本发明属于药物分析技术领域，具体涉及一种盐酸氨溴索口服溶液中有机杂质的检测方法。
背景技术：
盐酸氨溴索口服溶液，英文名为ambroxolhydrochlorideoralsolution，其活性成分为盐酸氨溴索，是一种临床上常用的祛痰药，具有疗效好、安全性高、不良反应少、质量稳定、价格合理、使用方便等特点，目前已作为国家基本药物，能满足临床基本和必要的需求。
近年来，药物安全性已成为全社会越来越关注的焦点，也是临床用药选择的首要依据，而药品的杂质状况是评价药品安全性最直接的指标，因此针对药品的有关物质（有机杂质）研究及控制是保证药品安全的关键要素之一。
目前在国内外药典中，仅中国药典收载了盐酸氨溴索口服溶液，但是中国药典的质量标准中未针对杂质进行控制；在进口注册标准中（标准号：jx20010114），虽然有收载有关物质项，但是其中的检测方法因专属性差等原因不能满足现有的法规要求。上述情况均提示我们，由于缺乏一种专属灵敏的针对盐酸氨溴索口服溶液中有机杂质的检测方法，导致本品在临床用药时存在一定的安全隐患。
技术实现要素：
为了有效可靠的控制盐酸氨溴索口服溶液药品的安全性，本发明提供了一种盐酸氨溴索口服溶液有机杂质的检测方法。
我们在前期的试验研究中发现，采用高效液相色谱法，以磷酸氢二胺-乙腈的流动相体系，结合梯度洗脱方式，可以有效的分离盐酸氨溴索口服溶液中的各个潜在有机杂质，并且该方法各关键评价指标（例如专属性、灵敏度、准确度、精密度以及耐用性等）均通过了验证，从而为盐酸氨溴索口服溶液提供了一种可靠的有机杂质检测方法。
一种盐酸氨溴索口服溶液中有机杂质的检测操作步骤如下：
（1）配制溶剂和四种溶液
先配制溶剂，所述溶剂由500mlph值7.0、浓度0.01mol/l的磷酸氢二铵溶液和500ml乙腈混合配制而成；
所述四种溶液分别为系统适用性溶液、空白辅料溶液、供试品溶液和对照溶液；
所述系统适用性溶液由盐酸氨溴索、氨溴索杂质a、氨溴索杂质b、氨溴索杂质d、氨溴索杂质e、氨溴索环亚胺和所述溶剂配制而成；每1ml系统适用性溶液中分别含有1.2mg盐酸氨溴索、2.4μg氨溴索杂质a、3.6μg氨溴索杂质b、2.4μg氨溴索杂质d、2.4μg氨溴索杂质e和2.4μg氨溴索环亚胺；
所述空白辅料溶液由空白辅料和所述溶剂配制成，所述空白辅料由40mg羟乙纤维素、15mg三氯蔗糖、5mg苯甲酸、20mg香草香精20mg、10mg蓝莓香精和10g纯化水混合制成；
所述供试品溶液由供试品和所述溶剂配制成，所述供试品为被检测盐酸氨溴索口服溶液；
所述对照溶液由所述供试品溶液和所述溶剂配制而成；
（2）高效液相色谱检测
采用高效液相色谱法，分别将20μl系统适用性溶液、20μl空白辅料溶液、20μl供试品溶液和20μl对照溶液注入高效液相色谱仪，分别用流动相进行梯度洗脱，分别记录四种溶液的色谱图；
在系统适用性溶液色谱图中，按氨溴索环亚胺、氨溴索杂质a、氨溴索杂质b、氨溴索、氨溴索杂质d、氨溴索杂质e顺序出峰，氨溴索杂质b峰与氨溴索峰之间的分离度应大于4.0，其余各色谱峰之间的分离度应不小于2.0；
供试品溶液色谱图与溶剂色谱图比较，扣除溶剂色谱图中的色谱峰；再与空白辅料溶液色谱图比较，扣除空白辅料溶液色谱图中的色谱峰；供试品溶液色谱图中如有其他杂质峰，与对照溶液所出的主峰峰面积进行比较；氨溴索杂质b的峰面积乘以校正因子1.5，不得大于对照溶液色谱图中主峰面积的1.5倍，氨溴索环亚胺色谱图的峰面积乘以校正因子1.4，不得大于对照溶液色谱图中主峰面积，其他单个杂质色谱图中峰面积不得大于对照溶液色谱图中主峰面积，各杂质色谱图的峰面积乘以校正因子后峰面积的和不得大于对照溶液色谱图中主峰面积的5倍；供试品溶液色谱图中小于对照溶液色谱图中主峰面积0.5倍的峰忽略不计；
当盐酸氨溴索口服溶液中氨溴索环亚胺、氨溴索杂质a、氨溴索杂质d与氨溴索杂质e的量均不大于氨溴索量的0.2%倍，氨溴索杂质b的量不大于氨溴索量的0.3%倍，其他未知结构的有机杂质的量不大于氨溴索量的0.2%倍，各有机杂质的总量不大于氨溴索量的1.0%倍，即为合格。
进一步限定的技术方案如下：
步骤（1）中，所述浓度0.01mol/l的磷酸氢二铵溶液用磷酸调节ph值至7.0。
步骤（1）中，系统适用性溶液的配制：将12.0mg盐酸氨溴索、24.0μg氨溴索杂质a、36.0μg氨溴索杂质b、24.0μg氨溴索杂质d、24.0μg氨溴索杂质e和24.0μg氨溴索环亚胺加入到10ml所述溶剂中，溶解混合均匀即可。
步骤（1）中，空白辅料溶液的配制：量取10ml所述空白辅料，用所述溶剂稀释至25ml，混合均匀即可。
步骤（1）中，供试品溶液的配制：量取10ml被检测盐酸氨溴索口服溶液，用所述溶剂稀释至25ml，混合均匀即可。
步骤（1）中，对照溶液的配制：量取所述供试品溶液5ml，用所述溶剂稀释至50ml，混合均匀，得到稀释液；精密量取1ml稀释液，用所述溶剂稀释至50ml，混合均匀即可。
步骤（2）中，所述高效液相色谱法使用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，使用welchxtimatexb-c18，4.6mm×250mm，5μm色谱柱或其他效能相当的色谱柱；以900ml浓度0.01mol/l的磷酸氢二铵溶液，磷酸调节ph值至7.0，加入100ml乙腈混匀，得到的混合溶液为流动相a；以300ml浓度0.01mol/l的磷酸氢二铵溶液，用磷酸调节ph值至7.0，加入700ml乙腈混匀，得到的混合溶液为流动相b；
流动相a和流动相b的流速之和为1.0ml/min；柱温为35℃；检测波长为248nm；进样体积20μl。
步骤（2）中，所述流动相的梯度洗脱操作如下：在0分钟-20分钟，流动相a为55%体积，流动相b为45%体积；在20分钟-52分钟内，流动相a由55%体积逐渐变化为10%体积，流动相b由45%体积逐渐变化为90%体积；在52分钟-52.1分钟内，流动相a由10%体积逐渐变化为55%体积，流动相b由90%体积逐渐变化为45%体积；在52.1分钟-60分钟内，流动相a为55%体积，流动相b为45%体积。
本发明的有益技术效果体现在以下方面：
1.本发明的检测方法，采用高效液相色谱法测定盐酸氨溴索口服溶液有机杂质；所述的检测方法操作简便、分离度高、专属性强以及准确度高。
2.本发明的盐酸氨溴索口服溶液中有机杂质检测方法，主要供企业内部生产药品放行检测使用，从而达到控制药品安全性及质量可控性的目的，解决了市场上长期缺乏专属灵敏的控制盐酸氨溴索口服溶液杂质方法的问题，为盐酸氨溴索口服溶液的质量安全有效可控提供了的新手段。
具体实施方式
通过实施例对本发明作进一步地描述。
实施例1
一种盐酸氨溴索口服溶液中有机杂质的检测操作步骤如下：
（1）配制溶剂和四种溶液
（1.1）溶剂的配制：取500ml浓度0.01mol/l的磷酸氢二铵溶液，用磷酸调节ph值至7.0，加入500ml乙腈，混匀。
（1.2）系统适用性溶液的配制：将12.0mg盐酸氨溴索、24.0μg氨溴索杂质a、36.0μg氨溴索杂质b、24.0μg氨溴索杂质d、24.0μg氨溴索杂质e和24.0μg氨溴索环亚胺加入到10ml所述溶剂中，溶解混合均匀即可。
（1.3）空白辅料溶液的配制：空白辅料由40mg羟乙纤维素、15mg三氯蔗糖、5mg苯甲酸、20mg香草香精20mg、10mg蓝莓香精和10g纯化水混合制成。精密量取10ml空白辅料，置于25ml量瓶中，用5ml溶剂分2次洗涤移液管内壁，洗液并入量瓶中，用溶剂稀释定容至25ml，摇匀。
（1.4）供试品溶液的配制：量取10ml被检测盐酸氨溴索口服溶液，置于25ml量瓶中，用5ml溶剂分2次洗涤移液管内壁，洗液并入量瓶中，用溶剂稀释定容至25ml，摇匀。
（1.5）对照溶液的配制：精密量取供试品溶液5ml，置于50ml量瓶中，用溶剂稀释至50ml，摇匀，得到稀释液；精密量取1ml稀释液，置于50ml量瓶中，用溶剂稀释至50ml，摇匀。
（2）液相色谱检测
本实施例的检测按照中国药典2020年版四部通则0512中收载的高效液相色谱法测定。
精密量取溶剂、系统适用性溶液、空白辅料溶液、供试品溶液与对照溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。
色谱条件使用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，即使用welchxtimatexb-c18，4.6mm×250mm，5μm色谱柱或其他效能相当的色谱柱；以0.01mol/l磷酸氢二铵，用磷酸调节ph值至7.0的溶液900ml，加入乙腈100ml的混合溶液为流动相a；以0.01mol/l磷酸氢二铵，用磷酸调节ph值至7.0的溶液300ml，加入乙腈700ml的混合溶液为流动相b，按下表进行梯度洗脱；流速为每分钟1.0ml；柱温为35℃；检测波长为248nm；进样体积20μl。
梯度洗脱操作如下：在0分钟-20分钟，流动相a为55%体积，流动相b为45%体积；在20分钟-52分钟内，流动相a由55%体积逐渐变化为10%体积，流动相b由45%体积逐渐变化为90%体积；在52分钟-52.1分钟内，流动相a由10%体积逐渐变化为55%体积，流动相b由90%体积逐渐变化为45%体积；在52.1分钟-60分钟内，流动相a为55%体积，流动相b为45%体积。
系统适用性要求：系统适用性溶液色谱图中，按氨溴索环亚胺、氨溴索杂质a、氨溴索杂质b、氨溴索、氨溴索杂质d、氨溴索杂质e顺序出峰，氨溴索杂质b峰与氨溴索峰之间的分离度应大于4.0，其余各色谱峰之间的分离度应不小于2.0。
系统适用性溶液色谱图中，按按氨溴索环亚胺、氨溴索杂质a、氨溴索杂质b、氨溴索、氨溴索杂质d、氨溴索杂质e顺序出峰，杂质b峰与氨溴索峰之间的分离度应大于4.0，其余各色谱峰之间的分离度应不小于2.0。
供试品溶液色谱图与溶剂色谱图比较，扣除溶剂色谱图中的色谱峰；再与空白辅料溶液色谱图比较，扣除空白辅料溶液色谱图中的色谱峰。供试品溶液色谱图中如有其他杂质峰，与对照溶液所出的主峰峰面积进行比较。杂质b的峰面积乘以校正因子1.5后，不得大于对照溶液中主峰面积的1.5倍，氨溴索环亚胺的峰面积乘以校正因子1.4后，不得大于对照溶液中主峰面积，其他单个杂质峰面积不得大于对照溶液中主峰面积，各杂质乘以校正因子后峰面积的和不得大于对照溶液中主峰面积的5倍。供试品溶液色谱图中小于对照溶液中主峰面积0.5倍的峰忽略不计。