1.本发明涉及一种氢溴酸右美沙芬质量控制方法，具体涉及一种氢溴酸右美沙芬有关物质的检测方法。
背景技术：
2.氢溴酸右美沙芬（dextromethorphan hydrobromide，dm）是由瑞士 hoffman roche 公司上世纪五十年代通过对吗啡结构改造人工合成的，其左旋的化合物有镇痛作用，dm作为右旋性的吗啡喃衍生物没有镇痛作用而具有明显的镇咳作用，因此又名右甲吗喃。
3.dm为白色或类白色结晶性粉末，无臭，在乙醇中易溶，在三氯甲烷中溶解，在水中略溶，在乙醚中不溶，其分子式为c
18h25
no
•
hbr
•
h2o，化学名称为3-甲氧基-17-甲基-(9α,13α,14α)-吗啡喃氢溴酸一水合物，结构式如下：氢溴酸右美沙芬订入质量标准的已知杂质有6个，分别为《美国药典》41版（usp41）中的左美沙芬（左美沙芬为右美沙芬的手性异构体，需采用手性色谱柱单独测量，此文未进一步赘述），《中国药典》2015年版（chp2015）杂质i、杂质ii、杂质iii、杂质iv和《英国药典》2020版（bp2020）/《欧洲药典》98版（ep9.8）杂质d，结构式详见图1。
4.而根据中国药品监督管理局2016年第80号通告附件“关于发布化学药品新注册分类申报资料要求（试行）”和2016年第120号通告附件“化学药品仿制药口服固体制剂质量和疗效一致性评价申报资料要求（试行）”的规定：原料或制剂的质量标准制定时，应提供充分的依据（包括是否符合我国与ich颁布的指导原则、各国现行版药典的要求、与原研药质量对比研究的结果等），证明质量标准制定的合理性。 对超出鉴定限度的杂质，均应按照国内外相关指导原则的要求作进一步的研究（包括该杂质的结构确证研究、安全性研究等)，并结合与原研厂产品杂质谱对比研究的结果及现行版国内外药典收载的同品种对该特定杂质的限度要求，在质量标准的有关物质项下作为特定杂质单独制定合理的限度。
5.也就是说，作为生产企业，需要同时检测中国药典规定的四种杂质和欧洲药典规定的四种杂质，合并这两个标准中氢溴酸右美沙芬需要检测的杂质，则应该同时检测杂质i、杂质ii、杂质iii、杂质iv以及杂质d。
6.目前《中国药典》2015年版（chp2015）色谱条件为：色谱柱agilent zorbax sb c
18
, 4.6mm
×
250mm, 5
µ
m；流动相：缓冲液(取磺基丁二酸钠二辛酯3.11g与硝酸铵0.56g，加水
450ml与乙腈300ml使溶解，用冰醋酸约220ml调节ph 值至2. 0，用水稀释至1000ml)-乙腈（72:28，v/v）相关物质测定结果见表1，典型色谱图见图2。
7.通过色谱图可以看到，杂质d和杂质iv几乎重合，无法计算与相邻色谱峰之间的分离度。
8.采用《英国药典》2020版（bp2020）/《欧洲药典》98版（ep9.8）色谱条件为：色谱柱c
18
，4.6mm
×
250mm, 5
µ
m；流动相：称取3.11g磺基丁二酸钠二辛酯，置于400ml水与600ml乙腈混合液，加硝酸钠0.56g，用冰醋酸调节ph值至2.0。
9.结果见表2和表3，典型色谱图见图3。结果见表2和表3，典型色谱图见图3。
10.通过色谱图可以看到，杂质d和杂质iv分离度仅为1.0，小于1.5，不符合质量标准要求。
11.通过以上图谱可知，采用现有技术测定右美沙芬的相关物质，分离度达不到要求，因此无法满足同时测定五种杂质的目的。
技术实现要素：
12.本发明的目的在于克服现有技术的缺陷，提供一种分离时间短，分离度好，定量限低，结果准确，可有效检测氢溴酸右美沙芬制剂或原料中的有关物质。
13.本发明创造性地发现，通过对流动相进行改善，即可得到一种分离时间短，分离度好，定量限低，结果准确，并能同时测定五种杂质的氢溴酸右美沙芬原料有关物质检测方法。
14.具体而言，本发明提供的一种氢溴酸右美沙芬有关物质的检测方法，所选用的色谱条件为：色谱柱为c
18
色谱柱或其它同类色谱柱；柱温：35℃
±
5℃；流动相中缓冲液与乙腈配比为78:22-76:24；缓冲液制备方法为取磺基丁二酸钠二辛酯3.11g与硝酸钠0.56g，加水450ml与乙腈300ml使溶解，加冰醋酸240ml，用水稀释至1000ml；流速：1.0
±
0.2ml/min；检测波长：280nm。
15.其中色谱条件中流动相为缓冲液：乙腈-78:22；柱温为35℃；流速：1.0ml/min。
16.所用的色谱柱优选为：c
18
，4.6
×
250mm，5
µ
m。
17.采用本发明检测方法对氢溴酸右美沙芬原料进行有关物质含量测定，结果见表4和表5，典型色谱图见图4。
18.通过色谱图可以看出，各已知杂质之间、各已知杂质与主成分之间分离度均大于1.5。该方法可有效检测氢溴酸右美沙芬中的已知杂质。
19.为阐述本发明检测方法的特点和建立过程，特将研究方法陈述如下：本文基于chp2015、bp2020/ep9.8色谱系统，优化色谱条件，建立了一种有效测定氢溴酸右美沙芬原料中有关物质的方法，并进行相应的系统适用性、专属性、检测限和耐用性等方法学验证试验，重点考察各杂质在不同的色谱条件下主成分保留时间和各已知杂质相对保留时间的变化范围，以更好的评估各已知杂质的色谱行为。
20.1. 实验部分1.1 仪器、试剂与物料waters e2695 高效液相色谱仪（empower色谱工作站)；s210 ph计（梅特勒），xpe 105电子分析天平（梅特勒）。
21.磺基丁二酸钠二辛酯（化学纯、纯度96%、纯度97%、纯度99%和纯度99.0%）分别购自国药集团化学试剂有限公司、山东西亚化工有限公司、百灵威和美国sigma-aldrich公司；冰醋酸（分析纯）购自天津大茂；乙腈（色谱纯）购自德国merck公司；硝酸钠和磷酸（分析纯）均购自天津科密欧有限公司。
22.氢溴酸右美沙芬杂质ⅰ、杂质ⅱ、杂质ⅲ和杂质ⅳ对照品均购自英国lgc；氢溴酸右美沙芬杂质d对照品购自加拿大trc。
23.氢溴酸右美沙芬原料样品分别由wockhardt limited/印度，divis laboratories limited/印度和赤峰艾克制药科技有限公司提供。
24.1.2 溶液的配制系统适用性溶液：取氢溴酸右美沙对照品和杂质iii对照品各适量，加稀释剂溶解并稀释成每1ml中约含氢溴酸右美沙芬1.5mg、杂质
ⅲꢀ
15
µ
g的溶液。
25.供试品溶液：取本品适量，加流动相溶解并稀释制成每1ml中约含氢溴酸右美沙芬1.5mg的溶液，作为供试品溶液。
26.对照溶液：精密移取供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，即得。
27.灵敏度溶液：精密移取对照溶液1ml，置20ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，即得。
28.定量限溶液：精密称取氢溴酸右美沙芬各杂质对照品适量，加稀释剂溶解并稀释制成每ml中含杂质ⅰ、ⅱ、ⅲ、ⅳ、d 各约0.75mg的溶液。
29.100%加样溶液：精密称取氢溴酸右美沙芬原料药适量，加稀释剂溶解并稀释制成
每ml中约含杂质ⅰ/ⅳ/ii/iii/d限度浓度的溶液。
30.1.3 色谱条件色谱柱：c
18
，4.6
×
250mm，5
µ
m或其它同类色谱柱；流动相：缓冲液（取磺基丁二酸钠二辛酯3.11g与硝酸钠0.56g，加水450ml与乙腈300ml使溶解，加冰醋酸240ml，用水稀释至1000ml）-乙腈（78:22，v/v）；柱温：35℃；流速：1.0ml/min；检测波长：280nm；进样体积：20
µ
l。2、方法与结果2.1 色谱条件的优化chp2015、bp2020/ep9.8流动相的缓冲盐均选用磺基丁二酸钠二辛酯（docusate sodium，简称：ds），试验过程中发现，选用不同厂家或同一厂家不同批次的ds，主成分的保留时间有明显差异，因此，我们着重考察了不同厂家的ds对主成分保留时间的影响情况。首先，采用山东西亚化工（两批次）和国药（两批次）共4批次ds配制相同体积（1l）的缓冲盐时，如果均按chp2015方法用冰醋酸调节缓冲盐ph至2.0，所用的冰醋酸的体积不同（230ml至304ml），且主成分的保留时间差异很大（20.300
ꢀ-
34.859），保留时间变化近15分钟，详见表6。
31.其次，我们采用国药的ds（批号：20180316）和固定冰醋酸加入量的方法进一步考察了主成分的保留，分别加入冰醋酸180 ml，200ml，220 ml和240 ml ，结果240 ml时分离效果最好，主峰与相邻已知杂质的分离度、相邻已知杂质间的分离度均不小于1.5。详见表7。
32.接着，我们采用了4批ds（国药2批，西亚化工1批，百灵威1批）验证冰醋酸加入量为
240ml的可行性，结果主峰保留时间变化范围介于20min和26min之间，主峰与相邻已知杂质的分离度、相邻已知杂质间的分离度均不小于1.5，且各已知杂质峰的相对保留时间稳定。详见表8。
33.综上，我们修订了chp2015中流动相的配制方法，由调节缓冲液的ph至2.0调整为固定冰醋酸的加入量（240ml/l），不再控制缓冲盐的ph。
34.2.2.3主成分保留时间的漂移流动相中存在表面活性剂，主成分的保留时间会有所漂移。试验采用四批不同厂家和/或不同纯度的ds，考察主成分10小时内保留时间的漂移情况。详见表9。
35.由表9可知，采用多厂家多批次ds配制的流动相时，主成分保留时间均有漂移，但当采用sigma提供的纯度大于99.0%的ds时，主成分的漂移情况明显优于其他厂家其他纯度的ds。
36.2.2.4干扰试验供试品溶液和100%加样溶液中，右美沙芬峰及杂质ⅰ、ⅱ、ⅲ、ⅳ和d与其相邻大于loq水平色谱峰的分离度均不小于1.5，典型色谱图见图5-图6。
37.2.2.4 定量限杂质ⅰ、ⅱ、ⅲ、ⅳ、d定量限均约相当于供试品浓度的0.05%。典型色谱图见7。
38.2.2.5 准确度为了验证方法的准确度，采用向氢溴酸右美沙芬原料药供试品溶液中准确加入已知量的杂质对照品，设计3个浓度水平的测试溶液，结果详见图8。
39.结果表明，杂质ⅰ、ⅱ、ⅲ、ⅳ、d在三个浓度水平下的回收率均介于80.0%-120.0%之间，该方法准确度可靠，可以准确地测定氢溴酸右美沙芬原料的有关物质。
40.2.2.6 耐用性试验按下表10变动某一液相色谱条件，而其他条件保持不变。
41.考察各变动的色谱条件下各已知杂质的相对保留时间、与相邻峰的分离度及校正因子。结果表明，各个变动的色谱条件下，已知杂质ii、杂质iii、杂质iv、杂质d和杂质i的出峰顺序相同，相对保留时间和各杂质的校正因子均无明显变化；各已知杂质与相邻色谱峰的分离度均不小于1.2。
42.同时，考察100%加样溶液中杂质ⅰ、ⅱ、ⅲ、ⅳ、d的回收率相对于初始值的百分比，结果见图9。
43.综上，该色谱条件在流速1.0
±
0.2ml/min、柱温35℃
±
5℃、流动相中缓冲盐和乙腈的比例（78:22～76:24）、同一厂家不同批次的色谱柱是耐用的。
44.2.2.7样品的测定精密量取灵敏度溶液20
µ
l进样，主成分峰高的信噪比应不大于10。精密量取对照溶液和供试品溶液各20
µ
l分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍。供试品溶液色谱图中如有已知杂质峰，按加校正因子（其中未知杂质的校正因子按1.0计算）的1%自身对照法计算各杂质的含量。供试品溶液色谱图中小于灵敏度溶液主峰面积的色谱峰忽略不计。结果见表11。
45.由表11可知，三批样品均未检出杂质。
46.3.结论本工作是在参考国内外相关文献和各国药典基础上，建立了同时测定氢溴酸右美沙芬原料中各已知杂质i、ii、iii、iv和d的rp-hplc法。与chp2015、bp2020和ep9.8收载的氢溴酸右美沙芬质量标准方法相比，本方法实现了已知杂质i、ii、iii、iv和d的有效分离，尤其是相邻已知杂质iv和杂质d的有效分离，主成分与相邻色谱峰、各已知杂质与相邻色谱峰之间的分离度均不小于1.5，并通过耐用性试验得出各已知杂质的相对保留时间。同时，制定了一种新的流动相的配制方法，解决了因不同厂家不同批次间ds差异导致的主成分保留时间不重现的问题。该方法分离时间短，分离度好，定量限低，结果准确，可有效检测氢溴酸右美沙芬中的有关物质。
附图说明
47.图1：氢溴酸右美沙芬杂质i、ii、iii、iv和d结构式；图2：chp2015色谱条件下的色谱图；图3：bp2020和ep9.8色谱条件下的色谱图；图4：本发明检测方法色谱条件下的色谱图；图5：供试品溶液色谱图；图6：100%加样溶液色谱图；图7：杂质定量限溶液有关物质液相色谱图；图8：杂质ⅰ、ⅱ、ⅲ、ⅳ、d在三个浓度水平下的准确度；图9：100%加样溶液中杂质ⅰ、ⅱ、ⅲ、ⅳ、d的回收率与正常条件下测得的回收率的比值（%）；图10： wockhardt limited/印度样品色谱图；图11： divis laboratories limited/印度样品色谱图；图12： 赤峰艾克制药科技有限公司样品色谱图。
具体实施方式
48.发明人采用了由wockhardt limited/印度，divis laboratories limited/印度和赤峰艾克制药科技有限公司三个公司提供的样品分别进行实验，以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
49.实施例11. 实验部分1.1 仪器、试剂与物料waters e2695 高效液相色谱仪（empower色谱工作站)；s210 ph计（梅特勒），xpe 105电子分析天平（梅特勒）。
50.磺基丁二酸钠二辛酯（化学纯、纯度96%、纯度97%、纯度99%和纯度99.0%）分别购自国药集团化学试剂有限公司、山东西亚化工有限公司、百灵威和美国sigma-aldrich公司；冰醋酸（分析纯）购自天津大茂；乙腈（色谱纯）购自德国merck公司；硝酸钠和磷酸（分析纯）均购自天津科密欧有限公司。
51.氢溴酸右美沙芬杂质ⅰ、杂质ⅱ、杂质ⅲ和杂质ⅳ对照品均购自英国lgc；氢溴酸右美沙芬杂质d对照品购自加拿大trc。
52.氢溴酸右美沙芬原料样品由wockhardt limited/印度提供。
53.1.2 溶液的配制供试品溶液：取本品适量，加流动相溶解并稀释制成每1ml中约含氢溴酸右美沙芬1.5mg的溶液，作为供试品溶液。
54.1.3 色谱条件色谱柱：c
18
，4.6
×
250mm，5
µ
m；流动相：缓冲液（取磺基丁二酸钠二辛酯3.11g与硝酸钠0.56g，加水450ml与乙腈300ml使溶解，加冰醋酸240ml，用水稀释至1000ml）-乙腈（78:22，v/v）；柱温：35℃；流速：1.0ml/min；检测波长：280nm；进样体积：20
µ
l。
55.2.实验结果：杂质i：未检出（＜0.05%）、杂质ii未检出（＜0.05%）、杂质iii未检出（＜0.05%）、杂质iv未检出（＜0.05%）、杂质d未检出（＜0.05%）、其他单个未知杂质（%）未检出（＜0.05%）、总杂质（%）＜0.05%。
56.实施例21. 实验部分1.1 仪器、试剂与物料waters e2695 高效液相色谱仪（empower色谱工作站)；s210 ph计（梅特勒），xpe 105电子分析天平（梅特勒）。
57.磺基丁二酸钠二辛酯（化学纯、纯度96%、纯度97%、纯度99%和纯度99.0%）分别购自国药集团化学试剂有限公司、山东西亚化工有限公司、百灵威和美国sigma-aldrich公司；冰醋酸（分析纯）购自天津大茂；乙腈（色谱纯）购自德国merck公司；硝酸钠和磷酸（分析纯）均购自天津科密欧有限公司。
58.氢溴酸右美沙芬杂质ⅰ、杂质ⅱ、杂质ⅲ和杂质ⅳ对照品均购自英国lgc；氢溴酸右美沙芬杂质d对照品购自加拿大trc。
59.氢溴酸右美沙芬原料样品由divis laboratories limited/印度提供。
60.1.2 溶液的配制供试品溶液：取本品适量，加流动相溶解并稀释制成每1ml中约含氢溴酸右美沙芬1.5mg的溶液，作为供试品溶液。
61.1.3 色谱条件
色谱柱：c
18
，4.6
×
250mm，5
µ
m；流动相：缓冲液（取磺基丁二酸钠二辛酯3.11g与硝酸钠0.56g，加水450ml与乙腈300ml使溶解，加冰醋酸240ml，用水稀释至1000ml）-乙腈（78:22，v/v）；柱温：35℃；流速：1.0ml/min；检测波长：280nm；进样体积：20
µ
l。
62.2.实验结果：杂质i：未检出（＜0.05%）、杂质ii未检出（＜0.05%）、杂质iii未检出（＜0.05%）、杂质iv未检出（＜0.05%）、杂质d未检出（＜0.05%）、其他单个未知杂质（%）未检出（＜0.05%）、总杂质（%）＜0.05%。
63.实施例31. 实验部分1.1 仪器、试剂与物料waters e2695 高效液相色谱仪（empower色谱工作站)；s210 ph计（梅特勒），xpe 105电子分析天平（梅特勒）。
64.磺基丁二酸钠二辛酯（化学纯、纯度96%、纯度97%、纯度99%和纯度99.0%）分别购自国药集团化学试剂有限公司、山东西亚化工有限公司、百灵威和美国sigma-aldrich公司；冰醋酸（分析纯）购自天津大茂；乙腈（色谱纯）购自德国merck公司；硝酸钠和磷酸（分析纯）均购自天津科密欧有限公司。
65.氢溴酸右美沙芬杂质ⅰ、杂质ⅱ、杂质ⅲ和杂质ⅳ对照品均购自英国lgc；氢溴酸右美沙芬杂质d对照品购自加拿大trc。
66.氢溴酸右美沙芬原料样品由赤峰艾克制药科技有限公司提供。
67.1.2 溶液的配制供试品溶液：取本品适量，加流动相溶解并稀释制成每1ml中约含氢溴酸右美沙芬1.5mg的溶液，作为供试品溶液。
68.1.3 色谱条件色谱柱：c
18
，4.6
×
250mm，5
µ
m；流动相：缓冲液（取磺基丁二酸钠二辛酯3.11g与硝酸钠0.56g，加水450ml与乙腈300ml使溶解，加冰醋酸240ml，用水稀释至1000ml）-乙腈（78:22，v/v）；柱温：35℃；流速：1.0ml/min；检测波长：280nm；进样体积：20
µ
l。
69.2.实验结果：杂质i：未检出（＜0.05%）、杂质ii未检出（＜0.05%）、杂质iii未检出（＜0.05%）、杂质iv未检出（＜0.05%）、杂质d未检出（＜0.05%）、其他单个未知杂质（%）未检出（＜0.05%）、总杂质（%）＜0.05%。
70.虽然，上文中已经用一般性说明、具体实施方式及试验，对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。