包括30mmol/l磷酸盐、10g/l聚乙二醇、12mmol/l聚氧乙烯辛基苯基醚、3mmol/l盐酸胍、9mmol/l羟乙基哌秦乙硫磺酸、6mmol/l苯甲基磺酰氟与电解质，能够有效的消除了vc的干扰，从而增加脂蛋白a的检测精确性，步骤3与步骤4的制备能够有效的将脂蛋白(a)单克隆抗体的胶乳微球进行稀释、均分、孵育，具有灵敏度高、特异性好的特点，有效的提高了脂蛋白a的检测效率、检测精确性与检测稳定性。以在所述，仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何不经过创造性劳动想到的变化或替换，都应涵盖在本发明保护范围内。当前第1页12