一种阿普斯特片中杂质1和杂质2的检测方法与流程

本发明涉及一种阿普斯特片中杂质1和杂质2的检测方法。
背景技术：
：银屑病关节炎(psoriaticarthritis，psa)是一种与银屑病相关的炎性关节病，具有银屑病皮疹并导致关节和周围软组织疼痛、肿胀、压痛、僵硬和运动障碍，部分患者可有骶髂关节炎和/或脊柱炎，病程迁延、易复发、晚期关节强直，导致残废。阿普斯特作为一种新型小分子口服磷酸二酯酶-4(pde-4)抑制剂，能够调节胞内促炎与抗炎因子作用网络，减轻关节肿胀并改善关节部位的生理机能。ⅲ期临床试验证明了阿普斯特的安全性和有效性。相较于以往的pde4抑制剂，阿普斯特的不良反应较少，且催吐活性较低。研究发现，阿普斯特片在酸或碱存在条件下会发生水解反应，生成杂质1和杂质2，化学结构式分别如下：杂质1：杂质2：目前阿普斯特片仅在国外上市，尚未进口到国内；阿普斯特片未被国内外药典收录，没有法定的质量标准，也没有杂质1和杂质2的检测方法。技术实现要素：为了严格控制药品质量，保证药品的安全性和有效性，本发明提供了一种阿普斯特片中杂质1和杂质2的检测方法。（1）溶液的配制：取阿普斯特片细粉适量，加乙腈超声溶解并定量稀释制成浓度为0.5mg/ml的溶液，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；精密量取供试品溶液适量，用乙腈定量稀释制成浓度为1μg/ml的溶液，作为对照溶液。（2）精密量取供试品溶液和对照溶液各10μl，分别注入高效液相色谱仪，记录色谱图，高效液相色谱仪条件：色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，250*4.6mm，5μm；柱温：30℃；检测波长：230nm；流速：1.0ml/min；梯度洗脱条件：所述流动相a是取1000ml水，用磷酸调节ph值至3.0；所述流动相b是乙腈。（3）取杂质1、杂质2和阿普斯特等对照品各适量，用乙腈溶解并稀释制成每1ml含杂质10.01mg、杂质20.01mg、阿普斯特0.01mg的混合溶液，摇匀，作为系统适用性溶液。精密量取10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，相邻色谱峰之间的分离度应不小于1.5。本发明人经过对高效液相色谱分析中的色谱柱、流动相等条件进行筛选，选用合适的缓冲溶液体系，在流动性的比例调节上，保证稀释剂和辅料不干扰样品中杂质1和杂质2的检测，保证阿普斯特、杂质1和杂质2的色谱峰之间的分离度符合要求，最终建立了梯度洗脱的hplc分析方法，实现了对阿普斯特片中杂质1和杂质2的检测与控制。【附图说明】图1为实施例1检测阿普斯特片中的杂质1和杂质2的系统适用性溶液图。【具体实施方式】以下通过各实施例对本发明作进一步描述，但是这些实施例不限制本发明的保护范围。实施例1：检测阿普斯特片中的杂质1和杂质2照高效液相色谱法测定（中国药典2015年版通则0512）。色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（250*4.6mm，5μm）；以磷酸溶液（取1000ml水，用磷酸调节ph值至3.0）为流动相a，以乙腈为流动相b，按下表进行梯度洗脱；柱温为30℃；检测波长为230nm；流速为1.0ml/min。取杂质1、杂质2和阿普斯特等对照品各适量，用乙腈溶解并稀释制成每1ml含杂质1、杂质2和阿普斯特均为0.01mg的混合溶液，摇匀，作为系统适用性溶液。精密量取10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，杂质1、杂质2和阿普斯特依次出峰，相邻色谱峰之间的分离度应不小于1.5。测定法取阿普斯特片细粉适量，加乙腈超声溶解并定量稀释制成浓度为0.5mg/ml的溶液，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。精密量取供试品溶液适量，用乙腈定量稀释制成浓度为1μg/ml的溶液，作为对照溶液。精密量取供试品溶液和对照溶液各10μl，分别注入高效液相色谱仪，记录色谱图。供试品溶液色谱图中如有与杂质1和杂质2保留时间一致的色谱峰，杂质1的峰面积乘以校正因子3.2不得大于对照溶液主峰面积，杂质2的峰面积乘以校正因子2.4不得大于对照溶液主峰面积。1、系统适用性试验取杂质1、杂质2和阿普斯特等对照品各适量，用乙腈溶解并稀释制成每1ml含杂质1、杂质2和阿普斯特均为0.01mg的混合溶液，摇匀，作为系统适用性溶液。精密量取10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，杂质1、杂质2和阿普斯特依次出峰，相邻色谱峰之间的分离度均不小于1.5。2、杂质1、杂质2和阿普斯特的检测限和定量限试验取杂质1、杂质2和阿普斯特的对照品各适量，分别用乙腈溶解并稀释制成一定浓度的贮备液，用乙腈进行逐步稀释，取信噪比3:1为检测限，取信噪比10:1为定量限，试验结果如下组分检测限（µg/ml）定量限（µg/ml）杂质10.07010.2336杂质20.04530.1509阿普斯特0.04480.14953、杂质1、杂质2和阿普斯特的线性回归取杂质1、杂质2和阿普斯特等对照品各适量，用乙腈溶解并稀释制成一系列梯度浓度的混合溶液，精密量取10μl，注入液相色谱仪，以各峰面积a为纵坐标，对应浓度c为横坐标，绘制各成分的标准曲线，计算线性回归方程，同时计算杂质1和杂质2的校正因子，试验结果如下。试验结果表明，杂质1在0.2336~1.9469µg/ml范围内，溶液浓度和峰面积呈良好的线性：线性方程为y=0.3098x-0.0282，r=0.998；杂质2在0.1509~2.0127µg/ml范围内，溶液浓度和峰面积呈良好的线性：线性方程为y=0.4149x-0.0035，r=0.999；阿普斯特在0.1495~1.9930µg/ml范围内，溶液浓度和峰面积呈良好的线性：线性方程为y=0.9927x+0.0185，r=0.999。根据杂质1、杂质2和阿普斯特线性方程的斜率，计算获得杂质1的校正因子为3.2，杂质2的校正因子为2.4。4、杂质1和杂质2的回收率去杂质1、杂质2对照品适量，按限度的80%~120%，加入阿普斯特片空白辅料中，以测得量与加入量的比值计算各杂质的回收率。试验结果如下：杂质1的回收率试验结果：杂质2的回收率试验结果：试验结果表明：杂质1和杂质2的回收率试验结果符合药典规定。当前第1页12