一种检测肿瘤标志物的生物传感器的制作方法

文档序号:21091797发布日期:2020-06-12 17:16阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种检测肿瘤标志物的生物传感器,其特征在于,所述生物传感器由以下步骤制成:

i.使用免疫磁珠来选择性分离靶标;

ii.将适体-触发器结合在靶标上,形成免疫磁珠/靶标/适体-触发器三明治结构;

iii.固定在免疫磁珠表面上的适体-触发器在存在圆模板1和dna聚合酶的情况下启动线性滚环扩增,生成线性滚环扩增的产物;

iv.god标记的辅助引物2和圆模板2与步骤iii中的线性滚环扩增的产物结合,形成三元复合物,辅助引物2启动分支滚环扩增,生成分支产物;

v.god标记的辅助引物1和圆模板1与步骤iv中的分支产物结合,形成另一个三元复合物并启动二级分支滚环扩增,获得所述生物传感器。

2.根据权利要求1所述的一种检测肿瘤标志物的生物传感器,其特征在于,所述靶标为肿瘤标志物;所述dna聚合酶为phi29-dna聚合酶;所述god标记采用的交联剂为磺基琥珀酰亚胺基-4-(n-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-甲酸。

3.根据权利要求1所述的一种检测肿瘤标志物的生物传感器,其特征在于,所述圆模板1的核酸序列为seqidno.1、所述圆模板2的核酸序列为seqidno.2、所述适体的核酸序列为seqidno.3、所述触发器的核酸序列为seqidno.4或seqidno.5;所述辅助引物1的核酸序列为seqidno.6;所述辅助引物2的核酸序列为seqidno.7。

4.根据权利要求1所述的一种检测肿瘤标志物的生物传感器,其特征在于,所述辅助引物1和辅助引物2的5’端均经过巯基修饰。

5.根据权利要求1所述的一种检测肿瘤标志物的生物传感器,其特征在于,所述靶标为血小板衍生生长因子-bb。

6.如权利要求1-5任一项所述的检测肿瘤标志物的生物传感器的检测方法,包括以下步骤:

a:将所述生物传感器置于含有ph指示剂和甲醇的葡萄糖溶液中孵育;

b:将孵育后的上清进行光谱扫描。

7.根据权利要6所述的检测肿瘤标志物的生物传感器的检测方法,其特征在于,所述步骤a中,所述ph指示剂为溴甲酚紫;所述葡萄糖溶液的浓度为250mm-1000mm;所述甲醇的浓度为0-25‰;所述孵育的温度为25-45℃。

8.根据权利要7所述的检测肿瘤标志物的生物传感器的检测方法,其特征在于,所述葡萄糖溶液的浓度为500mm;所述甲醇的浓度为5‰;所述孵育的温度为37℃。

9.根据权利要6所述的检测肿瘤标志物的生物传感器的检测方法,其特征在于,所述步骤b中,所述光谱扫描的参数为:光谱范围在350nm至700nm之间,以2nm的间隔进行光谱扫描,并测量在590nm和430nm处的相应吸光度。

10.如权利要1-5任一项所述的检测肿瘤标志物的生物传感器在制备检测肿瘤的试剂盒中的应用。


技术总结
本发明公开了一种检测肿瘤标志物的生物传感器,本生物传感器基于葡萄糖氧化酶(GOD)介导的比色pH传感的敏感分析技术,用于癌症生物标志物蛋白检测,将以下三个方面有效地整合到了本发明中:磁分离,信号放大和信号转换。磁分离和信号放大过程可以有效地排除复杂成分的干扰并克服检测低丰度目标的挑战。产酸酶GOD介导的信号转化可导致pH值急剧下降,为pH比色法提供了前提条件。基于pH比色检测技术的发展对于促进pH传感在POCT中的实际应用具有重要价值,并且可以为其他高性能传感器的开发提供指导。

技术研发人员:苗向阳;朱小立;毛东升;王兆寅;严丹红;朱志强;葛林
受保护的技术使用者:苏州健雄职业技术学院
技术研发日:2020.02.20
技术公布日:2020.06.12
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