一种呕吐毒素检测试纸卡的制作方法

本申请属于药物检测技术领域，具体涉及一种呕吐毒素检测试纸卡专利申请事宜。

背景技术：

呕吐毒素(vomitoxin)又名脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol，don)，是一种单端孢霉烯族毒素，主要由禾谷镰刀菌和粉红镰刀菌产生。研究表明，don在体内可能有一定的蓄积，但无特殊的靶器官，具有很强的细胞毒性，可导致动物肠功能紊乱，口腔黏膜和真皮损伤，免疫力下降。人和牲畜误食被毒素污染的粮谷后产生广泛的毒性效应，可引起呕吐、拒食、体重减轻等症状，免疫系统和造血系统受到损害，还具有很强的皮肤毒性和细胞毒性，严重时可损害造血系统造成死亡。don广泛分布于镰刀菌感染后的小麦、大麦、玉米等谷物的籽实中，是一种黄曲霉毒素之后污染最严重的真菌毒素。由于don的危害严重，因此对于谷物及饲料中don残留量有严格的限量标准。

现有技术中，传统的don残留检测方法有微生物学法、荧光法、薄层色谱法、高效液相色谱法、以及液质联用法、气质联用检测法和液相色谱－串联质谱法等多种方法。这些检测方法虽然具有灵敏度高、定量、定性准确等优点。但这些方法的检测成本较高，而且需要专业的技术人员、昂贵的实验仪器及长时间的前期准备工作。因此实际检测应用中受限较多。现有检测技术中，基于免疫学中的抗体对抗原的特异分子识别的检测方法，具有亲合力高、快速、简单、经济实用等优点，能够实现小体积、大通量检测，因此是有毒有害残留物检测技术发展方向之一，也因此，极有必要开发一种新的呕吐毒素检测试纸卡产品，从而为呕吐毒素检测奠定基础。

技术实现要素：

本申请目的在于提供一种呕吐毒素检测试纸卡，从而为相关食品安全奠定检测技术基础。

本申请所采取的技术方案详述如下。

一种呕吐毒素检测试纸卡，包括外部的壳体和壳体内部包裹的试纸条；

所述试纸条，具体结构为：支撑层表面从一端起始至另一端结束，设有依次紧密相连的样品垫、金标抗体结合垫、硝酸纤维素膜和吸收垫；

所述硝酸纤维素膜，膜表面设计有利用呕吐毒素-载体蛋白偶联物溶液印制的检测线（t线）和羊抗鼠igg溶液印制的质控线（c线），其中检测线近样品垫一侧设置；检测线与质控线之间间距可设置为5mm；

所述金标抗体结合垫，为灌注有胶体金标记的抗呕吐毒素单克隆抗体的玻璃纤维棉；标记过程中，金标抗体标记量具体为2.5µl/ml；

所述支撑层，具体例如为聚氯乙烯树脂作为主体成分的pvc板；

所述吸收垫，应当具有较强吸水能力，具体例如为由植物长纤维作为主原料制成的纯白滤纸；具体例如采用370±10g/㎡规格吸水纸，其吸水能力可达750±100g/㎡；

所述样品垫，具体例如由玻璃纤维棉制备而成；

优选设计中，样品垫、金标抗体结合垫、硝酸纤维素膜和吸收垫两两之间的连接处分别部分叠压设计，叠压长度具体例如为2mm左右；

而为确保样品垫、金标抗体结合垫、硝酸纤维素膜和吸收垫在支撑层上的固定，支撑层表面均匀涂布有不干胶，从而便于粘贴样品垫、金标抗体结合垫、硝酸纤维素膜和吸收垫；

所述壳体，材质具体例如为pvc；具体壳体结构设计中：

壳体对应样品垫出设计有加样孔，壳体对应醋酸纤维素膜处设计有观察窗；

进一步优选设计中，样品垫、金标抗体结合垫和吸收垫上方覆盖有胶膜保护层，从而便于试纸条的长期保存；但需要注意的是，样品垫表面的胶膜保护层应当为可分离设计，从而便于检测时加样应用。

所述硝酸纤维素膜，具体例如为mdicnpc-ss24型硝酸纤维素膜产品，该型号产品厚度规格为10μm，具有良好的跑水性能，且具有灵敏度好、抗老化能力强、批间差小等优点，能够较好满足使用需求。

所述玻璃纤维素膜，具体例如为怀远k-75规格产品，其具有纹路均匀致密、亲水性较好、蓄水能力强等优点，能够较好保证最终检测条质量。

所述呕吐毒素检测试纸卡，具体规格而言，试纸条长度为60mm，宽度为2.77mm；而外部所设客体，具体规格为：长度为70mm，宽度为20mm。

总体而言，本申请所提供的试纸卡具有如下技术优点：

1、灵敏高，特异性强；呕吐毒素残留快速检测试纸卡以胶体金标记高亲和力的单克隆抗体制备而成，金标抗体中金颗粒与抗体分子通过异性电荷范德华力相结合，胶体金对单克隆抗体的特异性和亲和力影响很小；

2、操作简单、方便快捷；使用快速检测试纸卡时无需其他任何试剂，只要将处理后的样品溶液用滴管滴入试纸卡加样孔内3-4滴，3-5min即可观察结果；

3、检测结果形象，直观；试纸卡以红色印迹线“|”或“‖”为检测线的阳性和阴性标记，即在硝酸纤维素膜上质控线（c线）显色一条红色即“|”印迹时，表示检测液中呕吐毒素残留含量≥50ng/ml；若硝酸纤维素膜上质控线（c线）和检测线(t线)同时出现两条红色即“‖”印迹时，表示样品溶液中呕吐毒素残留含量＜50ng/ml；结果形象直观，简单准确，不容易出现误判；

4、胶膜的使用可以延长检测结果观察时间，试纸卡稳定性好；本试纸卡样品吸收垫将检测溶液完全吸收，使之与偶联垫上金标抗体充分反应，可以有效减少误差率；还可以防止外界杂质干扰，影响金标抗体与检测抗原的结合；

5、成本低、投资少；使用本实用新型试纸卡，不需要另配复杂的仪器设备和昂贵的试剂，现场检测一步到位，成本低廉，见效快；

6、易于大范围推广应用；本试纸卡操作简单，适合不同类别的人员使用，如实验室检测、海关检疫、卫生监督、规模养殖及个体生产等，具有广阔的市场前景和较大的经济效益和社会效益。

附图说明

图1：结构示意图；

图2：侧视图；

图3：俯视图；

图4：检测结果为阴性的使用状态参考图；

图5：检测结果为阳性的使用状态参考图；

图6：检测结果无效的使用状态参考图；

图中：1、壳体，2、醋酸纤维素膜处胶膜保护层，3、支撑层，4、样品垫，5、金标抗体结合垫，6、醋酸纤维素膜，7、吸收垫，8、加样孔，9、观察窗，10、质控线c，11、检测线t，12、金标抗体结合垫和吸收垫处胶膜保护层，13、标记线。

具体实施方式

下面结合实施例对本申请做进一步的解释说明。在介绍具体实施例前，需要说明的是，下述实施例中涉及到的羊抗鼠igg、抗呕吐毒素单克隆抗体、呕吐毒素-载体蛋白偶联物等，均有商品化成品或者按现有技术常规制备即可，不再赘述。

实施例

如图1、2、3所示，本申请所提供的呕吐毒素检测试纸卡，包括外部的壳体1和壳体内部包裹的试纸条；

所述试纸条，具体结构为：支撑层3表面从一端起始至另一端结束，设有依次紧密相连的样品垫4、金标抗体结合垫5、硝酸纤维素膜6和吸收垫7；

所述硝酸纤维素膜6，膜表面设计有利用呕吐毒素-载体蛋白偶联物溶液印制的检测线（t线）11和羊抗鼠igg溶液印制的质控线（c线）10，其中检测线11近样品垫4一侧设置；检测线11与质控线10之间间距可设置为5mm。

所述金标抗体结合垫5，为灌注有胶体金标记的抗呕吐毒素单克隆抗体的玻璃纤维棉；

所述支撑层3，具体例如为聚氯乙烯树脂作为主体成分的pvc板；

所述吸收垫7，应当具有较强吸水能力，具体例如为由植物长纤维作为主原料制成的纯白滤纸（本实施例采用370±10g/㎡规格吸水纸，其吸水能力可达750±100g/㎡）；

所述样品垫4，具体例如由玻璃纤维棉制备而成。

优选设计中，样品垫4、金标抗体结合垫5、硝酸纤维素膜6和吸收垫7两两之间的连接处分别部分叠压设计，叠压长度具体例如为2mm左右。

而为确保样品垫4、金标抗体结合垫5、硝酸纤维素膜6和吸收垫7在支撑层3上的固定，支撑层3表面均匀涂布有不干胶，从而便于粘贴样品垫4、金标抗体结合垫、5硝酸纤维素膜6和吸收垫7。

所述壳体1，材质具体例如为pvc；具体壳体结构设计中：

壳体1对应样品垫4出设计有加样孔8，壳体1对应醋酸纤维素膜6处设计有观察窗9；

进一步优选设计中，样品垫4、金标抗体结合垫5和吸收垫7上方覆盖有胶膜保护层（2、12），从而便于试纸条的长期保存（制备过程中，通过标记线13确保相关位置对应正确）；但需要注意的是，样品垫表面的胶膜保护层应当为可分离设计，从而便于检测时加样应用。

本实施例所采用硝酸纤维素膜，具体为mdicnpc-ss24型硝酸纤维素膜产品，该型号产品厚度规格为10μm，具有良好的跑水性能，且具有灵敏度好、抗老化能力强、批间差小等优点，能够较好满足使用需求。

所采用玻璃纤维素膜，具体为怀远k-75规格产品，其具有纹路均匀致密、亲水性较好、蓄水能力强等优点，能够较好保证最终检测条质量。

具体制备过程中，质控线：兔抗鼠二抗，用量c3；检测线：抗原浓度5.7mg/ml，用量t15。

需要说明的是，利用上述试纸卡进行检测应用时，需首先对待检样品预处理获得待检液，不同类型待检样品预处理方式可具体参考如下。

饲料样：称取1g磨碎的饲料（粒径1mm左右）至10ml离心管中，加入2ml工作液，剧烈震荡2min，静置2min，取上清液用于检测；

粮食样：称取0.2g粉碎样品至离心管中，加入10g（或10ml）工作液，剧烈震荡2min，静置5min，取上清液用于检测；

尿样：静置2min，取上清液用于检测。

具体检测应用时，将试纸卡平放后，用滴管将待检液滴入加样孔内，滴加2-3滴，3-5min后观察结果。

如图4~图6所示，具体检测结果分析参考如下：

阴性：若硝酸纤维素膜上质控线（c线）和检测线（t线）同时出现两条红色“‖”印迹时，表示样品溶液中呕吐毒素残留含量小于对应检测限，判为阴性；

阳性：若硝酸纤维素膜上质控线（c线）显示一条红色“|”印迹，而检测线（t线）不显色，表示被检测样品溶液中呕吐毒素残留含量大于等于对应检测限，判为阳性；

无效：若硝酸纤维素膜上质控线（c线）不显色红色条带，则无论检测线（t线）是否出现红色印迹，该试纸卡均判为无效。

进一步而言，检测液中若含有呕吐毒素，检测液中的呕吐毒素与检测限(t线)上的呕吐毒素抗原来竞争金标结合垫上金标抗体的同一结合位点，质控线（c线）上的羊抗鼠igg和金标抗体的另一结合位点结合显色，由于金标抗体的量是一定的，若检测液中的呕吐毒素含量≥50ng/ml时，则金标抗体全部和检测液中的呕吐毒素结合，检测线上的呕吐毒素抗原没有结合金标抗体，所以检测限(t线)不显色，即在硝酸纤维素膜上质控线（c线）显色一条红色即“|”印迹；若检测液中的呕吐毒素含量＜50ng/ml，则检测限上的呕吐毒素抗原可结合部分金标抗体，即硝酸纤维素膜上质控线（c线）和检测线(t线)同时出现两条红色即“‖”印迹。

总体而言，利用试纸卡检测判定时，具有操作简单、快速准确、灵敏度高、成本低、稳定性好，可进行批量检测等优点，因此具有较好推广应用价值。