超高效液相色谱串联质谱检测血清中18种脂肪酸的方法与流程

文档序号:22673735发布日期:2020-10-28 12:26阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种超高效液相色谱串联质谱检测血清中18种脂肪酸的方法,其特征在于:取预处理的血清,先利用超高效液相色谱将目标待测物与血清基质中的干扰组分进行分离,再利用质谱检测目标物与其对应同位素内标的质荷比,使用同位素内标法定量,分别计算出18种脂肪酸的含量;

所述18种脂肪酸分别为:月桂酸、十四碳一烯酸、肉豆蔻酸、十六碳一烯酸、棕榈酸、α-十八碳三烯酸、γ-十八碳三烯酸、十八碳二烯酸、十八碳一烯酸、硬脂酸、二十碳五烯酸、二十碳四烯酸、二十碳三烯酸、二十碳一烯酸、二十二碳六烯酸、二十二碳五烯酸-ω3、二十二碳五烯酸-ω6和二十二碳四烯酸;

上述18种脂肪酸对应的同位素内标物分别为:月桂酸-d3、棕榈酸-d3、十八碳一烯酸-13c18、硬脂酸-d3、二十碳三烯酸-d6、二十二碳六烯酸-d5和二十碳五烯酸-d5;

所述预处理的血清采用以下方法进行制备:向待测血清样本中加入混合内标工作液,涡旋后加入蛋白沉淀剂,再涡旋离心后取上清液,作为预处理的血清。

2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:所述超高效液相色谱的色谱条件如下:

流动相a为0.01~0.5%甲酸-水溶液,流动相b为乙腈和异丙醇的混合液,乙腈和异丙醇的体积比为1:2~5:1;

色谱柱型号:acquityuplcbehc18;

流速为0.2~0.5ml/min,柱温为35~45℃,进样体积为0.5~5µl;

采用流动相a和流动相b为混合流动相进行梯度洗脱,梯度洗脱为:在0-2.5分钟内,流动相a和流动相b的体积比为25:75;在2.5-4.5分钟内,流动相a和流动相b的体积比由25:75匀速渐变至2:98;在4.5-6.5分钟内,流动相a和流动相b的体积比为25:75。

3.根据权利要求2所述的方法,其特征在于:所述流动相a为0.1%甲酸-水溶液,流动相b为体积比5:1的乙腈和异丙醇混合液。

4.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:所述质谱的色谱条件为:在电喷雾电离esi模式下,采用多反应监测mrm进行负离子扫描;喷雾电压为2.5kv;离子源温度为120℃;雾化气温度为400℃,雾化气流速为800l/h,锥孔气流速为150l/h。

5.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:所述蛋白质沉淀剂为乙腈。

6.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:所述混合内标工作液中月桂酸-d3、棕榈酸-d3、十八碳一烯酸-13c18、硬脂酸-d3、二十碳三烯酸-d6、二十二碳六烯酸-d5和二十碳五烯酸-d5的浓度为月桂酸-d35μm、棕榈酸-d350μm、十八碳一烯酸-13c1810μm、硬脂酸-d320μm、二十碳三烯酸-d610μm、二十二碳六烯酸-d520μm和二十碳五烯酸-d530μm。

7.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:所述预处理的血清采用以下方法进行制备:取50μl待测血清样本,向其中加入20μl混合内标工作液,涡旋后加入430μl乙腈,振荡4~10min后,在12000~15000r/min,4~15℃离心4~10min,取60μl上清液作为预处理的血清。


技术总结
本发明公开了一种超高效液相色谱串联质谱检测血清中18种脂肪酸的方法,属于血液检测技术领域。该方法是先利用超高效液相色谱将目标待测物与血清基质中的干扰组分进行分离,再利用质谱检测目标物与其对应同位素内标的质荷比,使用同位素内标法定量,分别计算出18种脂肪酸的含量。采用本发明的检测方法,将待测血清样本与混合内标溶液混合,样本无需衍生化处理,前处理简单,只需一步蛋白沉淀处理,样本用量小,灵敏度高,特异性强,检测种类较多,6.5分钟之内可同时检测18种脂肪酸,可用于临床上血清脂肪酸的诊断及健康评估。

技术研发人员:成晓亮;李美娟
受保护的技术使用者:南京品生医学检验实验室有限公司
技术研发日:2020.07.21
技术公布日:2020.10.27
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