一种醛类物质的新型检测方法及其应用与流程

本发明属于医学检测领域，更具体地，本发明涉及一种醛类物质的新型检测方法及其应用。
背景技术：
：分子里由烃基和醛基相连而构成的化合物为醛类物质。人或动物体通过酶系统与非酶系统产生氧自由基，后者攻击生物膜中的多不饱和脂肪酸，可引发脂质过氧化作用，从而形成脂质过氧化物，如丙二醛(mda)等。人或动物体中少量的氧自由基的存在对机体不构成威胁，而且可以帮助传递维持生命力的能量，增强免疫力、消除炎症、抑制肿瘤等。但体内氧自由基过多会加速机体衰老程度，并可能会引起中风、关节炎、肝病肾病、帕金森疾病、慢性肾脏疾病、心血管疾病、慢性阻塞性肺疾病、糖尿病、氧化应激脆弱胃肠道等疾病的发生。此时通过检测丙二醛的水平即可检测脂质氧化的水平，间接地反映出细胞损伤的程度，因而丙二醛的测定被广泛用作脂质氧化的指标，即氧自由基水平。此外，醛类物质还存在于多种多样的物质或环境中，例如油脂，食品、饮料，动植物细胞或组织裂解液或细胞培养的上清，血液、尿液等体液样品，动植物加工产物溶液，含有或潜在含有醛类物质的溶液(包括非人或动物来源的溶液)，含有或潜在含有醛类物质的悬浮液(包括非人或动物来源的悬浮液)等。因此，有必要进行醛类物质的检测。美国专利no.6165797中公开了一种醛检测法。检测尿液丙二醛的存在是用混合试剂组成的。约90-110部分的20％醋酸，约13.5--16.5部分的成分a，约4.5--5.5部分的成分b，其中的a组分是由约在18到22克焦亚硫酸钠，9-11m1浓磷酸、和大约450-550毫升去离子水；b组分由碱性品红和a组分组成，碱性品红约为0.45-0.55克，a组分约为90-110ml。该方法加入尿液样品后反应非常迅速，会导致因为ph值的改变，而显色，引起假阳性结果。专利cn103901029b描述了一种氧化损伤体外检测方法和试剂盒，该方法是在待检测尿液中先添加高浓度的磷酸盐缓冲液，然后再加入品红显色剂。该方法配制品红显色剂使用的是中强酸浓磷酸，有腐蚀性；检测过程中使用的高浓度磷酸盐配制也比较困难，并且增加了检测步骤。综上，本领域亟待进行进一步的研究，以开发更优化的醛类物质的检测方法和检测试剂，尤其是低毒性、环境友好、低成本且简单便捷的检测方法和检测试剂。技术实现要素：本发明的目的在于提供一种醛类物质的新型检测方法及其应用。在本发明的第一方面，提供一种用于检测醛类物质的试剂盒，中包括：(a)无色品红溶液，以及(b)磷酸二氢钠缓冲液；(a)中包括：碱性品红，马来酸，偏重亚硫酸钠；(b)中ph值为2～4。在一个优选例中，(a)中含有：碱性品红0.5～8g/l；马来酸3～30ml/l；偏重亚硫酸钠3～30g/l；在另一优选例中，(a)中含有：碱性品红1～6g/l；马来酸5～20ml/l；偏重亚硫酸钠5～20g/l；在另一优选例中，(a)中各个组分置于水中。在另一优选例中，所述马来酸为纯度大于90％、95％、98％、或99％或纯度为100％的马来酸。在另一优选例中，(a)的无色品红溶液为碱性品红、马来酸、偏重亚硫酸钠混匀后，以活性炭进行吸附处理后获得的无色品红溶液；较佳地活性炭用量10-500g/l，更佳地活性炭用量20～100g/l在另一优选例中，(b)中ph值为2.5～3.5。在另一优选例中，所述碱性品红的浓度例如但不限于：2、3、4、5g/l。在另一优选例中，所述马来酸的浓度例如但不限于：6、8、10、12、15、18ml/l。在另一优选例中，所述偏重亚硫酸钠的浓度例如但不限于：6、8、10、12、15、18g/l。在另一优选例中，所述活性炭的用量例如但不限于：30、40、50、60、70、80、90g/l。在另一优选例中，(b)中ph值例如但不限于：2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4。在另一优选例中，所述的水为蒸馏水。在另一优选例中，(a)和(b)分别被置于独立的容器中。在另一优选例中，(a)和(b)被混合于一个容器中。在另一优选例中，其中(a)无色品红溶液与(b)磷酸二氢钠缓冲液按照体积比1:(0.5～20)混合；较佳地按照体积比1:(1～10)混合；更佳地按照体积比1:(2～5)混合。在另一优选例中，(a)和(b)例如但不限于按照体积比1:1，1:2，1:3，1:4，1:5，1:6，1:8混合。在另一优选例中，所述试剂盒中还包括：甲酸、乙酸、丙酸、丁酸、戊酸、己酸、庚酸、辛酸或这些弱酸或中强酸的衍生物。在另一优选例中，所述试剂盒中还包括甲酸盐、乙酸盐、丙酸盐、丁酸盐、戊酸盐、己酸盐、庚酸盐、辛酸盐、碳酸盐、磺酸盐或这些弱酸或中强酸盐的衍生物。在另一优选例中，所述试剂盒中还包括：比色卡；所述比色卡包括下组颜色：本色(无色)至微黄之间，微黄至见红之间，浅红至红色之间，红至深红之间。在另一优选例中，所述试剂盒中还包括：吸光度范围值与醛类物质含量的对应说明。在另一优选例中，所述试剂盒中还包括：滤纸。在另一优选例中，所述试剂盒中还包括：检测容器。在另一优选例中，所述试剂盒中还包括颜色在本色至微黄之间(a545下吸光度0～0.04)时，为正常值；颜色在微黄至浅红之间(a545下吸光度0.04～0.5)时，为醛含量稍高；颜色在浅红至红色之间(a545下吸光度0.5～1)时，为醛含量高；颜色在红至深色之间(a545下吸光度大于1)时，为醛含量极高。在本发明的另一方面，提供无色品红溶液(a)以及磷酸二氢钠缓冲液(b)在制备检测醛类物质的检测试剂或试剂盒中的应用；其中，(a)中包括：碱性品红，马来酸，偏重亚硫酸钠；(b)中ph值为2～4。在一个优选例中，(a)中含有：碱性品红0.5～8g/l，马来酸3～30ml/l，偏重亚硫酸钠3-30g/l；较佳地，碱性品红、马来酸、偏重亚硫酸钠混匀后，以活性炭进行吸附处理。在另一优选例中，(b)中ph值为2.5～3.5；或在另一优选例中，(a)与(b)按照体积比1:(0.5～20)混合；较佳地按照体积比1:(1～10)混合；更佳地按照体积比1:(2～5)混合。在本发明的另一方面，提供一种制备用于检测醛类物质的检测试剂的方法，包括：(i)制备无色品红溶液，其中包括：将碱性品红，马来酸，偏重亚硫酸钠进行混合，以活性炭进行吸附处理；较佳地，还包括过滤去除活性炭；(ii)将(i)的溶液与ph值为2～4的磷酸二氢钠缓冲液混合，获得用于检测醛类物质的检测试剂；较佳地，(i)的溶液与ph值为2～4的磷酸二氢钠缓冲液按照体积比1:(0.5～20)混合；较佳地按照体积比1:(1～10)混合；更佳地按照体积比1:(2～5)混合。在一个优选例中，(i)中，加入马来酸的同时，还包括：加入马来酸体积0.1-50％的其它弱酸或中强酸；较佳地，所述弱酸或中强酸包括选自：甲酸、乙酸、丙酸、丁酸、戊酸、己酸、庚酸、辛酸或这些弱酸或中强酸的衍生物，或其组合。在另一优选例中，(ii)中，在缓冲液中同时添加0.1％-50％的其他弱酸或中强酸盐，；较佳地，所述弱酸或中强酸盐包括选自：甲酸盐、乙酸盐、丙酸盐、丁酸盐、戊酸盐、己酸盐、庚酸盐、辛酸盐、碳酸盐、磺酸盐或这些弱酸或中强酸盐的衍生物，或其组合。在本发明的另一方面，提供一种检测醛类物质的方法，包括：(1)利用所述的方法制备用于检测醛类物质的检测试剂；(2)将待测样品与所述检测试剂混合，观察测试液颜色变化，从而确定醛类物质的存在情况或存在量。在一个优选例中，(2)中，通过溶液颜色观察来确定醛类物质的存在情况或存在量：测试液颜色在本色至微黄之间时，为正常值；颜色在微黄至浅红之间时，为醛含量稍高；颜色在浅红至红色之间时，为醛含量高；颜色在红至深色之间时，为醛含量极高；或在另一优选例中，(2)中，通过测定溶液吸光度值来确定醛类物质的存在情况或存在量：所述测试液a545下吸光度0～0.04时，为正常值；a545下吸光度0.04～0.5时，为醛含量稍高；a545下吸光度0.5～1时，为醛含量高；a545下吸光度大于1时，为醛含量极高。在另一优选例中，所述测试液可被置于检测容器中。在另一优选例中，所述待测样品包括：尿液，血清，体液，油脂，饮料，植物体液或溶液，动植物加工产物溶液，含有或潜在含有醛类物质的溶液(包括非人或动物来源的溶液)，含有或潜在含有醛类物质的悬浮液(包括非人或动物来源的悬浮液)等。在另一优选例中，所述的醛类物质包括选自下组：甲醛、乙醛、丙醛、丁醛、戊醛、己醛、庚醛、丙二醛、戊二醛、辛醛、壬醛、癸醛、十一醛、月桂醛(十二醛)、十三醛、肉豆蔻醛(十四醛)、甲基己基乙醛、甲基辛基乙醛、甲基壬基乙醛、三甲基己醛、四甲基己醛、反-2-己烯醛、2-壬烯醛、反-4-癸烯醛、十一烯醛、壬二烯醛等、女贞醛、艾薇醛、异环柠檬醛、柑青醛、甲基柑青醛、新铃兰醛、苯甲醛、苯乙醛、苯丙醛、桂醛、铃兰醛、香兰素、乙基香兰素、柠檬醛、香茅醛、羟基香茅醛、紫苏醛、三甲基庚烯醛等，或其组合。本发明的其它方面由于本文的公开内容，对本领域的技术人员而言是显而易见的。附图说明图1、配制不同含量的甲醛或戊二醛溶液，加入到含有检测液中，用酶标仪检测a545吸光值的测定结果。图2、活性炭不同配制的品红溶液，加入不同ph值的缓冲液，用酶标仪检测a545吸光值的测定结果。图3、无色品红溶液，加入不同ph值的缓冲液，用酶标仪检测a545吸光值。具体实施方式本发明人经过深入的研究，提出了一种新型的检测醛类物质的方法，包括将无色品红溶液(含有碱性品红、马来酸、偏重亚硫酸钠)与磷酸二氢钠缓冲液进行混合获得检测液，将待测样品与该检测液混合，通过观测显色情况判断醛类物质的存在情况或存在量。本发明的方法利用了环境更为友好的试剂实施检测，试剂的稳定性好，且检测方法便捷，灵敏度和准确性理想。检测试剂的制备本发明的反应原理为：首先品红(红色)与h2so3反应生成无色schiff试剂(如下式)，之后schiff试剂与醛反应，构成溶液颜色变化。品红是一种红色染料，将二氧化硫通入品红水溶液中，品红的红色褪去，得到的无色溶液称为品红亚硫酸试剂。偏重亚硫酸钠是合成无色品红的原料，提供硫酸根离子。希夫试剂(schiff)又称品红亚硫酸试剂。本发明人在深入研究和筛选后发现，使用马来酸来制备显色液，可以生成更加稳定的显色液(无色品红溶液)，该显色液环境友好，检测效果理想。马来酸又称顺丁烯二酸，其结构式如下：其固体为单斜晶系无色结晶，溶于水、乙醇和丙酮，不同于苯。现有技术中，马来酸常被用于制备不饱和树脂和松香脂等用途；用于制药、树脂合成；也用作油和油脂的防腐剂用途；用于生产农药马拉松、达净松，合成不饱和聚酯树脂、酒石酸、反chemicalbook丁烯二酸、琥珀酸等产品；用于涂料、食品和印染助剂及渍脂防腐剂等。尽管马来酸在现有技术中被较多地应用于化工合成领域，但是应用其来与品红溶液配伍，制备检测醛类物质是本领域从未报导的。本发明人首次突破性地将之应用于醛类物质的检测。基于本发明人的新发现，本发明提供一种制备用于检测醛类物质的检测试剂的方法，包括：制备无色品红溶液；以及将该无色品红溶液与ph值为2～4的磷酸二氢钠缓冲液混合，获得用于检测醛类物质的检测试剂。所述的制备无色品红溶液，包括步骤：将碱性品红、马来酸、偏重亚硫酸钠进行混合。在本发明的优选的方式中，首先将碱性品红溶于蒸馏水中，加入马来酸(较佳地为缓慢加入)，之后加入偏重亚硫酸钠，混匀后静置一段时间(如4～18小时，如静置过夜)。本发明中，首次披露了可使用马来酸来制备显色液(无色品红溶液)，本发明人发现，其可以生成更加稳定的显色液，并有效避免使用强酸的腐蚀性的问题。使用本发明人优化后的检测溶液可以检测出1ppm的醛含量，醛含量越高，吸光值越高。作为本发明的优选方式，在将碱性品红、马来酸、偏重亚硫酸钠混匀、静置后，还包括：加入活性炭进行吸附处理，获得无色品红溶液。作为本发明的优选方式，在利用活性炭进行吸附处理后，还包括过滤去除活性炭。本发明对于过滤的方法没有特别的限制，例如可以运用滤纸，使得滤液能够穿过滤纸，而活性炭则被截留、去除。针对本发明的溶液体系，本发明人也优化了活性炭的使用量。因此，作为本发明的优选方式，较佳地活性炭用量10-500g/l，更佳地活性炭用量20～100g/l。本发明人发现，在优选的活性炭使用量下，溶液体系的稳定性、整体检测的稳定性较为理想。同时，本发明人还发现，本发明的利用活性炭的操作方式(包括添加时机以及添加量等)，可使得所获得的检测液对ph值的耐受性更高。作为本发明的优选方式，无色品红溶液与ph值为2～4(优选ph值为2.5～3.5)的磷酸二氢钠缓冲液按照一定的比例进行混合，该体积比可以为1:(0.5～20)；较佳地按照体积比1:(1～10)混合；更佳地按照体积比1:(2～5)混合。本发明人发现，过高的ph值导致背景值偏高，造成假阳性。由此，本发明人测试了不同ph值时，检测试剂的背景值，得到了较佳的ph值范围。在此基础上，本发明使用了一种有效的缓冲液，可以有效避免样品ph值不适合而引起的假阳性。作为本发明的优选方式，在配制无色品红溶液时，加入马来酸的同时，还包括：加入马来酸体积0.1-50％的其它弱酸或中强酸；较佳地，所述弱酸或中强酸包括选自：甲酸、乙酸、丙酸、丁酸、戊酸、己酸、庚酸、辛酸或这些弱酸或中强酸的衍生物，或其组合。本发明中，所述磷酸二氢钠缓冲液可以有效降低样品的ph值不适合引起的假阳性。作为本发明的优选方式，磷酸二氢钠缓冲液中，还可同时添加0.1％-50％的其他弱酸或中强酸盐；较佳地，所述弱酸或中强酸盐包括选自：甲酸盐、乙酸盐、丙酸盐、丁酸盐、戊酸盐、己酸盐、庚酸盐、辛酸盐、碳酸盐、磺酸盐或这些弱酸或中强酸盐的衍生物，或其组合。马来酸与其他强酸相比，无挥发性和腐蚀性，更安全方便。利用本发明的方法制备的用于检测醛类物质的检测试剂，不仅整体制备过程毒害性低、环境友好；而且检测效果理想，敏感性和准确性俱佳。本发明所述的磷酸二氢钠缓冲液，ph值合适、稳定性好，其可以和无色品红预先混合，形成一种即用型试剂，使用时更方便快捷。与需将缓冲液添加到样品中、再添加检测试剂的检测方式相比，本发明的检测方式在操作步骤上的便捷是显然的。检测方法基于本发明前述制备的检测试剂(检测液)，本发明还提供了一种检测醛类物质的方法，包括：将待测样品与所述检测试剂混合，观察测试液颜色变化，从而确定醛类物质的存在情况或存在量。本发明中，所述的醛类物质可包括(但不限于)：甲醛、乙醛、丙醛、丁醛、戊醛、己醛、庚醛、丙二醛、戊二醛、辛醛、壬醛、癸醛、十一醛、月桂醛(十二醛)、十三醛、肉豆蔻醛(十四醛)、甲基己基乙醛、甲基辛基乙醛、甲基壬基乙醛、三甲基己醛、四甲基己醛、反-2-己烯醛、2-壬烯醛、反-4-癸烯醛、十一烯醛、壬二烯醛等、女贞醛、艾薇醛、异环柠檬醛、柑青醛、甲基柑青醛、新铃兰醛、苯甲醛、苯乙醛、苯丙醛、桂醛、铃兰醛、香兰素、乙基香兰素、柠檬醛、香茅醛、羟基香茅醛、紫苏醛、三甲基庚烯醛等，或它们的组合。本发明的检测方法中，对于待测样品没有特别的限制，可以是多种多样的潜在含有醛类物质的感兴趣的物质。这些物质可以是固态或液态的，当为固态物质时，可以在检测前进行加工处理，使之变为液体或溶液状态。此外应理解，在需要时，可以对待测样品进行一定倍数的稀释或浓缩，从而使得检测效果更为理想。对待测样品的梯度稀释或浓缩，是本领域技术人员可以实现的。本发明所述待测样品例如可以是(但不限于)：尿液，血清，体液，油脂，食品、饮料，细胞或组织裂解液或细胞培养的上清，动植物加工产物溶液，含有或潜在含有醛类物质的溶液(包括非人或动物来源的溶液)，含有或潜在含有醛类物质的悬浮液(包括非人或动物来源的悬浮液)等。作为本发明的一种优选方式，提供一种即时确定醛类物质的存在情况或存在量的方案，包括对待测样品与所述检测试剂混合的混合体系的颜色进行观测和判断。如本发明所用，能参考相应的比色卡提供定量的检测数值结果，从而通过颜色的深浅程度，已可一定程度较为准确地了解到醛类物质的存在量。大致判断时，具体地，所述测试液颜色在本色至微黄之间时，为正常值；颜色在微黄至浅红之间时，为醛含量稍高；颜色在浅红至红色之间时，为醛含量高；颜色在红至深色之间时，为醛含量极高。这种确定醛类物质的存在情况或存在量的方案，作为本发明的一种优选方式，提供一种准确地定量醛类物质的存在量的方案。包括，对待测样品与所述检测试剂混合的混合体系进行吸光度检测，获得吸光度值，根据该吸光度值来分析醛类物质的存在量。作为本发明的优选方式，所述的吸光度值为在a545下的吸光度值。所述测试液a545下吸光度0～0.04时，为正常值；a545下吸光度0.04～0.5时，为醛含量稍高；a545下吸光度0.5～1时，为醛含量高；a545下吸光度大于1时，为醛含量极高。根据吸光值的高低可以很好地判断醛类物质的量。作为本发明的一种具体实施方式，提供了一种相对具体的检测方案，其中所述检测液包括：无色品红溶液和缓冲液两部分；所述无色品红溶液：0.5-5g碱性品红、1l蒸馏水、马来酸10ml，偏重亚硫酸钠10g、10-20g活性炭。所述缓冲液：1m磷酸二氢钠(ph为2.5-3.8)。检测时，应用的检测液为：缓冲液150μl、无色品红100μl。具体检测时，取1ml尿液，加入含有250μl检测液的容器中，混匀后5-10分钟观察颜色变化颜色在无色至微黄之间时，为正常值；颜色在微黄至浅红之间时，为醛含量稍高；颜色在浅红至红色之间时，为醛含量高；颜色在红至深色之间时，为醛含量极高。此外，其它的一些更具体的实施方案，在本发明的实施例中有呈现。检测试剂盒基于本发明人的新发现，本发明还提供了一种用于检测醛类物质的试剂盒，其中包括：(a)无色品红溶液，包括：碱性品红，马来酸，偏重亚硫酸钠；以及(b)磷酸二氢钠缓冲液，ph值为2～4。在本发明的优选方式中，(a)中含有：碱性品红0.5～8g/l、马来酸3～30ml/l、偏重亚硫酸钠3-30g/l，它们三者相互混合，优选地进一步利用活性炭对混合体系进行吸附处理，从而获得无色品红溶液。较佳地，所述无色品红溶液以水(如蒸馏水)进行配制。在本发明所述的试剂盒中，作为一种优选的方式，(a)和(b)可分别被置于独立的容器中。当应用于检测时，将(a)和(b)进行混合，现配先用，添加至待测样品中。在本发明所述的试剂盒中，作为一种优选的方式，(a)和(b)可被预先置于同一容器中进行混合。当应用于检测时，直接将之添加至待测样品中。在本发明的优选方式中，所述试剂盒中还可包括其它一些与醛类物质的检测相关的试剂或材料，包括但不限于：甲酸、乙酸、丙酸、丁酸、戊酸、己酸、庚酸、辛酸或这些弱酸或中强酸的衍生物；甲酸盐、乙酸盐、丙酸盐、丁酸盐、戊酸盐、己酸盐、庚酸盐、辛酸盐、碳酸盐、磺酸盐或这些弱酸或中强酸盐的衍生物；滤纸。在本发明的优选方式中，所述试剂盒中还可包括比色卡，较佳地其包括下组颜色：本色(无色)至微黄之间，微黄至见红之间，浅红至红色之间，红至深红之间。并可以对不同组颜色标注相应的参考浓度。在本发明的优选方式中，所述试剂盒中还可包括检测容器。在本发明的优选方式中，所述试剂盒中还可包括使用说明书，以指导本领域技术人员以相对准确的方法应用本发明的试剂盒。例如，所述说明书中科包括：吸光度范围值与醛类物质含量的对应说明。本发明中，使用马来酸来制备无色品红，其使得检测液状态稳定、且其环境友好、安全，配制和使用方便。本发明优化了活性炭的应用，可以减少试剂对ph值变化的影响。本发明中还使用该缓冲液体系直接加入检测试剂中，更方便、有效地避免检测时的假阳性。下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。实施例1、活性炭的用量比较1、制备检测液无色品红溶液的制备：0.5g碱性品红，溶于1l蒸馏水，缓慢加入马来酸5ml，加入偏重亚硫酸钠5g，混匀后，4℃静置过夜。第2天加入活性炭，混匀后，静置1h，用双层滤纸过滤，至无色透明液体，即为无色品红溶液。其中，活性炭的添加为：1.0版：添加10g活性炭；2.0版：添加50g活性炭。缓冲液：1m磷酸二氢钠(ph为2.5)，ph为2.93～6(表2)。2、实验方法活性炭不同配制的品红溶液100μl，加入不同ph值的缓冲液1ml，混匀后10分钟，吸取200ul，用酶标仪检测a545吸光值。结果如表1和图2。表1表2和图2结果说明，2.0版本对ph值的耐受性更高：1.0版本在ph值为4.45～6时，吸光值数值显著很大、可见背景值过高、明显存在假阳性；而利用该2.0版本，则可容许在相对高的ph值下保持相对低的背景值。因此，优选的活性炭用量范围为20～100g。实施例2、缓冲液ph值的优化1、制备检测液无色品红溶液的制备：2.5g碱性品红，溶于1l蒸馏水，缓慢加入马来酸5ml，加入偏重亚硫酸钠5g，混匀后，4℃静置过夜。第2天加入20g活性炭，混匀后，静置1h，用双层滤纸过滤，至无色透明液体，即为无色品红溶液。缓冲液：1m磷酸二氢钠(ph为2.5)，ph为2.32～6(表3)。2、实验方法无色品红溶液100μl，加入不同ph值的缓冲液1ml，混匀后10分钟，吸取200ul，用酶标仪检测a545吸光值。结果如表2和图3。表2表2和图3结果说明，使用不同ph的缓冲液时，检测试剂盒的背景值不同，超过ph4.4的缓冲液，会呈现明显的背景值增大的倾向，考虑避免背景值。优选的缓冲液ph值范围为2.5～3.82。实施例3、以标准品甲醛作为检测样品1、制备检测液无色品红溶液的制备：5g碱性品红，溶于1l蒸馏水，缓慢加入马来酸10ml，乙酸1ml、丙酸0.5ml，加入偏重亚硫酸钠10g，混匀后，4℃静置过夜。第2天加入30g活性炭，混匀后，静置1h，用双层滤纸过滤，至无色透明液体，即为无色品红溶液。缓冲液：1m磷酸二氢钠(ph为2.5)。检测液：上述制备的无色品红溶液中加入5倍的上述缓冲液，混匀分装在密闭的检测容器中。2、实验方法配制不同含量(表1浓度)的甲醛或戊二醛溶液1ml，加入到含有250μl检测液的容器中，混匀后10分钟，吸取200ul，用酶标仪检测a545吸光值。高于0.04的吸光值即可表示阳性。检测标准品甲醛的结果如表3和图1。表3该结果说明，使用本发明优化后的检测溶液可以检测出低至1ppm或更低的醛含量，醛含量越高，吸光值越高。实施例4、品红与缓冲液ph值的相关性及其检测一1、制备检测液无色品红溶液的制备：2.5g碱性品红，溶于1l蒸馏水，缓慢加入马来酸15ml，加入偏重亚硫酸钠5g，混匀后，4℃静置过夜。第2天加入50g活性炭，混匀后，静置1h，用双层滤纸过滤，至无色透明液体，即为无色品红溶液。缓冲液：1m磷酸二氢钠，ph为3.6～5(表4)。2、品红受缓冲液的影响无色品红溶液100μl，加入不同ph值的缓冲液1ml，混匀后10分钟，吸取200ul，用酶标仪检测a545吸光值。测定品红受缓冲液的影响，结果如表4。表4表4结果说明，缓冲液高于4.2时，背景值影响大。3、检测含甲醛样品缓冲液：1m磷酸二氢钠(ph为2.5)。检测液：上述制备的无色品红溶液中加入5倍的上述缓冲液，混匀分装在密闭的检测容器中。配制不同含量的甲醛溶液1ml，加入到含有检测液的容器中，混匀后10分钟，吸取200ul，用酶标仪检测a545吸光值。高于0.04的吸光值即可表示阳性。检测含甲醛样品，结果如表5。表5表5结果说明，使用本发明优化后的检测溶液可以检测出低至1ppm的醛含量，醛含量越高，吸光值越高。实施例5、品红与缓冲液ph值的相关性及其检测二1、制备检测液无色品红溶液的制备：5g碱性品红，溶于1l蒸馏水，缓慢加入马来酸15ml，加入偏重亚硫酸钠10g，混匀后，4℃静置过夜。第2天加入50g活性炭，混匀后，静置1h，用双层滤纸过滤，至无色透明液体，即为无色品红溶液。缓冲液：1m磷酸二氢钠(ph为2.5)，ph为3.6～5(表4)。2、品红受缓冲液的影响无色品红溶液100μl，加入不同ph值的缓冲液1ml，混匀后10分钟，吸取200ul，用酶标仪检测a545吸光值。检测品红受缓冲液的影响，结果如表6。表6表6结果说明，缓冲液高于4.2时，背景值偏高。3、检测含甲醛样品缓冲液：1m磷酸二氢钠(ph为2.5)。检测液：上述制备的无色品红溶液中加入5倍的上述缓冲液，混匀分装在密闭的检测容器中。配制不同含量的甲醛溶液1ml，加入到含有检测液的容器中，混匀后10分钟，吸取200ul，用酶标仪检测a545吸光值。高于0.04的吸光值即可表示阳性。检测含甲醛样品，结果如表7。表7甲醛浓度(ppm)4020.0010.005.002.501.250.630a5451.4860.4040.1500.0750.0450.0430.0390.038表7结果说明，使用本发明优化后的检测溶液可以检测出低至1ppm的醛含量，醛含量越高，吸光值越高。实施例6、品红与缓冲液ph值的相关性及其检测三1、制备检测液无色品红溶液的制备：8g碱性品红，溶于1l蒸馏水，缓慢加入马来酸20ml，加入偏重亚硫酸钠16g，混匀后，4℃静置过夜。第2天加60g活性炭，混匀后，静置1h，用双层滤纸过滤，至无色透明液体，即为无色品红溶液。缓冲液：1m磷酸二氢钠(ph为2.5)，ph为3.6～5(表4)。2、品红受缓冲液的影响无色品红溶液100μl，加入不同ph值的缓冲液1ml，混匀后10分钟，吸取200ul，用酶标仪检测a545吸光值。检测品红受缓冲液的影响，结果如表8。表8表8结果说明，缓冲液高于4.2时，背景值偏高。3、检测含甲醛样品缓冲液：1m磷酸二氢钠(ph为2.5)。检测液：上述制备的无色品红溶液中加入5倍的上述缓冲液，混匀分装在密闭的检测容器中。配制不同含量的甲醛溶液1ml，加入到含有检测液的容器中，混匀后10分钟，吸取200ul，用酶标仪检测a545吸光值。高于0.04的吸光值即可表示阳性。检测含甲醛样品，结果如表9。表9甲醛浓度(ppm)4020.0010.005.002.501.250.630a5451.2950.4820.1560.0770.0530.0470.0390.041表9结果说明，使用本发明优化后的检测溶液可以检测出低至1ppm的醛含量，醛含量越高，吸光值越高。实施例7、尿液中醛类物质的检测例11、制备检测液无色品红溶液的制备：0.5g碱性品红，溶于1l蒸馏水，缓慢加入马来酸10ml，加入偏重亚硫酸钠10g，混匀后，4℃静置过夜。第2天加入10g活性炭，混匀后，静置1h，用双层滤纸过滤，至无色透明液体，即为无色品红溶液。缓冲液：1m磷酸二氢钠(ph为2.5)。检测液：上述制备的无色品红溶液中加入1倍的上述缓冲液，混匀分装在密闭的检测容器中。室温可稳定保存，4℃、避光条件可以保存更长时间。2、醛类物质的检测采集小鼠尿液，加入不同含量的甲醛，取1ml加入含100μl检测液的检测容器中，混匀，静置5-10分钟观察颜色变化。颜色在无色至微黄之间时，为正常值；颜色在微黄至浅红之间时，为醛含量稍高；颜色在浅红至红色之间时，为醛含量高；颜色在红至深色之间时，为醛含量极高。表10甲醛浓度(ppm)4020.0010.005.002.501.250.630a5452.7461.4940.8550.7000.6730.6480.6540.649从a545结果看，高于0.04的吸光值即可表示阳性。表10结果说明，醛含量越高，吸光值越高，使用本发明优化后的检测溶液可以检测出尿液中低至1ppm甚至更低的醛含量。实施例8、尿液中醛类物质的检测例21、制备检测液无色品红溶液的制备：2.5g碱性品红，溶于1l蒸馏水，缓慢加入马来酸10ml，乙酸0.5ml、丙酸1ml，加入偏重亚硫酸钠10g，混匀后，4℃静置过夜。第二天加入20g活性炭，混匀后，静置1h，用双层滤纸过滤，至无色透明液体，即为无色品红溶液。缓冲液：1m磷酸二氢钠(ph为3.6)。检测液：上述制备的无色品红溶液中加入2.5倍的1m磷酸二氢钠(ph为3.6)，混匀分装在密闭的检测容器中。室温可稳定保存，4℃、避光条件可以保存更长时间。2、醛类物质的检测采集小鼠尿液，加入不同含量的甲醛，取1ml加入含100μl检测液的检测容器中，混匀，静置5-10分钟观察颜色变化。颜色在无色至微黄之间时，为正常值；颜色在微黄至浅红之间时，为醛含量稍高；颜色在浅红至红色之间时，为醛含量高；颜色在红至深色之间时，为醛含量极高。表11浓度(ppm)4020.0010.005.002.501.250.630a5452.0861.1140.8500.7830.7550.7540.7460.748从a545结果看，高于0.04的吸光值即可表示阳性。表11结果说明，使用本发明优化后的检测溶液可以检测出尿液中低至1ppm的醛含量，醛含量越高，吸光值越高。实施例9、尿液中醛类物质的检测例3无色品红溶液的制备：5g碱性品红，溶于1l蒸馏水，缓慢加入马来酸10ml，加入偏重亚硫酸钠10g，混匀后，4℃静置过夜。第二天加入30g活性炭，混匀后，静置1h，用双层滤纸过滤，至无色透明液体，即为无色品红溶液。缓冲液：1m磷酸二氢钠(ph为3.8)。检测液：上述制备的无色品红溶液中加入5倍的1m磷酸二氢钠(ph为3.8)，混匀分装在密闭的检测容器中。室温可稳定保存，4℃、避光条件可以保存更长时间。2、醛类物质的检测采集小鼠尿液，加入不同含量的甲醛，取1ml加入含100μl检测液的检测容器中，混匀，静置5-10分钟观察颜色变化。颜色在无色至微黄之间时，为正常值；颜色在微黄至浅红之间时，为醛含量稍高；颜色在浅红至红色之间时，为醛含量高；颜色在红至深色之间时，为醛含量极高。表12浓度(ppm)4020.0010.005.002.501.250.630a5452.1551.2720.9340.8700.8630.8570.8490.811从a545结果看，高于0.04的吸光值即可表示阳性。表12结果说明，使用本发明优化后的检测溶液可以检测出尿液中低至1ppm的醛含量，醛含量越高，吸光值越高。实施例10、试剂盒的制备1、试剂盒1制备试剂盒1，其中含有无色品红溶液、缓冲液，具体如下：无色品红溶液：0.5-8g碱性品红(优选5g)，溶于1l蒸馏水，缓慢加入马来酸3-30ml(较佳地5-20ml，更佳的为8-12ml)，加入偏重亚硫酸钠3-30g(5-20g更佳，最佳的为8-12g)，充分溶解并混匀。再加入10-500g活性炭(20-100g更适合)，混匀后，静置20-120分钟，用滤纸过滤，即为无色品红溶液。缓冲液：1m磷酸二氢钠；ph为2-4；ph为2.5-3.5更适合。上述制备的无色品红溶液和缓冲液被独立地置于容器中，装于试剂盒。2、试剂盒2制备试剂盒1检测液：缓冲液15μl，无色品红溶液10μl，混合获得25μl检测液。将该检测液置于容器中，装于试剂盒。本发明制备的试剂盒，缓冲液可直接配置在检测液中，是即用型的；与将缓冲液添加到样品中，再添加检测试剂的检测方式相比，利用本发明的试剂盒的检测方式更为便捷。本发明运用马来酸，不仅检测效果理想，而且安全性分析显示，检测溶液中运用马来酸比强酸如浓硫酸更安全，腐蚀性更低。3、利用上述试剂盒2的检测检测时，可取0.1ml尿液，加入含有25μl检测液的容器中，混匀后5-10分钟观察颜色变化。颜色在无色至微黄之间时，为正常值；颜色在微黄至浅红之间时，为醛含量稍高；颜色在浅红至红色之间时，为醛含量高；颜色在红至深色之间时，为醛含量极高。检测液和样品可以按照比例放大或缩小体积，样品的用量也可以在适当的范围适当加大或减小。在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。当前第1页12