氢溴酸沃替西汀及其有关物质的检测方法和应用与流程

本发明涉及药物分析
技术领域：
，尤其是涉及一种氢溴酸沃替西汀及其有关物质的检测方法和应用。
背景技术：
：氢溴酸沃替西汀(vortioxetinehydrobromide)，化学名1-[2-(2,4-二甲基苯硫基)苯基]哌嗪溴化氢盐，其分子式是c18h23brn2s，分子量379.36，cas号为960203-27-4，无立体构型，其结构式为：氢溴酸沃替西汀是由丹麦灵北和日本武田制药公司研发的一种新型抗抑郁药，用于抑郁症及焦虑症的治疗。2013年9月30日获得美国fda批准上市，商品名brintellix，用于治疗成人重度抑郁症。同年10月，沃替西汀的上市许可申请获得了欧洲药品管理局人用医药产品委员会(chmp)的积极意见，chmp建议批准brintellix用于重度抑郁症成人患者的治疗。为了确保氢溴酸沃替西汀生产过程中质量的控制，我们需要对药物合成工艺中的有关物质进行研究、检测及监控，建立专属性强、灵敏可靠的分析方法，对氢溴酸沃替西汀及其有关物质进行控制，从而提高产品的质量标准。对于氢溴酸沃替西汀及其有关物质的研究，中国药典、美国药典及欧洲药典均没有相关的检测方法。公开号为cn106596798a、cn109521102a和cn106568862a的专利申请文件中，能够分别将氢溴酸沃替西汀相关工艺的有关物质分离。但是，因为合成工艺不同，导致产生的工艺杂质也不相同，现有技术提供的液相检测方法不能完全将多个杂质分离开，重现性差、专属性不强、分离度也不符合标准。因此，需要一种全新的氢溴酸沃替西汀及其有关物质的分析方法，在保证氢溴酸沃替西汀及其有关物质高效分离的同时，使其具有良好的专属性、重复性与准确度，从而更好的实现对氢溴酸沃替西汀的质量控制。有鉴于此，特提出本发明。技术实现要素：本发明的第一目的在于提供氢溴酸沃替西汀及其有关物质的检测方法，以解决现有技术中存在的重现性差、专属性不强、分离度差等技术问题。本发明的第二目的在于提供氢溴酸沃替西汀及其有关物质的检测方法在含氢溴酸沃替西汀的原料或制剂的质量控制中的应用。氢溴酸沃替西汀及其有关物质的检测方法，包括如下步骤：采用高效液相色谱对供试品溶液进行检测；所述高效液相色谱的检测条件包括：检测波长为202～210nm；流动相a为磷酸水溶液，流动相b为乙腈和/或甲醇；采用所述流动相a和流动相b进行梯度洗脱；所述梯度洗脱的过程包括：0～40min内，流动相a和流动相b的体积比从25﹕75变至80﹕20；40～60min内，流动相a和流动相b的体积比为80﹕20。具体的，梯度洗脱的过程中，0～40min内，流动相a和流动相b的体积比从25﹕75匀速变至80﹕20；40～60min内，流动相a和流动相b的体积比为80﹕20。本发明的检测方法，可实现一次性高效的分离出氢溴酸沃替西汀及9种有关物质，在保证各有关物质与有效成分高效分离的基础上，使其具有良好的专属性、重复性与准确度，更好地实现对氢溴酸沃替西汀相关制剂的质量控制。在本发明的具体实施方式中，所述有关物质包括e、f、g、h、i、k、l、m、n，其结构式分别如下：其中，有关物质e，化学名称为1-(2,4-二甲基-苯基)-哌嗪，属于工艺杂质；有关物质f，化学名称为2,4-二甲基苯硫基-2-溴苯，属于中间体；有关物质g，化学名称为2,4-二甲基-苯硫基苯，属于工艺杂质；有关物质h，化学名称为2,2’-二溴-二苯二硫醚，属于工艺杂质；有关物质i，化学名称为联苯2,2-二硫醇，属于工艺杂质；有关物质k，化学名称为1,1’-联萘-2,2’-双二苯膦单氧化物，属于工艺杂质；有关物质l，化学名称为1-[2-[2-(2,4-二甲基苯硫基)苯硫基]苯基]哌嗪，属于工艺杂质；有关物质m，化学名称为1-[2-(2,4-二甲基苯亚磺酰基)苯基]-哌嗪，属于降解杂质；有关物质n，化学名称为4-[2-(2,4-二甲基苯硫基)苯基]哌嗪-1-甲醛，属于降解杂质。本发明通过采用特定的检测条件，能够一次性高效的分离检测出上述9种有关物质，在保证各有关物质与有效成分高效分离的基础上，使其具有良好的专属性、重复性与准确度。在本发明的具体实施方式中，所述磷酸水溶液的质量分数为0.01％～0.1％，优选为0.04％～0.06％，更优选为0.05％。如在不同实施方式中，所述磷酸水溶液的质量分数为0.01％、0.02％、0.03％、0.04％、0.05％、0.06％、0.07％、0.08％、0.09％、0.1％等等。当磷酸水溶液的质量分数为0.05％，分离度更佳。在本发明的具体实施方式中，所述检测波长可以为202nm、203nm、204nm、205nm、206nm、207nm、208nm、209nm、210nm等等，所述检测波长优选为204～208nm，更优选为206nm。在本发明的具体实施方式中，所述梯度洗脱的流速为0.8～1.2ml/min，优选为1ml/min。如在不同的实施方式中，所述梯度洗脱的流动相的流速可以为0.8ml/min、0.85ml/min、0.9ml/min、0.95ml/min、1.0ml/min、1.05ml/min、1.1ml/min、1.15ml/min、1.2ml/min等等。在本发明的具体实施方式中，所述高效液相色谱的色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱。如所述色谱柱为sb-c18(250×4.6mm，5μm)。在本发明的具体实施方式中，所述色谱柱的柱温为20～40℃，优选为25℃。如在不同实施方式中，所述色谱柱的柱温可以为20℃、21℃、22℃、23℃、24℃、25℃、26℃、27℃、28℃、29℃、30℃、31℃、32℃、33℃、34℃、35℃、36℃、37℃、38℃、39℃、40℃等等。在本发明的具体实施方式中，所述供试品溶液的进样量可以为10～20μl，如可以为10μl、12μl、14μl、16μl、18μl、20μl等等，优选为20μl。在本发明的优选实施方式中，所述高效液相色谱的检测条件包括：检测波长为206nm；流动相a为质量分数为0.05％的磷酸水溶液，流动相b为乙腈；采用所述流动相a和所述流动相b进行梯度洗脱；所述梯度洗脱的流速为1.0ml/min；色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱，柱温为25℃。在本发明的具体实施方式中，所述供试品溶液的配制包括：采用乙腈和水溶解并稀释所述供试品。其中，所述乙腈和水的体积比为1～1.5﹕1，优选为1﹕1。所述供试品溶液中，氢溴酸沃替西汀的浓度可以为0.5～2mg/ml，如可以为1mg/ml。在实际操作时，供试品溶液中氢溴酸沃替西汀的浓度不局限于此，只要满足其浓度×进样体积＞各杂质的定量限即可。在本发明的具体实施方式中，所述供试品包括含氢溴酸沃替西汀的原料或制剂。在本发明的具体实施方式中，通过外标法对所述供试品溶液中的氢溴酸沃替西汀和/或有关物质的含量进行计算。在具体的实施方式中，氢溴酸沃替西汀的含量的计算方法包括：将氢溴酸沃替西汀标准系列工作溶液分别注入高效液相色谱仪中，在所述高效液相色谱的检测条件下测定相应的色谱峰面积，以标准工作溶液的浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制氢溴酸沃替西汀标准曲线；将所述供试品溶液的色谱检测结果中的氢溴酸沃替西汀的色谱峰面积代入所述氢溴酸沃替西汀标准曲线中，计算得到所述供试品溶液中氢溴酸沃替西汀的含量。其中，所述氢溴酸沃替西汀标准系列工作溶液的浓度范围为0.15～30μg/ml。在具体的实施方式中，氢溴酸沃替西汀有关物质的含量的计算方法包括：将氢溴酸沃替西汀有关物质标准系列工作溶液分别注入高效液相色谱仪中，在所述高效液相色谱的检测条件下测定相应的色谱峰面积，以标准工作溶液的浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制氢溴酸沃替西汀有关物质标准曲线；将所述供试品溶液的色谱检测结果中的氢溴酸沃替西汀有关物质的色谱峰面积代入所述氢溴酸沃替西汀有关物质标准曲线中，计算得到所述供试品溶液中氢溴酸沃替西汀有关物质的含量。其中，所述氢溴酸沃替西汀有关物质标准系列工作溶液的浓度范围为0.15～30μg/ml。本发明还提供了上述任意一种所述氢溴酸沃替西汀及其有关物质的检测方法在氢溴酸沃替西汀的原料或制剂的质量控制中的应用。本发明的检测方法，在保证氢溴酸沃替西汀与各有关物质、各有关物质之间高效分离的基础上，使其具有良好的专属性、重复性与准确度，更好地实现对氢溴酸沃替西汀的原料或制剂的质量控制。与现有技术相比，本发明的有益效果为：(1)本发明的检测方法，可实现一次性高效的分离出氢溴酸沃替西汀及9种有关物质，在保证各有关物质与有效成分高效分离的基础上，使其具有良好的专属性、重复性与准确度；(2)本发明的检测方法，可用于氢溴酸沃替西汀合成研究和生产过程的质量控制，为氢溴酸沃替西汀原料药的质量控制提供有利的依据，使产品的质量得到保证。附图说明为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。图1为本发明实施例1提供的混合对照品溶液的色谱图；图2为比较例1提供的混合对照品溶液的色谱图；图3为实验例1提供的供试品溶液在流速为0.8ml/min时得到的色谱图；图4为实验例1提供的供试品溶液在流速为1.0ml/min时得到的色谱图；图5为实验例1提供的供试品溶液在流速为1.2ml/min时得到的色谱图。其中，上述色谱图对应的氢溴酸沃替西汀及其有关物质的保留时间记载于具体实施方式中。具体实施方式下面将结合附图和具体实施方式对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，但是本领域技术人员将会理解，下列所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例，仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。实施例1本实施例提供了氢溴酸沃替西汀及其有关物质的检测方法，包括如下步骤：(1)混合对照品溶液和供试品溶液混合对照品溶液的制备：精密称取氢溴酸沃替西汀对照品、有关物质e、有关物质f、有关物质g、有关物质h、有关物质i、有关物质k、有关物质l、有关物质m、有关物质n各适量，用乙腈-水(体积比为1﹕1)溶解并稀释制成每1ml含氢溴酸沃替西汀约1mg，含有关物质e、有关物质f、有关物质g、有关物质h、有关物质i、有关物质k、有关物质l、有关物质m和有关物质n各约10μg的混合对照品溶液；供试品溶液的制备：称取氢溴酸沃替西汀样品(20150503批)适量，用乙腈-水(体积比为1﹕1)溶解并稀释制成每1ml含氢溴酸沃替西汀样品约1mg的溶液，作为供试品溶液。(2)高效液相色谱检测条件仪器：agilent1260高效液相色谱系统及工作站，紫外检测器，检测波长：206nm；色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱sb-c18(250mm×4.6mm，5μm)色谱柱；流动相：流动相a和流动相b；其中，流动相a为质量分数为0.05％的磷酸水溶液，流动相b为乙腈；采用流动相a和流动相b按梯度表1进行梯度洗脱；流速：1.0ml/min；柱温：25℃；进样体积：20μl。表1梯度洗脱程序表(体积比)时间(min)流动相a(％)流动相b(％)02575408020608020(3)检测步骤分别精密量取混合对照品溶液和供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，按照步骤(2)中的条件进行检测，记录色谱图，混合对照品溶液的色谱图见图1。色谱图中，各峰依次为有关物质m、有关物质e、氢溴酸沃替西汀、有关物质l、有关物质n、有关物质k、有关物质i、有关物质g、有关物质f、有关物质h，保留时间分别为6.083min、7.992min、17.696min、25.485min、35.464min、40.691min、45.145min、46.819min、52.181min、57.946min。氢溴酸沃替西汀及各有关物质分离度良好，出峰时间适中，具体见表2。表2混合对照品溶液各成分的保留时间(min)实施例2本实施例参考实施例1的检测方法，区别仅在于：步骤(2)的高效液相色谱检测条件中，流速为0.8ml/min。实施例3本实施例参考实施例1的检测方法，区别仅在于：步骤(2)的高效液相色谱检测条件中，流速为1.2ml/min。实施例4本实施例参考实施例1的检测方法，区别仅在于：步骤(2)的高效液相色谱检测条件中，检测波长为204nm。实施例5本实施例参考实施例1的检测方法，区别仅在于：步骤(2)的高效液相色谱检测条件中，检测波长为208nm。实施例6本实施例参考实施例1的检测方法，区别仅在于：步骤(2)的高效液相色谱检测条件中，柱温为20℃。实施例7本实施例参考实施例1的检测方法，区别仅在于：步骤(2)的高效液相色谱检测条件中，柱温为30℃。比较例1比较例1参考实施例1的检测方法，区别在于：步骤(2)的高效液相色谱检测条件中，检测波长不同、流动相和梯度洗脱条件不同，具体如下：检测波长为254nm；流动相：流动相a和流动相b；其中，流动相a为甲醇，流动相b为50mmol/l的乙酸铵缓冲溶液，缓冲溶液的配制方法为：配制50mmol/l的乙酸铵缓冲溶液，用冰乙酸调节ph至4.5，得到所述缓冲溶液；梯度洗脱程序如表3所示。表3梯度洗脱程序表(体积比)时间(min)a(％)b(％)06040309010509010色谱图测试结果见图2，在波长254nm下，杂质和氢溴酸沃替西汀均不是最大吸收。色谱图中，各峰依次为有关物质m、有关物质e、氢溴酸沃替西汀、有关物质l、有关物质n、有关物质k、有关物质i、有关物质g、有关物质f、有关物质h，保留时间分别为5.026min、6.707min、16.718min、25.936min、28.379min、32.249min、33.746min、34.717min、37.434min、41.178min。氢溴酸沃替西汀及各有关物质分离度达不到要求。具体见表4。表4混合对照品溶液各成分的保留时间(min)实验例1耐用性(1)供试品溶液称取氢溴酸沃替西汀对照品适量，用乙腈-水(体积比为1﹕1)溶解并稀释制成每1ml含氢溴酸沃替西汀样品约1mg的氢溴酸沃替西汀对照品溶液，作为供试品溶液。(2)测试方法参考实施例1的检测条件，调整流速±20％，其它色谱条件保持不变，对步骤上述供试品溶液进行进样检测，记录色谱图，流速为0.8ml/min、1.0ml/min、1.2ml/min的色谱图分别如图3、图4和图5所示，数据结果如表5。表5耐用性试验结果(流速差异)从上述测试结果可知，流速调整±20％，主峰保留时间略有变化，主峰与杂质之间均达到良好分离。参照上述方法，检测波长调整±2nm，柱温调整±5℃，均有良好的耐用性。实验例2按照《化学药物质量控制分析方法验证技术指导原则》、《化学药物质量标准建立的规范化过程技术指导原则》、《化学药物杂质研究技术指导原则》、《化学药物残留溶剂研究技术指导原则》以及现行版《中华人民共和国药典》附录中有关的指导原则对实施例1的检测方法的专属性、溶液稳定性、检测限、定量限、线性、准确度、精密度、中间精密度、耐用性等项目进行验证，具体验证结果见表6-表8。表6有关物质方法学验证结果i表7有关物质方法学验证结果ii表8有关物质方法学验证结果iii最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。当前第1页12