一种高效液相色谱法测定卡托普利片中D-卡托普利和卡托普利有关物质8的方法与流程

本发明属于药物分析
技术领域：
，具体涉及一种高效液相色谱法测定卡托普利片中d-卡托普利和卡托普利有关物质8的方法。
背景技术：
：卡托普利是最早发现的血管紧张素转化酶抑制剂(acei)，是人工合成的非肽类化合物，自20世纪90年代问世以来，已经从治疗高血压及充血性心力衰竭的专用药物转向治疗其他心血管疾病、类风湿性关节炎、肺动脉高压症等疾病的临床用药，具有巨大的临床价值。卡托普利又名(s)-1-(3-巯基-2-甲基-1-氧代丙基)-l-脯氨酸，其结构式如下式ⅰ所示。卡托普利在制备和储存过程中也会有很多相关物质存在。中国药典中只规定了卡托普利二硫化物杂质，在美国药典中只规定了卡托普利二硫化物和3-乙酰硫基-2-甲基丙酸杂质，在欧洲药典中具有杂质a到杂质o共15个杂质，比较特殊的d-卡托普利和卡托普利有关物质8，其结构式如下式ⅱ、式ⅲ。通过对式ⅰ、式ⅱ、式ⅲ的比较可知，d-卡托普利和卡托普利有关物质8为卡托普利的异构体，故d-卡托普利和卡托普利有关物质8的测定就比较困难。经查阅文献可知，目前对卡托普利有关物质的测定方法的报道较少。如中国专利文献cn110146624a公开了一种卡托普利有关物质的检测方法。该检测方法采用c18柱为色谱柱，ph2.0-2.4磷酸盐缓冲液为流动相，流动相a-乙腈、梯度洗脱的方式将卡托普利与各相关物质充分分离并测得各相关物质的含量。但上述检测方法所针对的相关物质中并不包含如上式ⅱ和ⅲ，也即仅适用于分子结构相差较大的相关物质，但不适用于结构相近的异构体之间的分离。另有中国专利文献cn108426956a公开了一种高效液相色谱法测定卡托普利片中杂质f的方法。该专利是以直链淀粉-三(5-氯-2-甲基苯基氨基甲酸酯)涂敷型色谱柱为分离柱、正己烷-无水乙醇-三氟乙酸为流动相，正己烷-无水乙醇-三氟乙酸的体积比为80:20:0.1，检测波长为215nm将杂质f(结构式如下)分离检测。杂质f但该检测方法仅能将杂质f与主峰进行分离，仍不适用于如上式ⅰ、式ⅱ、式ⅲ之间的分析检测过程。针对d-卡托普利和卡托普利有关物质8在中国药典、美国药典和欧洲药典原料标准中均未有其测定方法，在其他期刊文献中也没有记载。在对卡托普利片仿制药研发的过程中，需要对卡托普利片的d-卡托普利和卡托普利有关物质8进行研究，试验过程中发现采用欧洲药典原料标准的有关物质方法测定卡托普利片中的d-卡托普利和卡托普利有关物质8时，出峰时间与卡托普利一致，无法与卡托普利有效分离；欧洲药典原料标准的杂质f方法是采用柱前衍生化后，气相色谱面积归一化法测定含量，该方法存在操作繁琐、测定结果不稳定、重复性较差的问题。技术实现要素：本发明为克服现有技术的上述不足，通过卡托普利片d-卡托普利和卡托普利有关物质8测定方法进行研宄，提供了一种高效液相色谱法测定卡托普利片中d-卡托普利和卡托普利有关物质8的方法。为了实现上述发明目的，本发明提供了如下技术方案：一种高效液相色谱法测定卡托普利片中d-卡托普利和卡托普利有关物质8的方法，其包括将含有卡托普利的供试液通过高效液相色谱进行检测，得到卡托普利、d-卡托普利和卡托普利有关物质8，其中，高效液相色谱检测的条件为：色谱柱为直链淀粉－三(3,5－二甲苯基氨基甲酸酯)涂敷型手性色谱柱；流动相为正己烷-异丙醇-甲醇-三氟乙酸的混合液；洗脱方式为等度洗脱。所述流动相中正己烷-异丙醇-甲醇的体积比为80-95:3-8:3-8。优选地，所述流动相中正己烷-异丙醇-甲醇-三氟乙酸的比例为80-95:3-8:3-8:0.08-0.5。优选地，所述流动相中正己烷-异丙醇-甲醇-三氟乙酸的体积比为90:5:5:0.1。优选地，所述高效液相色谱的检测波长为200-220nm，优选为215nm。优选地，所述d-卡托普利和卡托普利有关物质8的结构式分别如下式ⅱ、ⅲ所示：优选地，所述d-卡托普利和卡托普利有关物质8的含量均采用主成分自身对照法计算得到，计算公式如下：其中，异构体是指d-卡托普利或卡托普利有关物质8。优选地，流速为0.5-1.5ml/min，柱温为20-35℃，进样量为20μl。优选地，所述供试品溶液是由卡托普利片经粉碎后采用溶剂溶解、稀释后过滤得到，过滤所采用的滤膜尺寸为0.22μm。与现有技术相比，本发明所取得的有益效果是：(1)本发明可以定量测定卡托普利片中的d-卡托普利和卡托普利有关物质8的含量，从而有效的控制卡托普利片的质量。(2)本发明提供的方法具有精密度好，分离度好，灵敏度高、重复性好。附图说明图1为溶剂色谱图；图2为实施例1提供的方法检测供试品得到的高效液相色谱图；图3为d-卡托普利标准对照品色谱图；图4为卡托普利有关物质8标准对照品色谱图；图5为卡托普利标准对照品色谱图。具体实施方式下面通过具体实施例对本发明的方法进行说明，以使本发明技术方案更易于理解、掌握，但本发明并不局限于此。下述实施例中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法；所述试剂和材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得。实施例1一种高效液相色谱法测定卡托普利片中d-卡托普利和卡托普利有关物质8的方法，包括如下步骤：(1)d-卡托普利、卡托普利有关物质8和卡托普利贮备液的制备称取d-卡托普利、卡托普利有关物质8和卡托普利对照品各5mg，置于50ml量瓶中，加无水乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为d-卡托普利、卡托普利有关物质8和卡托普利对照品贮备液；(2)系统适用性溶液的制备加入步骤(1)1.0mld-卡托普利、卡托普利有关物质8和卡托普利贮备液，置于10ml量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀，作为系统适用性溶液；(3)供试品溶液的制备称取卡托普利片细粉适量(卡托普利25mg)，置于10ml量瓶中，加入无水乙醇约5ml，超声振摇提取10min，放冷至室温，再用无水乙醇稀释至刻度，摇匀，过0.22μm滤膜，取续滤液，作为供试品溶液；(4)自身对照溶液的制备精密量取供试品溶液1ml，置于250ml量瓶中，以无水乙醇稀释至刻度，摇匀，即得。(5)流动相的制备取正己烷900ml，异丙醇50ml，甲醇50ml，加入三氟乙酸1ml，混匀，即得。(6)色谱系统建立以直链淀粉－三(3,5－二甲苯基氨基甲酸酯)涂敷型手性色谱柱，以正己烷-异丙醇-甲醇-三氟乙酸为流动相，正己烷-异丙醇-甲醇-三氟乙酸的体积比为90:5:5:0.1，检测波长为215nm，流速为1ml/min，柱温为25℃，进样量为20μl；(7)检测分析精密量取系统适用性溶液20μl注入液相色谱仪，出峰顺序为d-卡托普利、卡托普利有关物质8和卡托普利，三者分离度不小于2.0，精密量取自身对照溶液注入液相色谱仪，主峰的信噪比不得小于10；精密量取自身对照溶液20μl注入液相色谱仪，精密量取20μl供试品溶液注入液相色谱仪，记录色谱图；(8)计算依据步骤(7)记录的色谱图，用主成分自身对照法计算卡托普利片中的d-卡托普利和卡托普利有关物质8的含量，即得；具体计算公式如下：注：0.4％＝自身对照溶液占供试品溶液的比例。如图1所示，为溶剂色谱图；图2为上述供试品溶液的高效液相色谱图。其中d-卡托普利、卡托普利有关物质8和卡托普利的出峰时间如下表1。表1实施例1中供试品分离度检测结果如图3、图4、图5分别是d-卡托普利、卡托普利有关物质8和卡托普利的标准对照品高效液相色谱图，分别显示各物质的相对保留时间。系统适用性试验1、重复性考察制备0.1mg/ml的d-卡托普利和卡托普利有关物质8对照品的无水乙醇溶液作为d-卡托普利和卡托普利有关物质8贮备液；将卡托普利片(卡托普利25mg，批号：190103)研成细粉置于10ml量瓶中，加入1.0mld-卡托普利和卡托普利有关物质8贮备液，加入无水乙醇使溶解并稀释至刻度，制成每1ml含卡托普利2.5mg的溶液，摇匀，过滤，作为供试品溶液；精密量取供试品溶液1ml，置于250ml量瓶中，以无水乙醇稀释至刻度，摇匀，即得对照溶液。平行配制六份，精密量取各溶液20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按自身对照法计算异构体的含量。结果如下表2。表2重复性试验结果杂质d-卡托普利％卡托普利有关物质8％10.410.4220.420.4130.410.4140.420.4250.410.4260.420.41平均值0.420.42rsd％1.31.3由表2数据可以看出，采用本发明的方法，相对标准偏差小于2％，具有较好的可重复性。2、灵敏度及精密度考察取卡托普利及d-卡托普利和卡托普利有关物质8对照品适量，按信噪比约为10:1配制成定量限溶液。精密量取溶液20μl，注入液相色谱仪，重复进样6针，记录色谱图。统计结果如下表3。表3灵敏度试验结果由表3数据可以看出，各物质的定量限均小于0.1μg/ml，灵敏度高；而且，信噪比rsd均小于20％，这表明本专利的提供的方法精密度高。最后应当说明的是，以上内容仅用以说明本发明的技术方案，而非对本发明保护范围的限制，本领域的普通技术人员对本发明的技术方案进行的简单修改或者等同替换，均不脱离本发明技术方案的实质和范围。当前第1页12