白芍和炒白芍的标准汤剂、中药配方颗粒的鉴别方法与流程

[0001]
本发明涉及中药检测技术领域，特别是涉及一种白芍和炒白芍的标准汤剂、中药配方颗粒的鉴别方法。


背景技术：

[0002]
在临床应用上，生品通过炮制可改变或缓和药性，具有增强疗效、降低毒性等作用。生白芍酸寒通滞、和血行湿，缓急止痛，炒白芍酸甘微寒、焦助肝阴、为补肝之体，酒白芍微温轻扬、补肝活血。鉴于白芍生品与炮制品、各炮制品之间功效的差异，需要对白芍生品与炮制品配方颗粒进行鉴别。中药标准汤剂由不少于15批有代表性的原料，在中医药理论指导下，按照临床汤剂煎煮方法规范化煎煮，固液分离、浓缩和干燥等步骤制备；中药配方颗粒由中药饮片以水为溶媒提取，并以物理方法固液分离、浓缩、干燥、制粒成型等工艺生产制成，在中医药理论指导下，按照中医临床处方配方后，供患者冲服使用，其临床疗效应当和相应饮片保持一致。中药配方颗粒以标准汤剂为桥接，承载着中药饮片安全性、有效性，标准汤剂为衡量中药配方颗粒是否与临床汤剂基本一致的物质基准。但是，不论是标准汤剂还是中药颗粒剂，均失去了原药材、饮片所具有的显微与性状鉴别特征，即无法从药材的形状、大小、色泽、表面、质地、断面、气、味等特征进行检查与鉴别。
[0003]
另外，标准汤剂为衡量中药配方颗粒是否与临床汤剂基本一致的物质基准，是一种辅助分析配方颗粒和经典名方的标准物质，因此对中药生品与炮制品的标准汤剂进行鉴别也是十分必要的。
[0004]
有方法利用高效液相色谱法对白芍饮片与酒白芍饮片进行鉴别。但对于白芍与炒白芍的标准汤剂或中药配方颗粒目前尚未见有鉴别方法公开。


技术实现要素：

[0005]
基于此，有必要提供一种白芍、炒白芍的标准汤剂和中药配方颗粒的特征图谱构建方法。该构建方法能够分别构建获得白芍、炒白芍的标准汤剂和中药配方颗粒的特征图谱，该特征图谱能够准确鉴别白芍标准汤剂(中药配方颗粒)和炒白芍的标准汤剂(中药配方颗粒)。
[0006]
一种白芍的标准汤剂、中药配方颗粒的特征图谱构建方法，其特征在于，包括如下步骤：
[0007]
对照品溶液和供试品溶液制备：取5-羟甲基糠醛(5-hmf)、没食子酸、儿茶素、芍药内酯苷、芍药苷、苯甲酸、1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖和苯甲酰芍药苷对照品，以溶剂溶解，制备所述对照品溶液；取白芍的标准汤剂或白芍中药配方颗粒，加入提取溶剂进行提取，制备所述供试品溶液；
[0008]
检测：以超高效液相色谱法对所述对照品溶液和供试品溶液进行检测；
[0009]
所述超高效液相色谱法采用的流动相a为乙腈，流动相b为体积浓度为0.03～0.07％的磷酸水溶液，洗脱方式为梯度洗脱。
[0010]
在其中一个实施例中，所述梯度洗脱包括如下程序：
[0011]
0～5min，保持流动相a的体积分数为3％，流动相b的体积分数为97％；
[0012]
5～10min，流动相a的体积分数由3％上升至12％，流动相b的体积分数由97％下降至88％；
[0013]
10～16min，流动相a的体积分数由12％上升至13％，流动相b的体积分数由88％下降至87％；
[0014]
16～26.5min，流动相a的体积分数由13％上升至20％，流动相b的体积分数由87％下降至80％；
[0015]
26.5～30min，保持流动相a的体积分数为20％，流动相b的体积分数为80％；
[0016]
30～36min，流动相a的体积分数由20％上升至35％，流动相b的体积分数由80％下降至65％；
[0017]
36～40min，流动相a的体积分数由35％上升至50％，流动相b的体积分数由65％下降至50％。
[0018]
进一步地，为了给下一次检测提供便利，上述程序结束后可以继续进行如下洗脱程序：
[0019]
40～40.1min，流动相a的体积分数由50％下降至3％，流动相b的体积分数由50％上升至97％；
[0020]
40.1～45min，保持流动相a的体积分数为3％，流动相b的体积分数为97％。
[0021]
在其中一个实施例中，所述超高效液相色谱法还包括如下检测条件：
[0022]
色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流速为0.2～0.5ml/min，柱温为28～32℃。
[0023]
在其中一个实施例中，所述超高效液相色谱法采用的检测波长为：
[0024]
0～10min，检测波长为275～285nm；10～45min，检测波长为225～235nm。
[0025]
在其中一个实施例中，所述提取溶剂为体积浓度45～55％的乙醇水溶液，所述提取的方法为超声提取。进一步地，所述提取的时间为25～35min。进一步地，所述提取溶剂的用量为每1g所述白芍的标准汤剂或白芍中药配方颗粒加入80～90ml。进一步地，所述超声提取采用的超声功率为245～255w，频率35～45khz。
[0026]
在其中一个实施例中，制备所述对照品溶液的步骤中，所述溶剂为甲醇。
[0027]
本发明还提供一种炒白芍的标准汤剂、中药配方颗粒的特征图谱构建方法，包括如下步骤：
[0028]
对照品溶液和供试品溶液制备：取5-羟甲基糠醛、没食子酸、儿茶素、芍药内酯苷、芍药苷、苯甲酸、1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖和苯甲酰芍药苷对照品，以溶剂溶解，制备所述对照品溶液；取炒白芍的标准汤剂或炒白芍中药配方颗粒，加入提取溶剂进行提取，制备所述供试品溶液；
[0029]
检测：以超高效液相色谱法对所述对照品溶液和供试品溶液进行检测；
[0030]
所述超高效液相色谱法采用的流动相a为乙腈，流动相b为体积浓度为0.03～0.07％的磷酸水溶液，洗脱方式为梯度洗脱。
[0031]
在其中一个实施例中，所述梯度洗脱包括如下程序：
[0032]
0～5min，保持流动相a的体积分数为3％，流动相b的体积分数为97％；
[0033]
5～10min，流动相a的体积分数由3％上升至12％，流动相b的体积分数由97％下降至88％；
[0034]
10～16min，流动相a的体积分数由12％上升至13％，流动相b的体积分数由88％下降至87％；
[0035]
16～26.5min，流动相a的体积分数由13％上升至20％，流动相b的体积分数由87％下降至80％；
[0036]
26.5～30min，保持流动相a的体积分数为20％，流动相b的体积分数为80％；
[0037]
30～36min，流动相a的体积分数由20％上升至35％，流动相b的体积分数由80％下降至65％；
[0038]
36～40min，流动相a的体积分数由35％上升至50％，流动相b的体积分数由65％下降至50％。
[0039]
进一步地，为了给下一次检测提供便利，上述程序结束后可以继续进行如下洗脱程序：
[0040]
40～40.1min，流动相a的体积分数由50％下降至3％，流动相b的体积分数由50％上升至97％；
[0041]
40.1～45min，保持流动相a的体积分数为3％，流动相b的体积分数为97％。
[0042]
在其中一个实施例中，所述超高效液相色谱法还包括如下检测条件：
[0043]
色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流速为0.2～0.5ml/min，柱温为28～32℃。
[0044]
在其中一个实施例中，所述超高效液相色谱法采用的检测波长为：
[0045]
0～10min，检测波长为275～285nm；10～45min，检测波长为225～235nm。
[0046]
在其中一个实施例中，所述提取溶剂为体积浓度45～55％的乙醇水溶液，所述提取的方法为超声提取。进一步地，所述提取的时间为25～35min。进一步地，所述提取溶剂的用量为每1g所述白芍的标准汤剂或白芍中药配方颗粒加入80～90ml。进一步地，所述超声提取采用的超声功率为245～255w，频率35～45khz。
[0047]
在其中一个实施例中，制备所述对照品溶液的步骤中，所述溶剂为甲醇。
[0048]
本发明还提供一种白芍和炒白芍的标准汤剂、中药配方颗粒的鉴别方法，包括如下步骤：
[0049]
待测样品溶液制备：取待测标准汤剂或待测中药配方颗粒，加入提取溶剂进行提取，制备所述待测样品溶液；
[0050]
检测：以超高效液相色谱法对所述待测样品溶液进行检测，将检测所得图谱与如上所述构建方法构建获得的白芍的标准汤剂、中药配方颗粒的特征图谱，或如上所述构建方法构建获得的炒白芍的标准汤剂、中药配方颗粒的特征图谱进行比较；
[0051]
所述超高效液相色谱法采用的流动相a为乙腈，流动相b为体积浓度为0.03～0.07％的磷酸水溶液，洗脱方式为梯度洗脱。
[0052]
在其中一个实施例中，所述梯度洗脱包括如下程序：
[0053]
0～5min，保持流动相a的体积分数为3％，流动相b的体积分数为97％；
[0054]
5～10min，流动相a的体积分数由3％上升至12％，流动相b的体积分数由97％下降至88％；
[0055]
10～16min，流动相a的体积分数由12％上升至13％，流动相b的体积分数由88％下降至87％；
[0056]
16～26.5min，流动相a的体积分数由13％上升至20％，流动相b的体积分数由87％下降至80％；
[0057]
26.5～30min，保持流动相a的体积分数为20％，流动相b的体积分数为80％；
[0058]
30～36min，流动相a的体积分数由20％上升至35％，流动相b的体积分数由80％下降至65％；
[0059]
36～40min，流动相a的体积分数由35％上升至50％，流动相b的体积分数由65％下降至50％。
[0060]
进一步地，为了给下一次检测提供便利，上述程序结束后可以继续进行如下洗脱程序：
[0061]
40～40.1min，流动相a的体积分数由50％下降至3％，流动相b的体积分数由50％上升至97％；
[0062]
40.1～45min，保持流动相a的体积分数为3％，流动相b的体积分数为97％。
[0063]
在其中一个实施例中，所述超高效液相色谱法还包括如下检测条件：
[0064]
色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流速为0.2～0.5ml/min，柱温为28～32℃。
[0065]
在其中一个实施例中，所述超高效液相色谱法采用的检测波长为：
[0066]
0～10min，检测波长为275～285nm；10～45min，检测波长为225～235nm。
[0067]
在其中一个实施例中，所述提取溶剂为体积浓度45～55％的乙醇水溶液，所述提取的方法为超声提取。进一步地，所述提取的时间为25～35min。进一步地，所述提取溶剂的用量为每1g所述白芍的标准汤剂或白芍中药配方颗粒加入80～90ml。进一步地，所述超声提取采用的超声功率为245～255w，频率35～45khz。
[0068]
与现有技术相比较，本发明具有如下有益效果：
[0069]
本发明采用超高效液相色谱法(uplc)技术，建立了白芍标准汤剂、中药配方颗粒的uplc特征图谱，并确定了14个共有峰，峰的分离度好，能够充分反映白芍标准汤剂、中药配方颗粒的特征峰信息，且方法稳定，精密度高，重现性较好，为白芍标准汤剂以及中药配方颗粒质量提供快速、全面的检测手段。
[0070]
本发明采用超高效液相色谱法(uplc)技术，建立了炒白芍标准汤剂、中药配方颗粒的uplc特征图谱，并确定了16个共有峰，峰的分离度好，能够充分反映炒白芍标准汤剂、中药配方颗粒的特征峰信息，且方法稳定，精密度高，重现性较好，为炒白芍标准汤剂以及中药配方颗粒质量提供快速、全面的检测手段。
[0071]
另外，基于上述白芍和炒白芍的标准汤剂(中药配方颗粒)的特征图谱构建获得的特征图谱，能够准确鉴别白芍和炒白芍的标准汤剂(中药配方颗粒)，弥补了白芍和炒白芍的标准汤剂(中药配方颗粒)无法从显微与性状鉴别特征进行检查和鉴别的缺陷。
附图说明
[0072]
图1为17批白芍标准汤剂的uplc色谱图；
[0073]
图2为5批白芍中药配方颗粒的uplc色谱图；
[0074]
图3为白芍标准汤剂特征图谱的对照图谱；
[0075]
图4为白芍中药配方颗粒对照特征图谱；
[0076]
图5为17批炒白芍标准汤剂的uplc色谱图；
[0077]
图6为5批炒白芍中药配方颗粒的uplc色谱图；
[0078]
图7为炒白芍标准汤剂特征图谱的对照图谱；
[0079]
图8为炒白芍中药配方颗粒对照特征图谱；
[0080]
图9为一实施例中白芍标准汤剂与炒白芍标准汤剂的鉴别色谱图；
[0081]
图10为一实施例中白芍中药配方颗粒与炒白芍中药配方颗粒的鉴别色谱图。
具体实施方式
[0082]
以下结合具体实施例对本发明的白芍和炒白芍的标准汤剂、中药配方颗粒的鉴别方法作进一步详细的说明。本发明可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施方式。相反地，提供这些实施方式的目的是使对本发明公开内容理解更加透彻全面。
[0083]
除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本发明。
[0084]
本发明所述的标准汤剂可以任意地为饮片的提取液、浓缩液、冻干粉。在本发明的实施例中均为标准汤剂的冻干粉。
[0085]
如无特别说明，本发明实施例中的百分比均为体积百分比，所述“稀乙醇”是指体积浓度50％的乙醇水溶液。
[0086]
实施例1白芍标准汤剂和中药配方颗粒uplc特征图谱的构建
[0087]
1.试验方法
[0088]
1.1对照品溶液的制备：取5-hmf、没食子酸、儿茶素、芍药内酯苷、芍药苷、苯甲酸、1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖、苯甲酰芍药苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含5-hmf40μg/ml、没食子酸40μg/ml、儿茶素25μg/ml、芍药内酯苷124μg/ml、芍药苷86μg/ml、苯甲酸80μg/ml、1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖26μg/ml、苯甲酰芍药苷40μg/ml的溶液，摇匀，即得。
[0089]
1.2色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的waters acquity uplc hss t3色谱柱(2.1
×
150mm,1.8μm)，以乙腈为流动相a，以0.05％磷酸水溶液为流动相b，进行梯度洗脱(参见表1)，流速为0.3ml/min，柱温为30℃，检测波长为：0～10min，280nm，10～45min，230nm；进样量为1μl。
[0090]
表1梯度洗脱表
[0091][0092]
1.3供试品溶液的制备
[0093]
取白芍标准汤剂或白芍中药配方颗粒适量，研细，取约0.3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇25ml，称定重量，超声处理(功率250w，频率40khz)30分钟，放冷，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
[0094]
2.测定法：分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液1ul，注入超高效液相色谱仪，测定，即得。
[0095]
3.特征图谱共有峰的确定
[0096]
3.1取17批白芍标准汤剂(批号：bs1～bs17)、5批白芍中药配方颗粒(批号：cg1710004、cg1710005、cg1710006、cg1812001、cg1812002)，药材、颗粒来源信息见表2，制备供试品溶液，在规定的色谱条件下获得17批白芍标准汤剂、5批白芍中药配方颗粒uplc特征图谱(图1、图2)。
[0097]
表2药材、颗粒来源信息
[0098][0099]
3.2实验结果：17批白芍标准汤剂、5批白芍中药配方颗粒uplc特征图谱均显示相同的14个共有峰，说明白芍标准汤剂与白芍中药配方颗粒的特征图谱基本一致，因此选择上述14个共有峰作为白芍标准汤剂、中药配方颗粒uplc特征图谱的特征峰，并以峰7(芍药苷)为参照峰进行标准研究。
[0100]
4.特征图谱方法学验证
[0101]
4.1精密度试验
[0102]
4.1.1取白芍标准汤剂(批号：bs1)，制备供试品溶液，在规定色谱条件下连续进样6次，以芍药苷为参照峰，计算各共有峰的相对保留时间及相对峰面积。结果相对保留时间的rsd为0.12％～0.33％，相对峰面积的rsd为0.32％～2.56％，表明仪器精密度良好。
[0103]
4.1.2取白芍中药配方颗粒(批号：cg1710004)，制备供试品溶液，在规定色谱条件下连续进样6次，以芍药苷为参照峰，计算各共有峰的相对保留时间及相对峰面积。结果相对保留时间的rsd为0.09％～2.42％，相对峰面积的rsd为0.66％～3.53％，表明仪器精密度良好。
[0104]
4.2供试品溶液稳定性考察
[0105]
4.2.1取白芍标准汤剂(批号：bs1)，制备供试品溶液，在规定色谱条件下，分别在0，2，4，8，12小时进样，进样体积1μl。以芍药苷色谱峰为参照峰s，计算各特征峰的相对保留时间和相对峰面积。
[0106]
结果显示供试品溶液在12小时内14个色谱峰相对保留时间的rsd为0.11％～0.57％，相对峰面积的rsd为0.28％～3.11％，表明该方法下供试品溶液在12小时内基本稳定。
[0107]
4.2.2取白芍中药配方颗粒(批号：cg1710004)，制备供试品溶液，在规定色谱条件下，分别在0，2，4，8，12小时进样，进样体积1μl。以芍药苷色谱峰为参照峰s，计算各特征峰的相对保留时间和相对峰面积。
[0108]
结果显示供试品溶液在12小时内14个色谱峰相对保留时间的rsd为0.08％～0.64％，相对峰面积的rsd为0.21％～4.14％，表明该方法下供试品溶液在12小时内基本稳定。
[0109]
4.3重复性试验
[0110]
4.3.1取白芍标准汤剂(批号：bs1)粉末6份，制备供试品溶液，在规定色谱条件下进样测定。以芍药苷为参照峰，计算各共有峰的相对保留时间及相对峰面积，结果相对保留时间的rsd为0.15％～1.12％，相对峰面积的rsd为0.28％～3.32％，表明该方法重复性良好。
[0111]
4.3.2取白芍中药配方颗粒(批号：cg1710004)粉末6份，制备供试品溶液，在规定色谱条件下进样测定。以芍药苷为参照峰，计算各共有峰的相对保留时间及相对峰面积，结果相对保留时间的rsd为0.10％～1.56％，相对峰面积的rsd为0.33％～3.75％，表明该方法重复性良好。
[0112]
5.特征图谱的建立
[0113]
5.1白芍标准汤剂特征图谱的建立：对17批白芍标准汤剂共有峰信息进行分析。最终规定白芍标准汤剂特征图谱标准为：供试品特征图谱中应有14个特征峰，其中1号峰为没食子酸、4号峰为儿茶素、6号峰为芍药内酯苷、7号峰为芍药苷、9号峰为苯甲酸、11号峰为1，2，3，4，6-五没食子酰葡萄糖、13号峰为苯甲酰芍药苷，以上7个峰应分别与相应的对照品参照物峰保留时间相同；与芍药苷参照物峰(峰7)相对应的峰为s峰，计算另外7个峰与s峰的相对保留时间，应在规定值的
±
10％范围之内，相对保留时间规定值为0.67(峰2)、0.70(峰3)、0.78(峰5)、1.21(峰8)、1.28(峰10)、1.49(峰12)、1.86(峰14)。
[0114]
采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)对17批白芍标准汤剂图谱进行合成，建立了白芍标准汤剂特征图谱的对照图谱(见图3)，建立的特征图谱检测方法可以作为白芍标准汤剂和炒白芍标准汤剂的质量分析与鉴别方法。
[0115]
5.2使用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》对5批次的白芍中药配方颗粒uplc特征图谱进行匹配，以7号峰芍药苷为参照峰，生成对照图谱，建立白芍中药配方颗粒对照
特征图谱(见图4)。与白芍标准汤剂特征图谱对比，5批白芍配方颗粒的特征图谱具有与标准汤剂相同的14个特征峰，以峰7芍药苷峰为参照峰，各峰相对保留时间和相对峰面积值均落在标准汤剂特征图谱规定范围内。
[0116]
实施例2炒白芍标准汤剂和配方颗粒uplc特征图谱的构建
[0117]
1.试验方法
[0118]
1.1对照品溶液的制备：取5-hmf、没食子酸、儿茶素、芍药内酯苷、芍药苷、苯甲酸、1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖、苯甲酰芍药苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含5-hmf40μg/ml、没食子酸40μg/ml、儿茶素25μg/ml、芍药内酯苷124μg/ml、芍药苷86μg/ml、苯甲酸80μg/ml、1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖26μg/ml、苯甲酰芍药苷40μg/ml的溶液，摇匀，即得。
[0119]
1.2色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的waters acquity uplc hss t3色谱柱(2.1
×
150mm,1.8μm)，以乙腈为流动相a，以0.05％磷酸水溶液为流动相b，进行梯度洗脱(参见表3)，流速为0.3ml/min，柱温为30℃，检测波长为：0～10min，280nm，10～45min，230nm；进样量为1μl。
[0120]
表3梯度洗脱表
[0121][0122]
1.3供试品溶液的制备
[0123]
取炒白芍标准汤剂或炒白芍中药配方颗粒适量，研细，取约0.3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇25ml，称定重量，超声处理(功率250w，频率40khz)30分钟，放冷，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
[0124]
2.测定法：分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液1ul，注入超高效液相色谱仪，测定，即得。
[0125]
3.特征图谱共有峰的确定
[0126]
3.1取17批炒白芍标准汤剂(批号：cbs1～cbs17)、5批炒白芍配方颗粒(批号：cg1710007、cg1710008、cg1710009、cg1812005、cg1812006)，药材、颗粒来源信息见表4，制备供试品溶液，在规定的色谱条件下获得17批炒白芍标准汤剂、5批炒白芍配方颗粒uplc特征图谱(图5、图6)。
[0127]
表4药材、颗粒来源信息
[0128][0129]
3.2实验结果：17炒白芍标准汤剂、5批炒白芍配方颗粒uplc特征图谱均显示相同的16个共有峰，说明炒白芍标准汤剂与炒白芍配方颗粒的特征图谱基本一致，因此选择上述16个共有峰作为炒白芍标准汤剂、中药配方颗粒uplc特征图谱的特征峰，并以峰8(芍药苷)为参照峰进行标准研究。
[0130]
4.特征图谱方法学验证
[0131]
4.1精密度试验
[0132]
4.1.1取炒白芍标准汤剂(批号：cbs1)，制备供试品溶液，在规定色谱条件下连续进样6次，以芍药苷为参照峰，计算各共有峰的相对保留时间及相对峰面积。结果相对保留时间的rsd为0.07％～0.22％，相对峰面积的rsd为0.47％～1.28％，表明仪器精密度良好。
[0133]
4.1.2取炒白芍中药配方颗粒(批号：cg1710007)，制备供试品溶液，在规定色谱条件下连续进样6次，以芍药苷为参照峰，计算各共有峰的相对保留时间及相对峰面积。结果相对保留时间的rsd为0.12％～0.35％，相对峰面积的rsd为0.58％～2.36％，表明仪器精密度良好。
[0134]
4.2供试品溶液稳定性考察
[0135]
4.2.1取炒白芍标准汤剂(批号：cbs1)，制备供试品溶液，在规定色谱条件下，分别在0，2，4，8，12小时进样，进样体积1μl。以芍药苷色谱峰为参照峰s，计算各特征峰的相对保留时间和相对峰面积。
[0136]
结果显示供试品溶液在12小时内14个色谱峰相对保留时间的rsd为0.06％～0.35％，相对峰面积的rsd为0.32％～2.37％，表明该方法下供试品溶液在12小时内基本稳定。
[0137]
4.2.2取炒白芍中药配方颗粒(批号：cg1710007)，制备供试品溶液，在规定色谱条件下，分别在0，2，4，8，12小时进样，进样体积1μl。以芍药苷色谱峰为参照峰s，计算各特征峰的相对保留时间和相对峰面积。
[0138]
结果显示供试品溶液在12小时内14个色谱峰相对保留时间的rsd为0.05％～0.20％，相对峰面积的rsd为0.12％～4.16％，表明该方法下供试品溶液在12小时内基本稳定。
[0139]
4.3重复性试验
[0140]
4.3.1取炒白芍标准汤剂(批号：cbs1)粉末6份，制备供试品溶液，在规定色谱条件下进样测定。以芍药苷为参照峰，计算各共有峰的相对保留时间及相对峰面积。
[0141]
结果相对保留时间的rsd为0.13％～0.42％，相对峰面积的rsd为0.79％～3.17％，表明该方法重复性良好。
[0142]
4.3.2取炒白芍中药配方颗粒(批号：cg1710007)粉末6份，制备供试品溶液，在规定色谱条件下进样测定。以芍药苷为参照峰，计算各共有峰的相对保留时间及相对峰面积。
[0143]
结果相对保留时间的rsd为0.07％～0.35％，相对峰面积的rsd为0.56％～3.32％，表明该方法重复性良好。
[0144]
5.特征图谱的建立
[0145]
5.1炒白芍标准汤剂特征图谱的建立：对17批炒白芍标准汤剂共有峰信息进行分析。最终规定炒白芍标准汤剂特征图谱标准为：供试品特征图谱中应有16个特征峰，其中2号峰为没食子酸、3号峰为5-羟甲基糠醛(5-hmf)、5号峰为儿茶素、7号峰为芍药内酯苷、8号峰为芍药苷、10号峰为苯甲酸、12号峰为1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖、15号峰为苯甲酰芍药苷，以上8个峰应分别与相应的对照品参照物峰保留时间相同；与芍药苷参照物峰相对应的峰为s峰，计算另外8个峰与s峰的相对保留时间，应在规定值的
±
10％范围之内，相对保留时间规定值为0.19(峰1)、0.67(峰4)、0.78(峰6)、1.21(峰9)、1.28(峰11)、1.49(峰13)、1.61(峰14)、1.86(峰16)。
[0146]
采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)对17批炒白芍标准汤剂图谱进行合成，建立了炒白芍标准汤剂特征图谱的对照图谱(见图7)，建立的特征图谱检测方法可以作为白芍标准汤剂和炒白芍标准汤剂的质量分析鉴别。
[0147]
5.2使用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》对5批次的炒白芍中药配方颗粒uplc特征图谱进行匹配，以8号峰芍药苷为参照峰，生成对照图谱，建立炒白芍配方颗粒对照特征图谱(见图8)。与炒白芍标准汤剂特征图谱对比，5批炒白芍配方颗粒的特征图谱具有与标准汤剂相同的16个特征峰，以峰8芍药苷峰为参照峰，各峰相对保留时间和相对峰面积值均落在标准汤剂特征图谱规定范围内。
[0148]
实施例3白芍标准汤剂与炒白芍标准汤剂uplc特征图谱的鉴别
[0149]
标准汤剂的制备：取白芍药材3批(批号：yg1701001、yg1701002、yg1701003)，按照《中国药典》2015年版白芍项下饮片炮制规范，炮制得白芍饮片(批号：bs1701001、bs1701002、bs1701003)和炒白芍饮片(批号：cbs1701001、cbs1701002、cbs1701003)，分别制备标准汤剂。取白芍(炒白芍)饮片100g，加水煎煮二次，第一次加9倍量水，浸泡30分钟，煎煮30分钟，用350目筛网趁热过滤，滤液迅速用冷水冷却。第二次加7倍量水，煎煮25分钟，用350目筛网趁热过滤，滤液迅速用冷水冷却，合并两次滤液。将合并后的滤液转移至旋转蒸发仪中浓缩，浓缩至清膏含固率约为11～12％，分装至10ml西林瓶中，每瓶分装体积为2ml，半加塞，分装完毕后转移至真空冷冻干燥机中冻干，取出，轧上铝盖，即得。
[0150]
取上述标准汤剂制备供试品溶液，分别按照上述构建的uplc特征图谱进行测定，结果见图9。如图所示，白芍标准汤剂的uplc特征图谱显示了14个共有峰(s1～s3)，而炒白芍标准汤剂的uplc特征图谱显示了16个共有峰(s4～s6)，由此该方法可以鉴别白芍与炒白芍标准汤剂。
[0151]
实施例4白芍中药配方颗粒和炒白芍中药配方颗粒uplc特征图谱的鉴别
[0152]
配方颗粒的制备：分别取白芍饮片(批号：bs1701001、bs1701002、bs1701003)和炒白芍饮片3批(批号：cbs1701001、cbs1701002、cbs1701003)，按照传统方法加水煎煮，滤过，滤液浓缩成清膏，加入辅料适量，干燥，再加入辅料适量，混匀，制粒，即得。
[0153]
取白芍中药配方颗粒和炒白芍中药配方颗粒制备供试品溶液，分别按照上述构建
的uplc特征图谱进行测定，结果见图10。如图所示，白芍中药配方颗粒的uplc特征图谱显示了14个共有峰(s1～s3)，而炒白芍中药配方颗粒的uplc特征图谱显示了16个共有峰(s4～s6)，该方法可以鉴别白芍与炒白芍中药配方颗粒。
[0154]
以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。
[0155]
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。