一种磷霉素氨丁三醇异构体分析方法与流程

本发明涉及药物分析技术领域，更具体地说，它涉及一种磷霉素氨丁三醇异构体分析方法。

背景技术：

磷霉素氨丁三醇，英文名为fosfomycintrometamol，化学名称为(1r,2s)-(1,2-环氧丙基)膦酸·2-氨基-2-(羟甲基)-1,3-丙二醇盐(1:1)，化学式为c7h18no7p，分子量为259.20，cas号为78964-85-9。

磷霉素氨丁三醇的适应症为治疗敏感细菌引起的急性单纯性下尿路感染(如急性膀胱炎、慢性膀胱炎急性发作、急性尿道膀胱综合征、非特异性尿道炎，孕期无症状的菌尿症，手术后的尿路感染)和预防外科手术中尿路感染及经尿路诊断手法引起的感染。

各国药典磷霉素氨丁三醇的质量标准中有关杂质检测均采用高效液相色谱法，且色谱条件相同：色谱柱为氨丙基键合硅胶柱，流动相为10.89g/l磷酸二氢钾溶液，检测器为示差检测器。改色谱条件可以将部分杂质有效检出，但对非对映异构体和对映异构体的检测却不适用。

因此，需要提出一种新的方案来解决上述问题。

技术实现要素：

针对现有技术存在的不足，本发明的目的一在于提供一种磷霉素氨丁三醇异构体分析方法，其具有操作简便、快速的优点。

为实现上述目的一，本发明提供了如下技术方案：

一种磷霉素氨丁三醇异构体分析方法，包括以下步骤：

s1，用正相手性柱，以乙腈:甲醇:醋酸:三乙胺＝80:20:1:0.1为流动相，流速为0.8-1.2ml/min，柱温27-33℃；运行时间35min，进样量：20μl；

s2，分别称取磷霉素氨丁三醇1000mg、非对映异构体1mg、对映异构体1mg，加水稀释至含磷霉素氨丁三醇100mg/ml，非对映异构体0.1mg/l，对映异构体0.1mg/l的溶液；对非对映异构体、磷霉素氨丁三醇、对映异构体依次出峰，非对应异构体和磷霉素氨丁三醇的分离度不小于0.8；

s3，称取磷霉素氨丁三醇对照品适量，分别加水溶解并定量稀释制成每1ml中含磷霉素氨丁三醇0.05mg/l、0.10mg/l和0.15mg/l的溶液，作为对照品溶液(1)、(2)、(3)；

s4，精密量取对照品溶液(1)、(2)、(3)各20μl，记录色谱图，以对照品溶液浓度的对数值与相应峰面积的对数值计算线回归方程，相关系数r≥0.99。

s4，称取磷霉素氨丁三醇样品100mg，置10ml量瓶中，加5ml水超声溶解，用水稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；

s5，精密量取20μl供试品溶液注入液相色谱仪，记录色谱图，供试品溶液色谱图中如有异构体峰，用线性回归方程计算。

进一步优选为，步骤s1中，所述流动相的流速为1ml/min。

进一步优选为，步骤s1中，所述柱温为30℃。

进一步优选为，步骤s1中，所述正相手性柱采用chiralpak，qn-ax，0.46*150mm，5μm。

综上所述，与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

本发明通过优化色谱条件，采用正相色谱法，使用正相hplc系统，完成非对映异构体、对映异构体进行分离分析，并以乙腈:甲醇:醋酸:三乙胺＝80:20:1:0.1为流动相，采用正相手性柱进行分离，最终对非对映异构体和对映异构体实现完全分离，分离度大于0.8，且分析时间仅为35min，具有操作简便、快速的优点。

附图说明

图1为本发明实施例中磷霉素氨丁三醇系统适用性线性标准曲线；

图2为本发明实施例中磷霉素氨丁三醇线性标准曲线；

图3为本发明实施例中磷霉素氨丁三醇对映异构体线性标准曲线；

图4为本发明实施例中对苯乙胺盐非对映异构体线性标准曲线。

具体实施方式

下面结合附图和实施例，对本发明进行详细描述。

实施例：

s1，用正相手性柱，以乙腈:甲醇:醋酸:三乙胺＝80:20:1:0.1为流动相，流速为1ml/min，柱温30℃；运行时间35min，进样量：20μl；

s2，分别称取磷霉素氨丁三醇1000mg、非对映异构体1mg、对映异构体1mg，加水稀释至含磷霉素氨丁三醇100mg/ml，非对映异构体0.1mg/l，对映异构体0.1mg/l的溶液；对非对映异构体、磷霉素氨丁三醇、对映异构体依次出峰，非对应异构体和磷霉素氨丁三醇的分离度不小于0.8；

s3，称取磷霉素氨丁三醇对照品适量，分别加水溶解并定量稀释制成每1ml中含磷霉素氨丁三醇0.05mg/l、0.10mg/l和0.15mg/l的溶液，作为对照品溶液(1)、(2)、(3)；

s4，精密量取对照品溶液(1)、(2)、(3)各20μl，记录色谱图，以对照品溶液浓度的对数值与相应峰面积的对数值计算线回归方程，相关系数r≥0.99，磷霉素氨丁三醇系统适用性溶液的峰面积见表1，标准曲线见附图1。

s4，称取磷霉素氨丁三醇样品100mg，置10ml量瓶中，加5ml水超声溶解，用水稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；

s5，精密量取20μl供试品溶液注入液相色谱仪，记录色谱图，供试品溶液色谱图中如有异构体峰，用线性回归方程计算。

专属性实验结果

专属性：稀释剂色谱图中，空白溶液无干扰；对非对映异构体、磷霉素氨丁三醇、对映异构体依次出峰，非对映异构体峰和磷霉素氨丁三醇峰的分离度为0.94大于0.8。

系统适应性：以对照品溶液浓度的对数值与相应峰面积的对数值计算性回归方程，r²为0.9816，相关系数r为0.99；连续5针对照品溶液#3，峰面积的rsd％为1.3％，小于3.0％，综上符合系统适用性的要求。

表1磷霉素氨丁三醇系统适用性溶液

配制磷霉素氨丁三醇储备液：精密称取磷霉素氨丁三醇10.31mg，加水溶液并稀释至10ml，混匀后即得。

配制对苯乙胺盐非对映异构体杂质储备液：精密称取非对映异构体14.34mg，加水溶液并稀释至10ml，混匀后即得。

配制对映异构体杂质储备液：精密称取对映异构体20.08mg，加水溶液并稀释至10ml，混匀后即得。

配制检测限溶液：取磷霉素氨丁三醇、对映异构体储备液、非对映异构体储备液各0.4ml于10ml容量瓶中，加入稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得。

配制磷霉素氨丁三醇、对映异构体、对苯乙胺盐非对映异构体线性溶液：

l1：(0.05mg/ml)：精密量取l2线性溶液7.0ml置10ml容量瓶

l2：(0.07mg/ml)：精密量取l3线性溶液7.0ml置10ml容量瓶

l3：(0.10mg/ml)：精密量取l4溶液8.0ml置10ml容量瓶

l4：(0.13mg/ml)：精密量取l5溶液8.0ml置10ml容量瓶

l5：(0.16mg/ml)：精密量取l6线性溶液8.0ml置10ml容量瓶

l6：(0.20mg/ml)：精密量取l7溶液7.0ml置10ml容量瓶

l7：(0.30mg/ml)：精密量取磷霉素氨丁三醇储备溶液、对映异构体、非对映异构体各3.0ml置10ml容量瓶(0.30mg/ml)。

进样程序

依次将稀释液空白溶液进样3针、分离度溶液进样一针、空白溶液进样1针，检测限溶液进样3针，定量限溶液进样6针，作为检测检测限和定量限序列。

依次将空白溶液进样3针，分离度溶液，空白溶液各进样1针，线性各浓度水平的点，各进样3针。试验结果见表2-7，以及附图2-4。

其中确定已知杂质的校正因子(标准曲线法测定)，计算公式如下式，若计算值在0.9-1.1之间，可近似记为1，在0.9-1.1之外的，按实际数值记。

表2检测限结果

表3定量限结果

表4磷霉素氨丁三醇线性

表5磷霉素氨丁三醇对映异构体

表6对苯乙胺盐非对映异构体

表7校正因子

以上所述仅是本发明的优选实施方式，本发明的保护范围并不仅局限于上述实施例，凡属于本发明思路下的技术方案均属于本发明的保护范围。应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理前提下的若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。