一种鬼针草药材、颗粒及标煎粉的快速多信息薄层鉴别方法与流程

本发明涉及一种鬼针草药材、颗粒及标煎粉的快速多信息薄层鉴别方法。属于中药的薄层鉴别领域。即，采用薄层色谱鉴别，在同一块薄层板上，4种不同的检视条件下，共检视到鬼针草药材、颗粒及标煎粉的6种信息斑点。

背景技术：

所谓的快速多信息薄层鉴别方法，顾名思义就是薄层鉴别简便、快捷、高效，供试品溶液和对照药材溶液，不需要反复提纯处理，无蒸发、浓缩等污染环境的操作程序，用适宜的溶剂超声后，都不需滤过，上清液点样、展开、检视、即可，很快就能得到薄层结果。所谓的多信息系指一块薄层板，展开1次，可获得不同检视条件下的多种信息斑点。与常规的薄层鉴别相比，大幅度提高了被检测物的质量可控性，有利于市场质量监督，确保人民用药的安全与有效。

鬼针草为菊科植物鬼针草bidenspilosal.的全草，为中国民间常用草药，有清热解毒、散瘀活血的功效，主治上呼吸道感染、咽喉肿痛、急性阑尾炎、急性黄疸型肝炎、胃肠炎、风湿关节疼痛、疟疾，外用治疮疖、毒蛇咬伤、跌打肿痛。主含黄酮类，如金丝桃苷、奥卡宁、海生菊苷、槲皮素和其与糖形成的苷类，但还未收入中国药典，所以有关其法定质量标准还无报道。仅查阅到一篇^【1】“山西省鬼针草药材质量标准研究”的硕士学位论文，描述了对鬼针草的薄层鉴别方法，其供试品溶液的制备方法是：取鬼针草药材粉末5.0g，加甲醇50ml，加热回流2小时，滤过，滤液蒸干，残渣用乙酸乙酯10ml，使溶解，用蒸馏水萃取2次，每次10ml，合并水层，蒸干，残渣加甲醇2ml，使溶解，作为供试品溶液。另取芦丁、金丝桃苷适量，分别加甲醇制成每1ml含芦丁、金丝桃苷各0.2mg的溶液，作为对照品溶液。吸取供试品和对照品溶液各5μl，分别点于同一硅胶g薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5∶3∶1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝乙醇溶液，干燥后，置紫外光灯365nm下，检视斑点颜色。该方法鬼针草取样量大，要5.0g药材；供试品溶液制备花费时间长，至少要4小时；以对照品为对照，斑点单一，检测指标少，不利于多指标质量监督。有关其水煎煮，制备的颗粒和标煎粉的薄层鉴别，以及鬼针草药材、颗粒及标煎粉的快速多信息薄层鉴别方法均未查阅到文献报道。

为快速多信息控制鬼针草药材、颗粒及标煎粉质量，并为其制备工艺提供科学依据，本着简便、快捷、低成本、高效率、多信息的宗旨，对鬼针草药材、颗粒及标煎粉进行了专题薄层鉴别研究。获得了一套简便、快捷、无环境污染的鬼针草药材、颗粒及标煎粉的快速多信息薄层鉴别方法。下面就鬼针草药材、颗粒及标煎粉的制备工艺描述如下：

鬼针草药材系指将采集的鬼针草，除去杂质，迅速洗净，干燥，切断，即得。

鬼针草颗粒系指将鬼针草药材，用水煎煮2次，每次1～2小时，滤过，合并滤液，减压浓缩到适宜的相对密度，喷雾干燥，将干燥粉，加适量糊精，混合均匀，制成颗粒，即得。

鬼针草标煎粉系指将鬼针草药材，用水煎煮2次，每次1小时，滤过，合并滤液，常温浓缩到适宜相对密度，置60℃烘箱内，烘干，粉碎，即得。

技术实现要素：

首次创建了一种鬼针草药材、颗粒及标煎粉的快速多信息薄层鉴别方法。即：用简便、快捷的前处理方法得到供试品与药材溶液，分别点于同一块薄层板上，展开后，在4种不同的检视条件下，检视到鬼针草药材、颗粒及标煎粉的6种信息斑点。既有呈现荧光的，又有无荧光的，还有遇10％硫酸乙醇溶液，激发的荧光斑点和显色的斑点，它们相互交错，但互不干扰，发挥了不同检视条件下的信息斑点互补。与常规的薄层鉴别相比，不但大幅度提高了被鉴别物的质量可控性，有利于质量监督，而且方法简便、快捷，高效率、成本低、无环境污染。

本发明解决其技术问题所采用的方案为：

取鬼针草颗粒和鬼针草标煎粉各0.5g，分别加甲醇3ml，超声处理10分钟，离心，上清液作为供试品溶液；另取鬼针草药材粉末0.2g，加甲醇2ml，超声处理15分钟，离心，上清液作为药材溶液；吸取颗粒供试品溶液4μl、标煎粉供试品溶液6μl、药材溶液6μl，分别点于同一硅胶gf254薄层板上，以体积比5∶2∶0.2∶0.2的乙酸乙酯-甲醇-甲酸-水为展开剂，展开，取出，热风吹干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与鬼针草药材色谱相应的位置上，显相同的亮蓝色荧光主斑点；置紫外光灯254nm下检视，供试品色谱中，在与鬼针草药材色谱相应的位置上，显相同颜色主斑点；喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与鬼针草药材色谱相应的位置上，显相同的蓝绿色荧光主斑点；置暗室内透过灯光检视，供试品色谱中，在与鬼针草药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点。

本发明的原理如下：

依据中药各有效成分的化学结构与性质，遵循相似相容的提取原则，采用适宜的提取溶剂，简便、快捷地制备供试品与对照药材溶液。再采用适宜的展开剂，进行展开，各种化学成分就会随着选用的展开剂，依据吸附、解吸附、再吸附、再解吸附的能力不同，而在薄层板上得以良好分离。再借助各种极性近似的有效成分，在同一块薄层板上，不同的检视条件下，虽然重叠，但在不同的层次上，互不干扰，呈现出各自不同的颜色斑点，获得多信息的薄层色谱图。

本发明的创新点及有益效果如下：

1.首次创建了一种鬼针草药材、颗粒及标煎粉的快速多信息薄层鉴别方法。即：用简便、快捷的前处理方法得到供试品与药材溶液，分别点于同一块薄层板上，展开后，在4种不同的检视条件下，检视到鬼针草药材、颗粒及标煎粉的6种信息斑点。既有呈现荧光的，又有无荧光的，还有遇10％硫酸乙醇溶液，激发的荧光斑点和显色的斑点，它们相互交错，但互不干扰，发挥了不同检视条件下的信息斑点互补。与常规的薄层鉴别相比，不但大幅度提高了被鉴别物的质量可控性，有利于质量监督，而且方法简便、快捷，高效率、成本低、无环境污染。

2.以体积比5∶2∶0.2∶0.2的乙酸乙酯-甲醇-甲酸-水为展开剂，展开鬼针草药材、颗粒及标煎粉后，置紫外光灯365nm下检视，药材和供试品都检视到1个亮蓝色荧光斑点(图1)；置紫外光灯254nm下检视，药材检视到2个棕褐色斑点，鬼针草标煎粉检视到3～4个棕褐色斑点、颗粒检视到5～6个棕褐色斑点(图2)，以此揭示了喷雾干燥的颗粒化学成分多于常温浓缩的标煎粉，且加热提取的颗粒与标煎粉成分，都多于未提取的药材；对比图1和图2斑点的形状和大小，荧光斑点和棕褐色斑点不是同一化合物。喷雾10％硫酸乙醇溶液显色后，再置紫外光灯365nm下检视，药材和供试品都呈现了1个清晰的蓝绿色荧光主斑点(图3)，且所有被检测物的斑点强度和大小一致，该斑点又与图1、2相对应的斑点rf值不同，不是同一化合物，是喷雾硫酸乙醇溶液显色后，激发的新成分斑点；置暗室内透过灯光检视，药材和供试品都检视到2个棕红色的斑点，与图1、2、3图中的斑点对比，其rf值、斑点的形状，剂量多少，又与其它斑点不同，为硫酸显色后的新成分。这样，在4种不同的检视条件下，共检出6个信息斑点，即，显色前的3个斑点和显色后的3个斑点。它们相互交错，但在各自的检视条件下互不干扰，发挥了不同检视条件下的斑点互补作用。

3.本鉴别的鬼针草药材虽然属于全草类，含有大量的叶绿素，其在紫外光灯365nm下是红色的荧光斑点，干扰描述。但采用的展开剂，将叶绿素红色斑点推到了薄层板的最前沿(图1)，使其超出所规定的rf值0.2～0.8的范围，加上限定的亮蓝色荧光主斑点，使红色的叶绿素荧光斑点不再干扰结果判断。省略了去除叶绿素的提纯处理，节约了对照药材的前处理时间。

4.在4种检视条件下，图1、2中呈现的是偏脂溶性成分斑点，图3、4中呈现的是水溶性较大的成分，而且含量也较偏脂溶性成分高，体现了传统水煎煮的治疗效果，其功效成分多是水溶性的。

5.本鉴别方法只需鬼针草药材0.2g、颗粒和标煎粉各0.5g、甲醇共8ml、时间20分钟，即可获得供试品和药材溶液，加上展开剂12ml，展开时间30分钟，总花费1小时，即可对鬼针草颗粒和标煎粉质量做出多指标信息的评价，简便、快捷，具有较高的实用价值。

附图说明

图1为鬼针草药材、颗粒及标煎粉在紫外光灯365nm下检视的薄层tlc图。

图2为鬼针草药材、颗粒及标煎粉在紫外光灯254nm下检视的薄层tlc图。

图3为鬼针草药材、颗粒及标煎粉用10％硫酸乙醇溶液显色后，在紫外光灯365nm下检视的薄层tlc图。

图4为鬼针草药材、颗粒及标煎粉用10％硫酸乙醇溶液显色后，置暗室内透过灯光检视的薄层tlc图。

图1、2、3、4为同一块薄层板，不同检视条件下的薄层色谱图，其中，1.2.3.为鬼针草药材；4.为鬼针草标煎粉；5.6.为鬼针草颗粒。

本发明具体实施方式如下：

取鬼针草颗粒和鬼针草标煎粉各0.5g，分别加甲醇3ml，超声处理10分钟，离心，上清液作为供试品溶液；另取鬼针草药材粉末0.2g，加甲醇2ml，超声处理15分钟，离心，上清液作为药材溶液；吸取颗粒供试品溶液4μl、标煎粉供试品溶液6μl、药材溶液6μl，分别点于同一硅胶gf254薄层板上，以体积比5∶2∶0.2∶0.2的乙酸乙酯-甲醇-甲酸-水为展开剂，展开，取出，热风吹干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与鬼针草药材色谱相应的位置上，显相同的亮蓝色荧光主斑点；置紫外光灯254nm下检视，供试品色谱中，在与鬼针草药材色谱相应的位置上，显相同颜色主斑点；喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与鬼针草药材色谱相应的位置上，显相同的蓝绿色荧光主斑点；置暗室内透过灯光检视，供试品色谱中，在与鬼针草药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点。

参考文献

【1】山西省鬼针草药材质量标准研究，山西医科大学硕士学位论文，布紫云，2015.05.20。