半夏糖浆的质量控制方法与流程

本发明涉及药物分析领域，特别是涉及一种半夏糖浆的质量控制方法。

背景技术：

半夏糖浆收载于《卫生部药品标准·中药成方制剂(第八册)》，标准编号为ws3-b-1527-93，处方由生半夏、麻黄、紫菀、桔梗、远志、枇杷叶、陈皮、甘草、薄荷油等9味中草药组成，具有止咳化痰功能，临床上用于治疗咳嗽痰多，支气管炎。麻黄具有发汗散寒，宣肺平喘功效，为方中臣药之一，有效成分是其提取物麻黄碱和伪麻黄碱。

在部颁标准中仅采用理化方法对半夏糖浆的进行鉴别，但尚未有含量测定指标，质量标准可控性过低，难以监控产品内在质量，质量控制方法有待提高。由于麻黄药材中的有效成分麻黄碱和伪麻黄碱的水溶性较好，水提液中含量高，故在成品易检出，麻黄为半夏糖浆处方中的君药，而麻黄碱和伪麻黄碱是半夏糖浆的有效成分之一，所以选择麻黄中麻黄碱和伪麻黄碱为指标成分有助于控制半夏糖浆的质量。

现有文献中对中药制剂的麻黄碱或伪麻黄碱的单一成分含量测定方法比较多，如陈纪海等《hplc法测定半夏糖浆中麻黄碱的含量》，徐艳丽等《hplc测定半夏止咳糖浆中盐酸麻黄碱含量》，但尚未见检测效果比较好的多组分含量测定方法。

技术实现要素：

基于此，本发明的目的是提供一种专属性强、分离效果好的半夏糖浆的质量控制方法。

具体技术方案如下：

一种半夏糖浆的质量控制方法，包括以下步骤：

供试品溶液的制备：取半夏糖浆样品，加入氢氧化钠水溶液后进行蒸馏，用盐酸水溶液收集蒸馏液后过滤，取续滤液制备供试品溶液；

对照品溶液的制备：取盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱作为对照品，加溶剂溶解，制备对照品溶液；

将所述供试品溶液、对照品溶液注入液相色谱仪进行测定；

所述液相色谱仪的流动相为：体积比为3.5～7：93～96.5的乙腈-0.3～0.7wt％磷酸水溶液。

在其中一些实施例中，所述流动相为：体积比为5～6：94～95的乙腈-0.3～0.5wt％磷酸水溶液。

在其中一些实施例中，所述氢氧化钠水溶液的质量浓度为10％～40％。

在其中一些实施例中，所述氢氧化钠水溶液的质量浓度为25％～40％。

在其中一些实施例中，所述氢氧化钠水溶液的质量浓度为30％～35％。

在其中一些实施例中，所述液相色谱仪的色谱柱为diamondodsc18柱；所述液相色谱仪的检测器为vwd检测器。

在其中一些实施例中，所述盐酸水溶液的浓度为0.05～0.5mol/l；优选所述盐酸水溶液的浓度为0.05～0.15mol/l，进一步优选所述盐酸水溶液的浓度为0.05～0.10mol/l。

在其中一些实施例中，所述色谱柱的尺寸为：长200±10mm×直径4.6±0.2mm，粒径5±0.2μm。

在其中一些实施例中，所述液相色谱仪的色谱条件包括：

检测波长为207±5nm；

进样量20±2μl；

柱温为25±2℃；

流速为1±0.2ml/min。

在其中一些实施例中，所述溶剂为水。

在其中一些实施例中，所述供试品溶液的制备过程中，每1ml半夏糖浆待测样品，加入1～3ml氢氧化钠水溶液，用0.05～0.15ml盐酸水溶液收集1～3ml蒸馏液。

在其中一些实施例中，所述半夏糖浆的有效成分由包括生半夏、麻黄、紫菀、桔梗、远志、枇杷叶、陈皮、甘草和薄荷油的原料制备而成。

与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

本发明采用高效色谱法，针对半夏糖浆的性质特点，选择乙腈-磷酸水溶液作为流动相，并精密控制磷酸水溶液的浓度为0.3～0.7wt％、乙腈和磷酸水溶液体积比为3.5～7：93～96.5，在此非常合适的色谱条件下，配合特定的供试品溶液的制备方法，最终实现了同时测定半夏糖浆中盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱的含量，并实现了盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱很好的分离，排除了半夏糖浆中其他物质的干扰，同时专属性强、准确度高、重现性好。

附图说明

图1为盐酸麻黄碱对照品色谱图(207nm)；

图2为盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱混合对照品色谱图(207nm)；

图3为半夏糖浆样品色谱图(207nm)；

图4为麻黄阴性对照样品色谱图(207nm)。

具体实施方式

本发明下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。实施例中所用到的各种常用化学试剂，均为市售产品。

除非另有定义，本发明所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不用于限制本发明。

本发明的术语“包括”和“具有”以及它们任何变形，意图在于覆盖不排他的包含。例如包含了一系列步骤的过程、方法、装置、产品或设备没有限定于已列出的步骤或模块，而是可选地还包括没有列出的步骤，或可选地还包括对于这些过程、方法、产品或设备固有的其它步骤。

在本发明中提及的“多个”是指两个或两个以上。“和/或”，描述关联对象的关联关系，表示可以存在三种关系，例如，a和/或b，可以表示：单独存在a，同时存在a和b，单独存在b这三种情况。字符“/”一般表示前后关联对象是一种“或”的关系。

本实施方式提供一种半夏糖浆的质量控制方法，包括以下步骤：

供试品溶液的制备：取半夏糖浆样品，加入氢氧化钠水溶液后进行蒸馏，用盐酸水溶液收集蒸馏液后过滤，取续滤液制备供试品溶液；

对照品溶液的制备：取盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱作为对照品，加溶剂溶解，制备对照品溶液；

将所述供试品溶液、对照品溶液注入液相色谱仪进行测定；

所述液相色谱仪的流动相为：体积比为3.5～7：93～96.5的乙腈-0.3～0.7wt％磷酸水溶液。

麻黄为半夏糖浆处方中的君药，而麻黄碱和伪麻黄碱是半夏糖浆的重要有效成分之一，所以选择麻黄中麻黄碱和伪麻黄碱为指标成分进行含量测定有助于控制半夏糖浆的质量。

发明人在研究过程中发现，要得到峰型好且分离度高的色谱图，流动相磷酸水溶液的浓度十分关键，控制磷酸水溶液的浓度为0.3～0.7wt％，尤其是为0.3～0.5wt％，再结合乙腈和磷酸水溶液的体积比为5～6：94～95，可以很好的排除半夏糖浆中其他物质的干扰，实现盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱很好的分离。

同时，发明人发现半夏糖浆样品重成分多且复杂，用常规的稀释法制备得到的供试品溶液中目标物质含量过低，不能实现有效含量测定；而采用萃取法时，对干扰杂质的除去效果不好，并且得到的供试品溶液过于浓稠，操作困难。最终，本发明发现通过蒸馏法制备供试品溶液，其目标物质的含量明显提高，并且操作性强，易于控制。特别是蒸馏前加入质量浓度为25％～40％的氢氧化钠水溶液的，可以显著提高供试品溶液中盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱的含量，并且批次间的稳定性好。

在上述非常优选的色谱条件下，选择液相色谱仪的色谱柱为diamondodsc18柱，所得色谱图分离效果好、准确度高。在其他中药制剂(如麻咳糖浆)中测定麻黄碱的含量较为常规的hypersilods色谱柱，在本发明的色谱条件下，会导致色谱图严重变形，不可进行测定。

以下结合具体实施例对本发明作进一步详细的说明。

实施例1

一、仪器与试药

1、仪器

agilent1200高效液相色谱仪；vwd检测器。

色谱柱：diamondodsc18柱(200×4.6mm，5μm)，柱编号：99902。

2、试剂和材料

半夏糖浆(批号：n07004s、j05001、j10002、a08001)、麻黄阴性对照样品(均由广州白云山潘高寿药业股份有限公司生产和制备)；

盐酸麻黄碱对照品(批号：171241-200506)，盐酸伪麻黄碱对照品(批号：171237-200304)，来源均为中国药品生物制品检定所。

乙腈为色谱纯；水为超纯水，其他试剂均为分析纯(均由美国天地公司生产和制备)。

二、供试品制备方法考察

供试品溶液的制备设计了三个预实验方案：直接稀释法、萃取法和蒸馏法。发现直接稀释法制得的供试品溶液目标物质的含量过低；萃取法提取得到的供试品溶液过于稠厚，无法继续进行萃取操作，且萃取法除去杂质效果不好，会干扰色谱峰的显示；而蒸馏法制备得到的供试品溶液杂质去除效果较为理想，且实验易于控制和操作，因此选定蒸馏法制备半夏糖浆供试品溶液。蒸馏时需加入naoh水溶液，并使用hcl水溶液来吸收蒸馏液，以下对naoh溶液和hcl溶液的浓度进行了试验考察。

取半夏糖浆(批号：n07004s)，精密量取50ml，置带磨砂口的500ml凯氏烧瓶中，分别加入10wt％、20wt％、30wt％、35wt％氢氧化钠水溶液150ml，连接蒸馏装置，加热蒸馏，用预先盛0.05、0.1、0.5mol/l盐酸水溶液各5ml的100ml量瓶收集蒸馏液至近刻度，加水定容至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，进行含量测定，结果见表1。

表1前处理方法比较

结果表明：当加入30～35wt％氢氧化钠溶液进行蒸馏时，盐酸麻黄碱和伪麻黄碱的含量测得值达到稳定。用0.05mol/l、0.1mol/l、0.5mol/l盐酸溶液接收液测得盐酸麻黄碱和伪麻黄碱的含量均无明显差异。根据前处理实验中蒸馏使用溶液和接收液两条件组合测定的结果，同时考虑到酸性过大对色谱柱损伤较大，故蒸馏时选用30wt％氢氧化钠溶液和接收液选用0.1mol/l盐酸溶液。

三、色谱条件的考察

1、流动相的考察：

本发明的研究团队进行色谱条件的研究实验，反复调试，初步选定了流动相为乙腈-0.4％wt磷酸溶液(5:95)和乙腈-0.4％wt磷酸溶液(4:96)，又因发现乙腈的体积百分比小于5％对色谱柱损害大。曾试用乙腈-0.1％wt磷酸溶液(5:95)和乙腈-0.2％wt磷酸溶液(5:95)作为流动相发现盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱之间、杂质峰与主峰的分离度较乙腈-0.4％wt磷酸溶液(5:95)差，故最终确定了以c18柱为固定相，乙腈-0.4％wt磷酸溶液(5:95)为流动相。

2、色谱柱的考察：

耐用性试验曾选用不同的色谱柱进行盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱的检测，hypersilods填料的c18色谱柱在其他中药制剂(如麻咳糖浆)中麻黄碱的含量测定中较为常用，但是，我们发现在本发明实施例的色谱条件下，采用hypersilods填料的c18色谱柱，不可进行测定，该填料会导致色谱图严重变形。最终，我们选择diamondodsc18柱作为色谱柱，其检测效果好，与本发明的色谱条件相匹配，测定所得色谱图分离效果好、准确度高。

四、方法学验证

1、色谱条件与系统适用性试验

色谱柱为diamondodsc18柱；流动相为乙腈-0.4wt％磷酸水溶液(5:95)；流速为1ml·min^-1；柱温：25℃；检测波长为207nm；进样量20μl。理论塔板数按盐酸麻黄碱峰计算应不低于4000。

2、对照品溶液的制备

取盐酸麻黄碱对照品、盐酸伪麻黄碱对照品适量，精密称定，加水制成每1ml各含10μg的溶液，即得盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱混合对照溶液。

3、供试品溶液的制备

精密量取半夏糖浆待测样品(批号：n07004s)50ml，置500ml带磨砂口的凯氏烧瓶中，加入30wt％氢氧化钠溶液100ml，连接蒸馏装置，加热蒸馏，用预先盛有0.1mol/l盐酸溶液5ml的100ml量瓶收集蒸馏液至近刻度，放冷，加水至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。

4、阴性对照溶液的制备

取处方组成中除麻黄之外各药材，按照半夏糖浆制备工艺制备麻黄阴性对照样品，再按上述“3”项下方法制备，即得阴性对照溶液。

5、测定波长的选择和专属性试验

测定波长的选择：对盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱对照品溶液进行紫外光谱扫描，结果表明，盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱在205nm处均有最大吸收，由于紫外分光光度计波长扫描有±2nm误差范围，同时参考中国药典2005年版一部麻黄药材含量测定项下的检测波长，且中国药典对盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱波长经过复核，故选择与中国药典一致的207nm作为检测波长。

分别精密吸取盐酸麻黄碱对照品溶液、盐酸麻黄碱及盐酸伪麻黄碱混合对照品溶液、半夏糖浆供试品溶液和麻黄阴性对照溶液各20μl注入色谱仪，理论板数以盐酸麻黄碱峰计算为8366，考虑到不同色谱柱有差异，按“1”项下的色谱条件定为理论板数不低于4000。如图1-4所示，hplc色谱图结果表明，盐酸麻黄碱对照品和盐酸伪麻黄碱对照品与样品相应峰的保留时间基本一致，分离度良好，麻黄阴性对照溶液无干扰。

6、线性关系考察

分别取盐酸麻黄碱对照品和盐酸伪麻黄碱对照品适量，精密称定，加水制成盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱混合对照品溶液(盐酸麻黄碱浓度：41.84μg/ml；盐酸伪麻黄碱浓度：43.08μg/ml)。吸取上述盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱混合对照品溶液分别进样1μl，2μl，4μl，10μl，20μl，40μl。分别以进样量(μg)为横坐标(x)，峰面积积分值为纵坐标(y)，绘制标准曲线，得盐酸麻黄碱的线性方程：y＝2.545×10³x-0.3664，γ＝1.000；盐酸伪麻黄碱的线性方程：y＝2.561×10³x-2.752，γ＝1.000；结果表明进样量在0.04184～1.674μg范围内盐酸麻黄碱线性关系良好，进样量在0.04308～1.723μg范围内盐酸伪麻黄碱线性关系良好。结果见表2。

表2线性与线性范围

7、稳定性试验

取半夏糖浆(批号：n07004s)，依“3”项方法制备供试品溶液，分别在0、2、4、8、12、24小时依法测定样品峰面积积分值，测定结果见表3，盐酸麻黄碱平均峰面积为753.469，rsd＝0.34％(n＝6)，盐酸伪麻黄碱平均峰面积为453.414，rsd＝0.24％(n＝6)。实验结果表明，供试品溶液在24小时内测定结果稳定。

表3稳定性试验结果

8、精密度试验

取“3”项方法制备的供试品溶液，按上述“3”项方法的色谱条件连续进样6次，结果见表4，盐酸麻黄碱平均峰面积为753.809，rsd＝0.25％，盐酸伪麻黄碱平均峰面积为452.661，rsd＝0.36％，显示精密度良好。

表4精密度试验结果

9、重复性试验

分别取同一批半夏糖浆(批号：n07004s)，按上述“3”项供试品溶液制备方法平行操作制备供试液，共6份，依法测定，结果见表5，可见方法重复性良好。

表5重复性试验结果

10、准确度(以加样回收试验回收率表示)

取半夏糖浆(批号：n07004s)，精密吸取本品2.5ml，共6份，分别置于带磨砂口的500ml凯氏烧瓶中，并精密加入盐酸麻黄碱对照品溶液(c＝0.2092mg/ml)3.6ml、盐酸伪麻黄碱对照品溶液(c＝0.2154mg/ml)2.0ml，依上述“3”项供试品溶液制备方法制备供试品溶液，分别测定其中盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱的含量，计算加样回收率，结果见表6和表7，回收率平均值盐酸麻黄碱为100.8％(rsd＝2.9％，n＝6)，盐酸伪麻黄碱为99.09％(rsd＝1.5％，n＝6)，准确度好。

表6盐酸麻黄碱准确度试验结果

表7盐酸伪麻黄碱准确度试验结果

五、样品含量测定

取收集到的3批样品，按“3”项供试品溶液制备方法平行操作制备供试液，依法测定盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱的含量。结果见表8。

表8半夏糖浆含量测定结果

以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。

以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。