一种快速测定蔬菜、水果及食用菌中农药残留的方法与流程

本发明涉及农产品质量安全检测
技术领域：
，具体为一种快速测定蔬菜、水果及食用菌中农药残留的方法。
背景技术：
：蔬菜和水果中的有机磷、有机氯、拟除虫菊酯和氨基甲酸酯类农药多残留的测定标准(ny/t761-2008)在地市级和县级的监督抽检中应用广泛。该标准中关于样品的提取、提取液净化及上机测定均比较繁琐和耗时。如样品经乙腈均质提取后过滤，需要用漏斗和滤纸进行过滤，该步骤繁琐耗时；过滤后震荡静置30分钟，该步骤非常费时间。对于净化过程，测有机磷需要用150ml烧杯进行氮吹，完后须分3次涮洗烧杯至离心管定容，该过程繁琐且效率低下；测有机氯及菊酯类农药需要氮吹、用固相萃取柱(spe)进行净化，该过程是最耗时的一个环节。最后上机测定时，根据标准中提供的谱图及上机程序升温时间，可以算出，走一针样品加上仪器稳定的时间，需要近50分钟。分散固相萃取(dspe)技术是美国农业部于2003年提出使用的一种新的样品前处理技术，该方法直接在样品提取液中加入固体吸附剂以除去样品基质中的杂质，同时完成对样品待测组分的提取及净化，其特点是溶剂用量少、操作简单、耗时短。最经典的一个应用实例就是quechers技术，该技术因其简单、高效、实惠而备受业内青睐，唯一的不足是需要用到价格昂贵的质谱仪进行测定，最初是用于蔬菜和水果的农药残留检测，如美国农药残留检测方法aoac2007.01和cen标准方法156627。因此需要开发一种实用性强、可快速检测水果蔬菜等产品中农药残料的方法。技术实现要素：为解决以上现有问题，本发明提供一种快速测定蔬菜、水果及食用菌中农药残留的方法。本发明通过以下技术方案实现。一种快速测定蔬菜、水果及食用菌中农药残留的方法，包括以下步骤：(1)提取：称取一定量样品，置于离心管中，加入氯化钠，加入乙腈，均质提取，离心，取上清液备用；(2)净化：将所得上清液于水浴锅中氮吹至近干，加入丙酮正己烷混合溶液定容，涡旋混匀，再加入净化剂，涡旋，过滤膜，采用检测仪器进行测定。进一步的，所述步骤(1)的提取具体为：称取5.0g样品于50ml离心管中，加入1-2g氯化钠，加入10.0ml乙腈，于转速为9000-10000r/min的均质仪中均质提取2min，在转速为4000-5000r/min的条件下离心3min，取6.0ml上清液备用。进一步的，所述步骤(2)的净化具体为：将上清液于45-55℃的水浴锅中氮吹至近干，加入丙酮正己烷混合溶液定容至3ml，涡旋混匀，加入300mg净化剂，涡旋2-4min，过滤膜，采用检测仪器进行测定。更进一步的，所述净化剂是由石墨化碳黑、n-丙基乙二胺、失活弗罗里硅土混合而成。更进一步的，所述石墨化碳黑、n-丙基乙二胺、失活弗罗里硅土的重量比为1:3:2。更进一步的，所述失活弗罗里硅土是将弗罗里硅土于600-700℃的马弗炉中烘烤3-4小时，冷却后加入蒸馏水进行失活处理。进一步的，所述步骤(2)中的丙酮正己烷混合溶液是由体积比为1:4的丙酮和正己烷混合而成。更进一步的，所述检测仪器包括气相色谱-电子捕获检测器(gc-ecd)和气相色谱-火焰光度检测器(gc-fpd)；采用气相色谱-电子捕获检测器(gc-ecd)测定标液和样品溶液的有机氯和菊酯类农药，采用气相色谱-火焰光度检测器(gc-fpd)测定基质标液和样品溶液的有机磷类农药。本发明的有益效果：1.本发明所采用的离心分层方式代替ny/t761-2008方法的过滤、震荡及静置30min，极大的缩短提取时间和提高工作效率，更能有效避免乳化现象。2.本发明采用先浓缩后净化的方法，与先净化后浓缩的方法相比较，效果更好，使用体积比为1：4的丙酮正己烷混合溶剂进行定容时，可以保证极性较大的有机磷农药的回收率。3.本发明只需要氮吹1次就能同时测定有机磷、有机氯及菊酯类农药，而ny/t761-2008方法则需要氮吹2次才能达到同样的效果。4.本发明加入由石墨化碳黑、n-丙基乙二胺、失活弗罗里硅土混合而成的净化剂，其作用是去除色素、有机酸等杂质，由该组合物作为净化剂，回收率高，净化效果好。与固相萃取小柱净化相比较，虽然净化效果稍逊色，但极大程度的节约成本和时间。5.本发明检测一个样品需要的溶剂为10ml乙腈，0.6ml丙酮及2.4ml正己烷；而ny/t761-2008需要50ml乙腈，6ml丙酮及16ml正己烷。从耗时来说，本发明处理一个样品只需要1小时，批量处理12个样品不会超过2小时；而ny/t761-2008方法处理1个样品需要3小时，批量处理12个样品需要5小时。本发明上机检测一个样品(双塔进样，可同时测有机磷、有机氯及菊酯)需要20分钟，而ny/t761-2008方法在同样的仪器配备下，检测一个样品需要50分钟。6.本发明有机氯和拟除虫菊酯的检出限与ny/t761-2008相近；有机磷的检出限显著低于ny/t761-2008方法的检出限，也就是说在测有机磷时，本发明的灵敏度更高。7.本发明的测定方法简单、方便、实惠，适用于蔬菜、水果及食用菌的日常监督检测和例行检测，能在地市级、县级质检站能快速、高效、经济的开展蔬菜、水果及食用菌的日常监督抽检和例行抽检。附图说明图1为gc-ecd测定标液有机氯类和菊酯类农药的色谱图；图2为gc-fpd测定基质标液有机磷类农药的色谱图；图3为gc-ecd测定西瓜样品中有机氯类和菊酯类农药的色谱图；图4为gc-fpd测定西瓜样品中有机磷类农药的色谱图；图5为gc-ecd测定黄瓜样品中有机氯类和菊酯类农药的色谱图；图6为gc-fpd测定黄瓜样品中有机磷类农药的色谱图；图7为gc-ecd测定平菇样品中有机氯类和菊酯类农药的色谱图；图8为gc-fpd测定平菇样品中有机磷类农药的色谱图。其中：1.百菌清；2.三唑酮；3.腐霉利；4.硫丹；5.联苯菊酯；6.氯氟氰菊酯；7.氯菊酯；8.氯氰菊酯；9.氰戊菊酯；10.溴氰菊酯；11.敌敌畏；12.乐果；13.毒死蜱；14.马拉硫磷；15.对硫磷；16.三唑磷。具体实施方式下面结合附图对本发明的技术方案作更为详细、完整的说明。单标溶液的配置：准确吸取1ml100ug/ml有机氯或菊酯类农药标准品于10ml容量瓶内，用正己烷定容至10ml，得10ug/ml有机氯或菊酯类农药的单标溶液；准确吸取1ml100ug/ml有机磷类农药标准品于10ml容量瓶内，用丙酮定容至10ml，得10ug/ml有机磷类农药的单标溶液。混合标准品溶液配置：分别准确吸取1ml10ug/ml的有机氯、菊酯类农药的单标溶液于10ml容量瓶内，用正己烷定容至10ml，得到1ug/ml的有机氯和菊酯农药混合标准品溶液；吸取1ml10ug/ml的有机磷类农药于10ml容量瓶内，用丙酮定容至10ml，得到1ug/ml的有机磷混合标准品溶液。基质标液的配置：取5g空白样品按照下述实施例1的步骤(1)、(2)、(3)、(4)同样的前处理方法进行处理。得到空白基质溶液，取1ml1ug/ml的混合标准品溶液于10ml容量瓶内，用空白基质溶液定容至10ml，得0.1ug/ml的基质标液。实施例1检测水果中的农药残留：(1)净化剂的制备：将弗罗里硅土于650℃的马弗炉中烘烤4h，自然冷却至室温，加入5％蒸馏水进行失活处理，所得物料称取100mg，与50mg石墨化碳黑、150mgn-丙基乙二胺混合，得净化剂；(2)丙酮正己烷混合溶液的制备：将体积比为1:4的丙酮和正己烷混合，得丙酮正己烷混合溶液；(3)提取：称取5g空白西瓜样品于50ml离心管中，加入0.5ml1ug/ml的有机氯和菊酯类农药标准品溶液及0.5ml1ug/ml有机磷标准品溶液，涡旋混匀，放置1h，加入1-2g氯化钠，加入10.0ml乙腈，于转速为10000r/min的均质仪中均质提取2min，在转速为5000r/min的条件下离心3min，取6ml上清液于10ml刻度试管中备用；(4)净化：将上清液于50℃的水浴锅中氮吹至近干，加入丙酮正己烷混合溶液定容至3.0ml，涡旋混匀，加入300mg净化剂，涡旋3min，过滤膜，得样品溶液；(5)测定：采用气相色谱-电子捕获检测器(gc-ecd)测定标液和样品溶液的有机氯和菊酯类农药，采用气相色谱-火焰光度检测器(gc-fpd)测定基质标液和样品溶液的有机磷类农药，保留时间定性、采用外标法定量；其中，测定有机氯和菊酯类农药的色谱条件是：色谱柱为db-1熔融石英毛细管柱(30m*0.25mm*0.25um)；进样口温度为200℃，电子捕获检测器温度为320℃；升温程序：初温90℃，以每分钟25℃的速度升温至190℃，保持0分钟，然后以每分钟15℃的速度升温至275℃，保持10分钟；柱流量1ml/min；尾吹40ml/min；测定有机磷类农药的色谱条件为：色谱柱为db-1701熔融石英毛细管柱(30m*0.25mm*0.25um)；进样口温度为220℃，火焰光度检测器温度为250℃；升温程序：初温90℃，以每分钟25℃的速度升温至190℃，保持0分钟，然后以每分钟15℃的速度升温至275℃，保持10分钟；柱流量4.0ml/min；尾吹60ml/min；空气流量100ml/min；氢气流量110ml/min。方法检出限：在本实验条件下，以3倍信噪比(s/n＝3)所对应的标准品浓度为检出限，来计算该方法的检出限，检出限在0.0002mg/kg-0.008mg/kg，详见表1。表1有机氯、拟除虫菊酯及有机磷类农药检测参考数据名称检出限(mg/kg)名称检出限(mg/kg)百菌清0.0002氰戊菊酯0.006三唑酮0.0006溴氰菊酯0.002腐霉利0.0008敌敌畏0.004硫丹0.0006乐果0.006联苯菊酯0.001毒死蜱0.006氯氟氰菊酯0.0006马拉硫磷0.008氯菊酯0.003对硫磷0.006氯氰菊酯0.004三唑磷0.008实施例2检测蔬菜中的农药残留：取5.0g的空白黄瓜样品，按照与实例1相同的方法进行前处理和测定。实施例3检测食用菌中的农药残留：取5.0g的空白平菇样品，按照与实例1相同的方法进行前处理和测定。检测结果：实施例1的精密度及加标回收实验1取5.0g空白西瓜样品，加入1ug/ml的混合标准品溶液，以与实施例1相同的方法进行前处理及测定，进行6次平行实验，计算精密度和回收率，结果见表2。表2检测西瓜农药残留量的精密度及回收率实施例2的精密度及加标回收实验取5.0g空白黄瓜样品，加入1ug/ml的混合标准品溶液，以与实施例1相同的方法进行前处理及测定，进行6次平行实验，计算精密度和回收率，结果见表3。表3检测黄瓜农药残留量的精密度及回收率实施例3，精密度及加标回收实验3取5g空白平菇样品，加入1ug/ml的混合标准品溶液，以与实施例1相同的方法进行前处理及测定，进行6次平行实验，计算精密度和回收率，结果见表4。表4检测平菇农药残留量的精密度及回收率由以上检测数据可以看出，本发明检测水果、蔬菜、食用菌中的农残，精密度高，回收率高，本发明只需要氮吹1次就能同时测定有机磷、有机氯及菊酯类农药，而ny/t761-2008方法则需要氮吹2次才能达到同样的效果。显然，所描述的实施例仅是本发明的个别实施例，而不是全部实施例。并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。当前第1页12