[0001]
本发明涉及医药技术领域，具体为一种基于代谢组学通路的心肌梗塞早期预警方法。
背景技术：
[0002]
心肌梗塞又称心肌梗死，是指心肌的缺血性坏死，为在冠状动脉病变的基础上，冠状动脉的血流急剧减少或中断，使相应的心肌出现严重而持久地急性缺血，最终导致心肌的缺血性坏死，发生急性心肌梗死的病人，在临床上常有持久的胸骨后剧烈疼痛、发热、白细胞计数增高、血清心肌酶升高以及心电图反映心肌急性损伤、缺血和坏死的一系列特征性演变，并可出现心律失常、休克或心力衰竭，属急性冠脉综合征的严重类型。
[0003]
通过代谢组学可以映射早期生化变化对疾病的扰动，从而提供开发预测生物标志物的机会，这些生物标志物可以为疾病早期干预和对疾病机制的研究提供宝贵的见解，医药研究者发现中药在防治心肌梗塞方面药物疗效确切，副作用较小，改善心肌梗塞症状的中药其抗动脉硬化和抗血小板的作用是明确的，而目前还未能对丹参抗心肌梗塞的相关血清潜在标志物的含量变化进行分析，继而无法对潜在标志物进行代谢通路分析，不利于患者心肌梗塞的早期预警，影响医学研究者对疾病机制的研究。
技术实现要素：
[0004]
(一)解决的技术问题
[0005]
针对现有技术的不足，本发明提供了一种基于代谢组学通路的心肌梗塞早期预警方法，解决了未能对丹参抗心肌梗塞的相关血清潜在标志物的含量变化进行分析，继而无法对潜在标志物进行代谢通路分析，不利于患者心肌梗塞的早期预警，影响医学研究者对疾病机制研究的问题。
[0006]
(二)技术方案
[0007]
为实现以上目的，本发明通过以下技术方案予以实现：一种基于代谢组学通路的心肌梗塞早期预警方法，具体包括以下步骤：
[0008]
s1、纳入气虚不足以及胸闷气急的患者10名，健康且无症状的健康者10名，健康者正常生活不作干预，气虚不足患者给予丹参中药配方颗粒进行服用；
[0009]
s2、分别对两组受试者干预前、后进行清晨空腹血液样本采集，将采集后的血液沉降1.5h，在温度5℃条件下离心10min，离心后进行密封，置于-80℃低温冰箱保存，在对血液样本进行测定前，将样本从-80℃低温冰箱中取出，4℃下解冻；每250μl血清加700μl乙腈，涡旋震荡1min，静置10min，在温度54℃以及转速为3000r
·
min-1的条件下离心10min后取上清液，过0.22μm有机系滤膜，得到血液标本；
[0010]
s3、根据s2中，在室温25℃条件下，用检测仪器步骤s3中的血液标本，采用cpmg脉冲序列进行检测，脉冲序列可以压制水峰和大分子的信号，从而检测血清中小分子代谢物；
[0011]
s4、采用pls-da模型的重要变量因子，即vip值(vip＞1.0)，并结合t检验的p值(p<
0.05)来寻找健康组与气虚不足组的差异代谢物信息，在其中筛选与给药组共同具有显著性差异影响的化合物作为丹参影响气虚不足体质患者的生物标志物，将代谢物信息经人类代谢组数据库检索，初步比对并推测出13个代谢标志物；
[0012]
s5、进一步利用京都基因与基因组百科全书数据库对鉴定的潜在生物标记物进行代谢通路分析，得出13个代谢标志物通过影响体内的抗氧化及免疫功能、能量代谢、甘油、脂肪酸、糖代谢及胆汁酸代谢进而参与了人参治疗气虚不足以及胸闷气急体质的主要代谢过程，13个代谢标志物形成了相互交错的代谢网络，阐释了丹参治疗脾气虚体质的作用机制。
[0013]
优选的，所述步骤s1中丹参中药配方颗粒的服用方法为每次1包，每日2次，共服用4周。
[0014]
优选的，所述步骤s3中的检测仪器为varian inova 600mhz nmr核磁共振仪。
[0015]
优选的，所述步骤s3中的脉冲序列具体参数设置为：谱宽8000hz，采样点64k，弛豫时间为6s，采集时间为1.5s，自旋回波时间320ms。
[0016]
优选的，所述varian inova 600mhz nmr核磁共振仪具体参数如下：谱宽8000hz，采样点64k，采样时间4s，弛豫延迟0s，均在弛豫延迟期间采用预饱和照射水峰。
[0017]
(三)有益效果
[0018]
本发明提供了一种基于代谢组学通路的心肌梗塞早期预警方法。具备以下有益效果：该基于代谢组学通路的心肌梗塞早期预警方法，通过s1、纳入气虚不足以及易胸闷气急的患者10名，健康且无症状的健康者10名，健康者正常生活不作干预，气虚不足患者给予丹参中药配方颗粒进行服用；s2、分别对两组受试者干预前、后进行清晨空腹血液样本采集，将采集后的血液沉降1.5h，在温度5℃条件下离心10min，离心后进行密封，置于-80℃低温冰箱保存，在对血液样本进行测定前，将样本从-80℃低温冰箱中取出，4℃下解冻；每250μl血清加700μl乙腈，涡旋震荡1min，静置10min，在温度54℃以及转速为3000r
·
min-1的条件下离心10min后取上清液，过0.22μm有机系滤膜，得到血液标本；s3、根据s2中，在室温25℃条件下，用检测仪器步骤s3中的血液标本，采用(carr-purcell-merboom-gill)cpmg脉冲序列进行检测，脉冲序列可以压制水峰和大分子的信号，从而检测血清中小分子代谢物；s4、采用pls-da模型的重要变量因子，即vip值(vip＞1.0)，并结合t检验的p值(p<0.05)来寻找健康组与气虚不足组的差异代谢物信息，在其中筛选与给药组共同具有显著性差异影响的化合物作为丹参影响气虚不足体质患者的生物标志物，将代谢物信息经人类代谢组数据库检索，初步比对并推测出13个代谢标志物；s5、进一步利用京都基因与基因组百科全书数据库对鉴定的潜在生物标记物进行代谢通路分析，得出13个代谢标志物通过影响体内的抗氧化及免疫功能、能量代谢、甘油、脂肪酸、糖代谢及胆汁酸代谢进而参与了人参治疗气虚不足以及易胸闷气急体质的主要代谢过程，13个代谢标志物形成了相互交错的代谢网络，阐释了丹参治疗脾气虚体质的作用机制，本发明利用核磁共振技术结合多元统计对丹参抗心肌梗塞相关血清潜在标志物的含量变化进行分析，继而对潜在标志物进行代谢通路分析，利于对患者心肌梗塞的早期预警，便于医学研究者对疾病机制的研究。
具体实施方式
[0019]
下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施
例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
[0020]
本发明实施例提供一种技术方案：一种基于代谢组学通路的心肌梗塞早期预警方法，本发明利用核磁共振技术结合多元统计对丹参抗心肌梗塞相关血清潜在标志物的含量变化进行分析，继而对潜在标志物进行代谢通路分析，利于对患者心肌梗塞的早期预警，便于医学研究者对疾病机制的研究，具体包括以下步骤：
[0021]
s1、纳入气虚不足以及胸闷气急的患者10名，健康且无症状的健康者10名，健康者正常生活不作干预，气虚不足患者给予丹参中药配方颗粒进行服用；
[0022]
s2、分别对两组受试者干预前、后进行清晨空腹血液样本采集，将采集后的血液沉降1.5h，在温度5℃条件下离心10min，离心后进行密封，置于-80℃低温冰箱保存，在对血液样本进行测定前，将样本从-80℃低温冰箱中取出，4℃下解冻；每250μl血清加700μl乙腈，涡旋震荡1min，静置10min，在温度54℃以及转速为3000r
·
min-1的条件下离心10min后取上清液，过0.22μm有机系滤膜，得到血液标本；
[0023]
s3、根据s2中，在室温25℃条件下，用检测仪器步骤s3中的血液标本，采用cpmg脉冲序列进行检测，脉冲序列可以压制水峰和大分子的信号，从而检测血清中小分子代谢物；
[0024]
s4、采用pls-da模型的重要变量因子，即vip值(vip＞1.0)，并结合t检验的p值(p<0.05)来寻找健康组与气虚不足组的差异代谢物信息，在其中筛选与给药组共同具有显著性差异影响的化合物作为丹参影响气虚不足体质患者的生物标志物，将代谢物信息经人类代谢组数据库检索，初步比对并推测出13个代谢标志物；
[0025]
s5、进一步利用京都基因与基因组百科全书数据库对鉴定的潜在生物标记物进行代谢通路分析，得出13个代谢标志物通过影响体内的抗氧化及免疫功能、能量代谢、甘油、脂肪酸、糖代谢及胆汁酸代谢进而参与了人参治疗气虚不足以及胸闷气急体质的主要代谢过程，13个代谢标志物形成了相互交错的代谢网络，阐释了丹参治疗脾气虚体质的作用机制，kegg(京都基因)是了解高级功能和生物系统(如细胞、生物和生态系统)，从分子水平信息，尤其是大型分子数据集生成的基因组测序和其他高通量实验技术的实用程序数据库资源。
[0026]
本发明中，步骤s1中丹参中药配方颗粒的服用方法为每次1包，每日2次，共服用4周。
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本发明中，步骤s3中的检测仪器为varian inova 600mhz nmr核磁共振仪，核磁共振仪(mr)是一种生物磁自旋成像技术，它是利用原子核自旋运动的特点，在外加磁场内，经射频脉冲激后产生信号，用探测器检测并输入计算机，经过处理转换在屏幕上显示图像，mr提供的信息量不但大于医学影像学中的其他许多成像术，而且不同于已有的成像术，因此，它对疾病的诊断具有很大的潜在优越性，它可以直接作出横断面、矢状面、冠状面和各种斜面的体层图像，不会产生ct检测中的伪影；不需注射造影剂；无电离辐射，对机体没有不良影响，mr对检测脑内血肿、脑外血肿、脑肿瘤、颅内动脉瘤、动静脉血管畸形、脑缺血、椎管内肿瘤、脊髓空洞症和脊髓积水等颅脑常见疾病非常有效，同时对腰椎椎间盘后突、原发性肝癌等疾病的诊断也很有效。
[0028]
本发明中，步骤s3中的脉冲序列具体参数设置为：谱宽8000hz，采样点64k，弛豫时
间为6s，采集时间为1.5s，自旋回波时间320ms。
[0029]
本发明中，varian inova 600mhz nmr核磁共振仪具体参数如下：谱宽8000hz，采样点64k，采样时间4s，弛豫延迟0s，均在弛豫延迟期间采用预饱和照射水峰。
[0030]
需要说明的是，在本文中，诸如第一和第二等之类的关系术语仅仅用来将一个实体或者操作与另一个实体或操作区分开来，而不一定要求或者暗示这些实体或操作之间存在任何这种实际的关系或者顺序。而且，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。
[0031]
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。