一种检测嘧草醚和其有关物质的方法与流程

本发明涉及药物检测技术领域，尤其涉及一种检测嘧草醚和其有关物质的方法。

背景技术：

嘧草醚(pyriminobac-methyl)是日本组合化学研发的一种内吸传导型专业除稗剂，属嘧啶水杨酸类除草剂，嘧草醚原药中含(e)-异构体92.92％、(z)-异构体4.5％，外观为淡黄色晶粒，其化学结构式如式(i)所示：

醚草醚通过杂草的茎叶和根吸收，并迅速传导至全株，抑制乙酰乳酸合成酶(als)和氨基酸的生物合成，从而抑制和阻碍杂草体内的细胞分裂，使杂草停止生长，最终使杂草白化而枯死。在防治适期内用药，能有效防除稗草和小龄千金子，尤其是对抗性水田稗草有特异的高活性，从水田稗草发生前到3叶期，以30-120ga.i./hm²低药量使用，用药不受雨水影响，与其他农药的混配性好，药效期长达40-60d，对直播水稻和移栽水稻有高的安全性，对后茬作物、人畜及环境均安全。目前，对嘧草醚的研究主要集中于其应用技术开发与推广，有关其分析方法报道较少。文献“刘淑杰，吴公信，粱敏.嘧草醚原药的高效液相色谱分析[j]，农药，2011,50(9):659-66”中公开了嘧草醚原药的高效液相色谱检测方法，但其嘧草醚的出峰较早不利于分开杂质峰。

技术实现要素：

基于背景技术存在的技术问题，本发明提出了一种检测嘧草醚和其有关物质的方法，本发明定量准确、重复性好、分析速度快、线性关系良好、操作简便、各色谱峰能有效分离，可以准确控制嘧草醚质量。

本发明提出的一种检测嘧草醚和其有关物质的方法，采用高效液相色谱法检测，其中，高效液相色谱条件为：色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱，流动相a为乙腈，流动相b为水，进行梯度洗脱，所述梯度洗脱程序为：0min时，流动相a的比例为30％，流动相b的比例为70％；0-10min内，流动相a的比例从30％渐变为50％；10-20min内，流动相a的比例从50％渐变为70％；20-30min内，流动相a的比例从70％渐变为90％；30-40min内，流动相a的比例从90％渐变为30％；40-45min内，流动相a的比例维持30％。

优选地，色谱柱的规格为4.6×150mm，粒径为5μm。

优选地，色谱柱为依利特ods2c18色谱柱。

优选地，检测器为dad紫外检测器，检测波长为252-256nm。

优选地，检测波长可以为252、253、254、255或256nm。

优选地，检测波长为254nm。

优选地，流速为0.55-0.65ml/min。

优选地，流速可以为0.55、0.56、0.57、0.58、0.59、0.6、0.61、0.62、0.63、0.64或0.65ml/min。

优选地，流速为0.6ml/min。

优选地，柱温为35-40℃。

优选地，柱温可以为35、35.5、36、36.5、37、37.5、38、38.5、39、39.5或40℃。

优选地，柱温为37℃。

优选地，进样量为1μl。

本发明按照外标法计算嘧草醚的含量，按照面积归一法计算有关物质的含量。

溶液配制：

标准品溶液：称取嘧草醚标准品0.05g(精确至0.0002g)于100ml容量瓶中，加甲醇溶解，超声水浴中振荡2min，使试样完全溶解，冷却至室温，再用甲醇定容，摇匀备用。

试样溶液：称取嘧草醚试样0.05g(精确至0.0002g)于100ml容量瓶中，加甲醇溶解，超声水浴中振荡2min，使试样完全溶解，冷却至室温，再用甲醇定容，摇匀备用。

发明人用紫外分光光度计对嘧草醚标准品进行全波长190-400nm扫描，其紫外光谱图如图1所示，由图1可以看出嘧草醚的最大吸收波长为254nm，故最终选择254nm作为检测波长。

发明人通过多次配比试验，最终确定上述色谱条件，使得各色谱峰形尖锐、对称，保留时间适中，达到简便、快捷的要求，各色谱峰分离度良好，典型图谱参见图2和表1。

表1各色谱峰分离情况

由表1可以看出，各色谱峰形尖锐、对称，保留时间适中，各色谱峰分离度良好。

发明人取嘧草醚标准品配制浓度为0.2mg/ml、0.4mg/ml、0.6mg/ml、0.8mg/ml、1mg/ml的系列线性溶液，以浓度为横坐标、嘧草醚峰面积为纵坐标绘制标准曲线，测得其线性回归方法为y＝3.125x+0.819，r＝0.9998，可以看出本发明所述色谱条件，在0.2-1mg/ml的浓度范围内，线性关系良好，r达到0.999以上。

发明人对同一试样溶液连续进样6次重复，测定嘧草醚的平均含量为98.57％，标准偏差为0.21％，表明本发明所述色谱条件精密度较高。

发明人采用加标准品回收法检测色谱条件的准确度，结果见表2：

表2准确度测定结果

由上表可以看出，测得嘧草醚的平均回收率为100.2％，说明本发明所述方法准确度良好。

发明人通过筛选合适的色谱条件，使得本发明所述方法具有定量准确、重复性好、分析速度快、线性关系良好、操作简便、各色谱峰能有效分离等特点。在实际生产过程中能正确指导工业化生产，准确控制产品质量，是分析嘧草醚较为理想的方法。

附图说明

图1为嘧草醚的紫外光谱图。

图2为实施例1中试样溶液的色谱图。

图3为对比例中试样溶液的色谱图。

具体实施方式

下面，通过具体实施例对本发明的技术方案进行详细说明。

实施例1

一种检测嘧草醚和其有关物质的方法，采用agilent1260高效液相色谱仪检测，其中，高效液相色谱条件为：色谱柱为依利特ods2c18色谱柱(4.6×150mm，5μm)，流动相a为乙腈，流动相b为水，进行梯度洗脱，所述梯度洗脱程序为：0min时，流动相a的比例为30％，流动相b的比例为70％；0-10min内，流动相a的比例从30％渐变为50％；10-20min内，流动相a的比例从50％渐变为70％；20-30min内，流动相a的比例从70％渐变为90％；30-40min内，流动相a的比例从90％渐变为30％；40-45min内，流动相a的比例维持30％；

检测器为dad紫外检测器，检测波长为254nm，流速为0.6ml/min，柱温为37℃，柱温箱为autoscienceat-330，进样量为1μl。

溶液配制：

标准品溶液：用mettlertoledo-me104e万分之一电子天平称取嘧草醚标准品0.05g(精确至0.0002g)于100ml容量瓶中，加甲醇溶解，用kq-250b型超声波清洗器超声水浴中振荡2min，使试样完全溶解，冷却至室温，再用甲醇定容，摇匀备用。

试样溶液：用mettlertoledo-me104e万分之一电子天平称取嘧草醚试样0.05g(精确至0.0002g)于100ml容量瓶中，加甲醇溶解，用kq-250b型超声波清洗器超声水浴中振荡2min，使试样完全溶解，冷却至室温，再用甲醇定容，摇匀备用。

操作方法：按照上述色谱条件设置仪器参数，待仪器基线稳定后，取标准品溶液连续进样数次，计算各次响应值的重复性，待相邻2次的响应值变化小于1.0％时，按照标准品溶液、试样溶液、试样溶液、标准品溶液的顺序进样，并记录色谱图。

计算方法：

试样中嘧草醚质量分数x(％)＝a2·m1·p/a1·m2；

式中：a1为测得的2次标准品溶液中嘧草醚(z)-异构体、嘧草醚(e)-异构体的峰面积之和的平均值；

a2为测得的2次试样溶液中嘧草醚(z)-异构体、嘧草醚(e)-异构体的峰面积之和的平均值；

m1为标准品的质量(g)；

m2为试样的质量(g)；

p为标准品中嘧草醚(z)-异构体、嘧草醚(e)-异构体的质量分数之和。

测得试样中嘧草醚含量为98.53％。

典型色谱图参见图2。

实施例2

一种检测嘧草醚和其有关物质的方法，采用agilent1260高效液相色谱仪检测，其中，高效液相色谱条件为：色谱柱为依利特ods2c18色谱柱(4.6×150mm，5μm)，流动相a为乙腈，流动相b为水，进行梯度洗脱，所述梯度洗脱程序同实施例1；

检测器为dad紫外检测器，检测波长为252nm，流速为0.65ml/min，柱温为35℃，柱温箱为autoscienceat-330，进样量为1μl。

溶液配制、操作方法、计算方法同实施例1，测得试样中嘧草醚含量为98.48％。

实施例3

一种检测嘧草醚和其有关物质的方法，采用agilent1260高效液相色谱仪检测，其中，高效液相色谱条件为：色谱柱为依利特ods2c18色谱柱(4.6×150mm，5μm)，流动相a为乙腈，流动相b为水，进行梯度洗脱，所述梯度洗脱程序同实施例1；

检测器为dad紫外检测器，检测波长为256nm，流速为0.55ml/min，柱温为40℃，柱温箱为autoscienceat-330，进样量为1μl。

溶液配制、操作方法、计算方法同实施例1，测得试样中嘧草醚含量为98.51％。

对比例

按照文献“刘淑杰，吴公信，粱敏.嘧草醚原药的高效液相色谱分析[j]，农药，2011,50(9):659-66”中公开的嘧草醚原药的高效液相色谱检测方法，对实施例1中嘧草醚试样进行检测；

溶液配制、操作方法同实施例1，试样溶液的检测结果参见图3。

对图2、表1、图3进行比较，可以看出文献中所述方法杂质检出个数较少，各杂质不能有效分离。

以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。