一种苯氧乙酸被测样品中苯氧乙酸含量的测定方法与流程

1.本发明涉及一种抗生素原料中有效组分的测定方法，具体涉及一种苯氧乙酸被测样品中苯氧乙酸含量的测定方法，属于化学分析领域。


背景技术：

2.苯氧乙酸，白色针状结晶。1g产品溶于约75ml水，易溶于乙醇、乙醚、苯、二硫化碳和冰乙酸。熔点98℃。沸点285℃(部分分解)，用于青霉素v 钾的原料，其结构式如下：
[0003][0004]
目前，国内企业苯氧乙酸含量检测方法为滴定法，但这一方法操作复杂，精确度较差。
[0005]
现有文献(中国药业,2004，13(5)，38)已报道了高效液相色谱法测定青霉素v钾中苯氧乙酸的含量，采用hypersil ods2色谱柱，以0.025mol/l 磷酸二氢铵溶液(用氨溶液调节ph值至7.0
‑
乙腈(85:15)为流动相，检测波长为 220nm。此方法使用乙腈，乙腈相对毒性较大，急性毒性：ld
50
2730mg/kg(大鼠经口)；1250mg/kg(兔经皮)。
[0006]
因此，亟需对现有技术中的苯氧乙酸检测方法进行改进，以提高精确度，并降低溶剂毒性。


技术实现要素：

[0007]
有鉴于此，本发明提供了一种苯氧乙酸被测样品中苯氧乙酸含量的测定方法，以解决现有方法试剂毒性大，易受杂质影响，精确度差的问题。
[0008]
为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
[0009]
苯氧乙酸被测样品中苯氧乙酸含量的测定方法，采用高效液相色谱法测定苯氧乙酸被测样品中苯氧乙酸的含量，具体包括如下步骤：
[0010]
(a)对照品溶液的制备：称取苯氧乙酸标准品加入流动相溶解并定量稀释成浓度为0.02～0.5mg/ml的苯氧乙酸标准对照品溶液，优选浓度为 0.2mg/ml，摇匀备用；
[0011]
(b)被测样品溶液的制备：称取苯氧乙酸被测样品加入流动相溶解并并定量稀释制成浓度为0.02～0.5mg/ml的苯氧乙酸被测样品溶液，优选浓度为 0.2mg/ml，摇匀备用；
[0012]
(c)色谱条件：采用c
18
色谱柱，十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相的流速为1.2～1.6ml/min，优选为1.4ml/min；
[0013]
检测波长为200～230nm，优选为220nm；
[0014]
柱温为20℃～30℃，优选为25℃；
[0015]
理论塔板数按主峰计算不低于2000；
[0016]
(d)测定：分别量取苯氧乙酸标准对照品溶液以及苯氧乙酸被测样品溶液各10μl注入高效液相色谱仪，记录苯氧乙酸标准对照品溶液以及苯氧乙酸被测样品溶液的色谱图，按外标法以峰面积计算，即得被测样品中的苯氧乙酸的含量。
[0017]
其中，流动相为体积比为水：甲醇：磷酸盐水溶液＝100∶70～90∶10～ 30的混合溶液，优选的，流动相为体积比为水：甲醇：磷酸盐水溶液＝100:80:20。
[0018]
进一步，上述磷酸盐水溶液的ph值为3.5，其制备方法为：称取68g磷酸二氢钾加入纯化水至1000ml，用磷酸调节ph值至3.5。
[0019]
进一步，按外标法以峰面积计算被测样品中的苯氧乙酸的含量为按下式计算：
[0020]
c％＝aa/as
×
cs/ca
×
100％，
[0021]
其中，c％为被测样品中的苯氧乙酸的含量，aa为被测样品中苯氧乙酸的液相主峰面积，as为苯氧乙酸标准品的液相主峰面积，ca为被测样品的浓度，cs为苯氧乙酸的标准品浓度。
[0022]
本发明的有益效果在于，本发明所提供的苯氧乙酸的高效液相色谱分析方法操作过程试剂毒性相对较小(甲醇ld
50
5628mg/kg(大鼠经口)； 15800mg/kg(兔经皮))，简单方便，精密度好，准确度高，稳定性好，耐用性优异，可有效避免杂质对测定结果的影响；对设备要求低，流动相介质简单易得，可行性与适用性强。
附图说明
[0023]
图1为本发明实施例2苯氧乙酸标准品的色谱图；
[0024]
图2为本发明实施例2苯氧乙酸样品的色谱图；
[0025]
图3为本发明实施例25苯氧乙酸含量测定线性试验标准曲线图。
具体实施方式
[0026]
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
[0027]
在以下实施例中，本发明采用下述仪器与试剂进行试验：
[0028]
安捷伦高效液相色谱(安捷伦1200series检测器、安捷伦1200series泵)；
[0029]
样品与试剂：甲醇(色谱纯)、苯氧乙酸标准品(阿拉丁试剂，含量99％)、苯氧乙酸样品(华北制药股份有限公司，批号：201901101，2019年11月份生产的001批次)。
[0030]
采用高效液相色谱法测定苯氧乙酸被测样品中的苯氧乙酸的含量，包括如下步骤：
[0031]
(a)对照品溶液的制备：精密称定苯氧乙酸标准品，加流动相溶解，并定量稀释制成浓度为ca1(0.02～0.5mg/ml)的苯氧乙酸标准对照品溶液，摇匀、定容；
[0032]
(b)被测样品溶液的制备：精密称定苯氧乙酸样品，加流动相溶解，并定量稀释制成浓度为ca(0.02～0.5mg/ml)的苯氧乙酸被测样品溶液，摇匀、定容；
[0033]
(c)色谱条件：采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积比为100： 80∶20的水、甲醇与的ph3.5磷酸盐水溶液混合溶液为流动相，流速为 1.4ml/min；检测波长为
220nm；柱温为25℃；理论塔板数按主峰计算应不低于2000；
[0034]
(d)测定法：
[0035]
根据《中国药典(2015年版)》，称取苯氧乙酸标准品适量，精密称定，加体积比为100：80∶20的水、甲醇与的ph3.5磷酸盐水溶液混合溶液溶解，并稀释制成一定浓度ca1的溶液，摇匀，精密量取10μl注入液相色谱仪，记录色谱图；
[0036]
另取测试样品适量，精密称定，同法测定，记录色谱图；
[0037]
按外标法以峰面积计算，即得被测样品中的苯氧乙酸的含量c％：
[0038]
c％＝aa/as
×
cs/ca
×
100％；
[0039]
aa为被测样品中苯氧乙酸的液相主峰面积；as为苯氧乙酸标准品的液相主峰面积；ca为被测样品的浓度；cs为苯氧乙酸的标准品浓度。
[0040]
实施例1
[0041]
色谱条件：采用依利特c
18
反相柱4.6mm
×
150mm，5μm；流动相为体积比为100：80∶20的水、甲醇与的ph3.5磷酸盐水溶液混合溶液；流速为分别为1.0ml/min、1.4ml/min和2.0ml/min；紫外检测器，检测波长为292nm；柱温为25℃(室温)；理论塔板数按主峰计算应不低于2000。
[0042]
被测样品溶液：精密称定苯氧乙酸样品，加流动相溶解并定量稀释制成每1ml中含0.02mg苯氧乙酸样品的溶液，摇匀、定容；
[0043]
对照品溶液：精密称定苯氧乙酸标准品，加流动相溶解，并定量稀释制成每1ml中0.02mg苯氧乙酸标准品的溶液，摇匀、定容；
[0044]
测定法：分别精密量取被测样品溶液、苯氧乙酸标准品溶液10μl，注入液相色谱仪；记录对照品和被测样品的色谱图，按外标法以峰面积计算，即得样品中的苯氧乙酸含量测定结果。
[0045]
采用下述步骤计算得到苯氧乙酸的含量：
[0046]
校正因子
[0047]
其中，w1为对照品称样量(mg)；d1为对照品稀释体积(ml)；a1为对照品溶液色谱图中主峰的峰面积。
[0048]
供试品的含量
[0049]
其中，w2为供试品的称样量(mg)；d2为供试品的稀释体积(ml)； a2为供试品的主峰的峰面积。
[0050]
采用上述方法计算得到样品中苯氧乙酸的含量为93.5％、90.7％和94.2％。
[0051]
实施例2
[0052]
色谱条件与实施例1相同。
[0053]
被测样品溶液：精密称定苯氧乙酸样品，加流动相溶解并定量稀释制成每1ml中含0.2mg苯氧乙酸样品的溶液，摇匀、定容；
[0054]
对照品溶液：精密称定苯氧乙酸标准品，加流动相溶解，并定量稀释制成每1ml中含0.2mg苯氧乙酸标准品的溶液，摇匀、定容；
[0055]
测定法及计算苯氧乙酸含量的步骤与实施例1相同，苯氧乙酸标准品和苯氧乙酸样品的色谱图如图1～2所示，计算得到的样品中苯氧乙酸的含量分别为96.7％、98.2％和96.8％。
[0056]
实施例3
[0057]
色谱条件与实施例1相同。
[0058]
被测样品溶液：精密称定苯氧乙酸样品，加流动相溶解并定量稀释制成每1ml中含0.5mg苯氧乙酸样品的溶液，摇匀、定容；
[0059]
对照品溶液：精密称定苯氧乙酸标准品，加流动相溶解，并定量稀释制成每1ml中含0.5mg苯氧乙酸标准品的溶液，摇匀、定容；
[0060]
测定法及计算苯氧乙酸含量的步骤与实施例1相同，计算得到的样品中苯氧乙酸的含量分别为93.5％、93.7％和92.9％。
[0061]
实施例4
[0062]
色谱条件与实施例1类似，不同之处为所采用的流动相为体积比为100： 90∶10的水、甲醇与的ph3.5磷酸盐水溶液混合溶液。
[0063]
被测样品溶液：精密称定苯氧乙酸样品，加流动相溶解并定量稀释制成每1ml中含0.02mg苯氧乙酸样品的溶液，摇匀、定容；
[0064]
对照品溶液：精密称定苯氧乙酸标准品，加流动相喃溶解，并定量稀释制成每1ml中含0.02mg苯氧乙酸标准品的溶液，摇匀、定容；
[0065]
测定法及计算苯氧乙酸含量的步骤与实施例1相同，计算得到的样品中苯氧乙酸的含量分别为96.6％、96.8％和96.5％。
[0066]
实施例5
[0067]
色谱条件与实施例4相同。
[0068]
被测样品溶液：精密称定苯氧乙酸样品，加流动相溶解并定量稀释制成每1ml中含0.2mg苯氧乙酸样品的溶液，摇匀、定容；
[0069]
对照品溶液：精密称定苯氧乙酸标准品，加流动相溶解，并定量稀释制成每1ml中含0.2mg苯氧乙酸标准品的溶液，摇匀、定容；
[0070]
测定法及计算苯氧乙酸含量的步骤与实施例1相同，计算得到的样品中苯氧乙酸的含量分别为96.1％、95.9％和95.7％。
[0071]
实施例6
[0072]
色谱条件与实施例4相同。
[0073]
被测样品溶液：精密称定苯氧乙酸样品，加流动相溶解并定量稀释制成每1ml中含0.5mg苯氧乙酸样品的溶液，摇匀、定容；
[0074]
对照品溶液：精密称定苯氧乙酸标准品，加流动相溶解，并定量稀释制成每1ml中含0.5mg苯氧乙酸标准品的溶液，摇匀、定容；
[0075]
测定法及计算苯氧乙酸含量的步骤与实施例1相同，计算得到的样品中苯氧乙酸的含量分别为94.7％、95.5％和95.8％。
[0076]
实施例7
[0077]
除流动相外，其它色谱条件与实施例1相同。所采用的流动相为体积比为100：70∶30的流动相混合溶液。
[0078]
被测样品溶液：精密称定苯氧乙酸样品，加流动相溶解并定量稀释制成每1ml中含0.02mg苯氧乙酸样品的溶液，摇匀、定容；
[0079]
对照品溶液：精密称定苯氧乙酸标准品，加流动相溶解，并定量稀释制成每1ml中含0.02mg苯氧乙酸标准品的溶液，摇匀、定容；
[0080]
测定法及计算苯氧乙酸含量的步骤与实施例1相同，计算得到的样品中苯氧乙酸的含量分别为94.9％、95.2％和95.7％。
[0081]
实施例8
[0082]
色谱条件与实施例7相同。
[0083]
被测样品溶液：精密称定苯氧乙酸样品，加流动相溶解并定量稀释制成每1ml中含0.2mg苯氧乙酸样品的溶液，摇匀、定容；
[0084]
对照品溶液：精密称定苯氧乙酸标准品，加流动相溶解，并定量稀释制成每1ml中含0.2mg苯氧乙酸标准品的溶液，摇匀、定容；
[0085]
测定法及计算苯氧乙酸含量的步骤与实施例1相同，计算得到的样品中苯氧乙酸的含量分别为94.9％、95.5％和95.6％。
[0086]
实施例9
[0087]
色谱条件与实施例7相同。
[0088]
被测样品溶液：精密称定苯氧乙酸样品，加流动相溶解并定量稀释制成每1ml中含0.5mg苯氧乙酸样品的溶液，摇匀、定容；
[0089]
对照品溶液：精密称定苯氧乙酸标准品，加流动相溶解，并定量稀释制成每1ml中含0.5mg苯氧乙酸标准品的溶液，摇匀、定容；
[0090]
测定法及计算苯氧乙酸含量的步骤与实施例1相同，计算得到的样品中苯氧乙酸的含量分别为94.7％、95.4％和95.8％。
[0091]
实施例10
[0092]
除流动相外，其它色谱条件与实施例1相同。所采用的流动相为体积比为100：70∶20的流动相混合溶液。
[0093]
被测样品溶液：精密称定苯氧乙酸样品，加流动相溶解并定量稀释制成每1ml中含0.02mg苯氧乙酸样品的溶液，摇匀、定容；
[0094]
对照品溶液：精密称定苯氧乙酸标准品，加流动相溶解，并定量稀释制成每1ml中含0.02mg苯氧乙酸标准品的溶液，摇匀、定容；
[0095]
测定法及计算苯氧乙酸含量的步骤与实施例1相同，计算得到的样品中苯氧乙酸的含量分别为95.6％、95.9％和95.8％。
[0096]
实施例11
[0097]
色谱条件与实施例10相同。
[0098]
被测样品溶液：精密称定苯氧乙酸样品，加流动相溶解并定量稀释制成每1ml中含0.2mg苯氧乙酸样品的溶液，摇匀、定容；
[0099]
对照品溶液：精密称定苯氧乙酸标准品，加流动相溶解，并定量稀释制成每1ml中含0.2mg苯氧乙酸标准品的溶液，摇匀、定容；
[0100]
测定法及计算苯氧乙酸含量的步骤与实施例1相同，计算得到的样品中苯氧乙酸的含量分别为95.9％、95.7％和95.6％。
[0101]
实施例12
[0102]
色谱条件与实施例10相同。
[0103]
被测样品溶液：精密称定苯氧乙酸样品，加流动相溶解并定量稀释制成每1ml中含0.5mg苯氧乙酸样品的溶液，摇匀、定容；
[0104]
对照品溶液：精密称定苯氧乙酸标准品，加流动相溶解，并定量稀释制成每1ml中含0.5g苯氧乙酸标准品的溶液，摇匀、定容；
[0105]
测定法及计算苯氧乙酸含量的步骤与实施例1相同，计算得到的样品中苯氧乙酸的含量分别为95.7％、97.9％和95.3％。
[0106]
实施例13
[0107]
除流动相外，其它色谱条件与实施例1相同。所采用的流动相为体积比为100：70：10混合溶液。
[0108]
被测样品溶液：精密称定苯氧乙酸样品，加流动相溶解并定量稀释制成每1ml中含0.02mg苯氧乙酸样品的溶液，摇匀、定容；
[0109]
对照品溶液：精密称定苯氧乙酸标准品，加流动相溶解，并定量稀释制成每1ml中含0.02mg苯氧乙酸标准品的溶液，摇匀、定容；
[0110]
测定法及计算苯氧乙酸含量的步骤与实施例1相同，计算得到的样品中苯氧乙酸的含量分别为94.9％、95.5％和95.6％。
[0111]
实施例14
[0112]
色谱条件与实施例13相同。
[0113]
被测样品溶液：精密称定苯氧乙酸样品，加流动相溶解并定量稀释制成每1ml中含0.2mg苯氧乙酸样品的溶液，摇匀、定容；
[0114]
对照品溶液：精密称定苯氧乙酸标准品，加流动相溶解，并定量稀释制成每1ml中含0.2mg苯氧乙酸标准品的溶液，摇匀、定容；
[0115]
测定法及计算苯氧乙酸含量的步骤与实施例1相同，计算得到的样品中苯氧乙酸的含量分别为94.3％、94.7％和95.2％。
[0116]
实施例15
[0117]
色谱条件与实施例13相同。
[0118]
被测样品溶液：精密称定苯氧乙酸样品，加流动相溶解并定量稀释制成每1ml中含0.5mg苯氧乙酸样品的溶液，摇匀、定容；
[0119]
对照品溶液：精密称定苯氧乙酸标准品，加流动相溶解，并定量稀释制成每1ml中含0.5mg苯氧乙酸标准品的溶液，摇匀、定容；
[0120]
测定法及计算苯氧乙酸含量的步骤与实施例1相同，计算得到的样品中苯氧乙酸的含量分别为95.3％、96.1％和95.8％。
[0121]
实施例16
[0122]
除流动相外，其它色谱条件与实施例1相同。所采用的流动相为体积比为100：80∶10的流动相混合溶液。
[0123]
被测样品溶液：精密称定苯氧乙酸样品，加流动相溶解并定量稀释制成每1ml中含0.02mg苯氧乙酸样品的溶液，摇匀、定容；
[0124]
对照品溶液：精密称定苯氧乙酸标准品，加流动相溶解，并定量稀释制成每1ml中
含0.2mg苯氧乙酸标准品的溶液，摇匀、定容；
[0125]
测定法及计算苯氧乙酸含量的步骤与实施例1相同，计算得到的样品中苯氧乙酸的含量分别为95.3％、95.6％和95.9％。
[0126]
实施例17
[0127]
色谱条件与实施例16相同。
[0128]
被测样品溶液：精密称定苯氧乙酸样品，加流动相溶解并定量稀释制成每1ml中含0.2mg苯氧乙酸样品的溶液，摇匀、定容；
[0129]
对照品溶液：精密称定苯氧乙酸标准品，加流动相溶解，并定量稀释制成每1ml中含0.2mg苯氧乙酸标准品的溶液，摇匀、定容；
[0130]
测定法及计算苯氧乙酸含量的步骤与实施例1相同，计算得到的样品中苯氧乙酸的含量分别为94.7％、94.5％和93.9％。
[0131]
实施例18
[0132]
色谱条件与实施例16相同。
[0133]
被测样品溶液：精密称定苯氧乙酸样品，加流动相溶解并定量稀释制成每1ml中含0.5mg苯氧乙酸样品的溶液，摇匀、定容；
[0134]
对照品溶液：精密称定苯氧乙酸标准品，加流动相溶解，并定量稀释制成每1ml中含0.5mg苯氧乙酸标准品的溶液，摇匀、定容；
[0135]
测定法及计算苯氧乙酸含量的步骤与实施例1相同，计算得到的样品中苯氧乙酸的含量分别为94.7％、94.6％和94.5％。
[0136]
实施例19
[0137]
除流动相外，其它色谱条件与实施例1相同。所采用的流动相为体积比为100：80∶30的流动相混合溶液。
[0138]
被测样品溶液：精密称定苯氧乙酸样品，加流动相溶解并定量稀释制成每1ml中含0.02mg苯氧乙酸样品的溶液，摇匀、定容；
[0139]
对照品溶液：精密称定苯氧乙酸标准品，加流动相溶解，并定量稀释制成每1ml中含0.02mg苯氧乙酸标准品的溶液，摇匀、定容；
[0140]
测定法及计算苯氧乙酸含量的步骤与实施例1相同，计算得到的样品中苯氧乙酸的含量分别为94.6％、94.7％和93.9％。
[0141]
实施例20
[0142]
色谱条件与实施例19相同。
[0143]
被测样品溶液：精密称定苯氧乙酸样品，加流动相溶解并定量稀释制成每1ml中含0.2mg苯氧乙酸样品的溶液，摇匀、定容；
[0144]
对照品溶液：精密称定苯氧乙酸标准品，加流动相溶解，并定量稀释制成每1ml中含0.2mg苯氧乙酸标准品的溶液，摇匀、定容；
[0145]
测定法及计算苯氧乙酸含量的步骤与实施例1相同，计算得到的样品中苯氧乙酸的含量分别为94.5％、94.8％和94.7％。
[0146]
实施例21
[0147]
色谱条件与实施例19相同。
[0148]
被测样品溶液：精密称定苯氧乙酸样品，加流动相溶解并定量稀释制成每1ml中含
0.5mg苯氧乙酸样品的溶液，摇匀、定容；
[0149]
对照品溶液：精密称定苯氧乙酸标准品，加流动相溶解，并定量稀释制成每1ml中含0.5mg苯氧乙酸标准品的溶液，摇匀、定容；
[0150]
测定法及计算苯氧乙酸含量的步骤与实施例1相同，计算得到的样品中苯氧乙酸的含量分别为94.8％、94.6％和93.7％。
[0151]
由以上实例可知：实施例2为分析苯氧乙酸含量的较佳方案。
[0152]
对实施例2的方法进行下述方法学验证：
[0153]
实施例22系统适用性试验
[0154]
按照具体实施例的方法制备对照品溶液和供试品溶液，并按照与前法相同的色谱条件进行测定，取苯氧乙酸标准品溶液10μl，注入液相色谱仪；同法测定5次，记录对照品色谱图。实验结果如表1所示。
[0155]
表1苯氧乙酸含量测定系统适用性试验结果表
[0156][0157]
从表1中可以看出，按照样品峰面积计算5次的相对标准偏差rsd为 0.015％，符合rsd应≤1.0％；按主峰计算，理论塔板数为6987，满足不低于 2000的要求。试验结果表明，本法系统精密度良好。
[0158]
实施例23方法精密度试验
[0159]
按照实施例1的方法配制6份供试品溶液，并按照与前法相同的色谱条件，按照实施例1的测定方法进样测定，记录图谱，按照外标法计算各供试品溶液中的苯氧乙酸含量，结果见表2。
[0160]
表2苯氧乙酸含量测定方法精密度试验结果
[0161][0162]
计算6个数据的rsd为0.50％，小于限度1.0％。试验结果表明，本法方法精密度度良好。
[0163]
实施例24中间精密度试验
[0164]
按照实施例1的方法配制6份供试品溶液，并由不同分析人员在不同日期采用不同
的仪器条件下按照实施例1的测定方法进行检测，记录色谱图，并汇总3组数据进行分析，计算结果的相对标准偏差，测定结果见表3，并将中间精密度测试中的数据与方法精密度试验中的六个数据进行比较。
[0165]
表3苯氧乙酸含量测定中间精密度试验结果
[0166][0167][0168]
计算6个数据的rsd为0.21％，小于限度1.0％。将中间精密度中6个数据与方法精密度中6个数据比较，并计算12个数据的rsd为0.67％，小于限度1.0％。试验结果表明，本法中间精密度度良好。
[0169]
实施例25线性关系考察
[0170]
按照实施例1的方法制备对照品溶液和供试品溶液，并按照与实施例1 相同的色谱条件进行测定：取苯氧乙酸标准品溶液10μl，注入液相色谱仪；同法测定5次，记录对照品色谱图，作为系统实用性实验。
[0171]
分别取苯氧乙酸对照品24mg，置于100ml容量瓶，加流动相溶液稀释成苯氧乙酸浓度为0.24mg/ml的贮备液，精密量取对照贮备液3ml、4ml、 5ml、6ml、7ml置于10ml容量瓶中，用流动相稀释到刻度，摇匀，制成每 1ml溶液含苯氧乙酸0.072mg、0.096mg、0.12mg、0.144mg、0.168mg的溶液 (相当于测试溶液的60％、80％、100％、120％、140％)，作为线性溶液，各取10μl注入液相色谱仪，分别记录色谱图，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，如图3所示，其对应的数据见表4，所计算出的回归方程为线性回归方程y＝5038x
‑
1.88；相关系数r为0.9990，符合线性范围测试中待测组分的相关系数r≥0.999的要求。试验结果表明：苯氧乙酸在0.072～ 0.168mg/ml浓度范围内，峰面积与浓度呈现良好的线性关系。
[0172]
表4苯氧乙酸含量测定线性试验结果
[0173]
[0174][0175]
实施例26准确度试验
[0176]
按照实施例1的方法制备对照品溶液和供试品溶液，并按照与实施例1 相同的色谱条件进行测定：分别苯氧乙酸标准品溶液10μl，注入液相色谱仪；同法测定5次，记录对照品色谱图，作为系统实用性实验。
[0177]
分别称取苯氧乙酸对照品9.6mg、12mg、14.4mg各3份，并分别置50ml 容量瓶，加流动相溶解稀释至刻度，摇匀，分别相当于供试品浓度的80％、 100％、120％。分别取10μl注入液相色谱仪，分别记录色谱图，按外标法以峰面积计算，以该含量与理论值的比值作为回收率，结果见表5。
[0178]
表5苯氧乙酸含量测定准确度试验结果
[0179][0180]
试验结果表明：样品在浓度80％～120％范围内，9次回收率均在98％～ 102％范围内，rsd值为0.05％，小于限度2.0％，符合标准规定。
[0181]
实施例27溶液的稳定性
[0182]
1.室温稳定性
[0183]
精密称取苯氧乙酸供试品约12mg，置于50ml容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀。在室温条件下放置0、2、4、6、8、10、12小时，按实施例1的测定法进行检测，考察溶液的稳定性。
[0184]
2.4℃稳定性
[0185]
精密称取苯氧乙酸供试品约12mg，置于50ml容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀。在4℃条件下放置0、2、4、6、8、10、12小时，按实施例1的测定法进行检测，考察溶液的稳定性。
[0186]
供试品溶液于室温、4℃下的稳定性试验结果见表6。
[0187]
表6苯氧乙酸含量溶液稳定性考察
[0188][0189]
从表6中可以看出，供试品溶液分别在室温和4℃条件下7个数据的rsd 值均小于限度2.0％。试验结果表明，在室温和4℃的条件下，本溶液在12小时内样品含量稳定。
[0190]
实施例28耐用性考察
[0191]
通过改变流速、柱温、检测波长以及不同型号的色谱柱来考察本分析方法的耐用性。
[0192]
1.更换色谱柱
[0193]
通过更换色谱柱，分别采用大连依利特、安捷伦、大连依利特不同型号的c18色谱柱检测样品供试品，实验结果见表7
‑
1。
[0194]
表7
‑
1样品含量测定hplc方法耐用性 (不同型号色谱柱)
[0195][0196]
试验结果表明，样品与相邻峰的分离度均大于1.5，系统适用性符合规定， 6个数据的rsd值小于2.0％。由此可知，不同型号的色谱柱不影响样品含量的测定。
[0197]
2.改变检测波长
[0198]
通过调节检测波长，范围在(292
±
5nm)之间，分别采用检测波长287nm、292nm和297nm检测样品供试品，实验结果见表7
‑
3。
[0199]
表7
‑
2样品含量测定hplc方法耐用性(不同检测波长)
[0200][0201]
试验结果表明，样品与相邻峰的分离度均大于1.5，系统适用性符合规定，且6个数据的rsd值小于2.0％。由此可知，不同检测波长不影响样品含量的测定。
[0202]
3.改变柱温
[0203]
通过在(25
±
5℃)之间改变柱温，分别采用柱温20℃、25℃、30℃检测样品供试品，实验结果见表7
‑
3。
[0204]
表7
‑
3样品含量测定hplc方法耐用性(不同柱温)
[0205][0206]
试验结果表明，样品与相邻峰的分离度均大于1.5，系统适用性符合规定， 6个数据的rsd值小于2.0％。由此可知，柱温的微小变化不影响样品含量的测定。
[0207]
4.改变流速
[0208]
通过在(1.2
±
0.2ml/min)之间改变流速，分别采用流速1.0ml/min、 1.2ml/min、1.4ml/min检测样品供试品，实验结果见表7
‑
5。
[0209]
表7
‑
4样品含量测定hplc方法耐用性 (不同流速)
[0210][0211]
试验结果表明，样品与相邻峰的分离度均大于，系统适用性符合规定，6 个数据的rsd值小于。由此可知，流速微小的变化不影响样品含量的测定。
[0212]
实施例29专属性试验
[0213]
分别在高温、光照、酸、碱和氧化的条件下对样品进行破坏性试验，考察经破坏的样品样品的主峰纯度及主峰与相邻峰的分离度；取空白溶剂或经以上破坏的空白溶剂进样，考察其对样品含量测定是否有干扰。
[0214]
1.破坏实验
[0215]
未破坏：取样品10.34mg，置于50ml容量瓶，加流动相溶解至刻度，摇匀，进样检测，记录色谱图。
[0216]
a.碱破坏试验
[0217]
称取供试品10.45mg，置于50ml容量瓶，加入流动相20ml，再加1mol/ml 氢氧化钠1ml，放置1min，加1mol/ml盐酸溶液1ml中和，加入流动相溶解稀释至刻度，摇匀，进样检测，记录色谱图。
[0218]
b.酸破坏试验
[0219]
称取供试品10.78mg，置于50ml容量瓶，加入流动相20ml，再加1mol/ml 盐酸溶液
1ml，放置1min，加1mol/ml氢氧化钠1ml中和，加入流动相溶解稀释至刻度，摇匀，进样检测，记录色谱图。
[0220]
c.高温破坏试验
[0221]
称取供试品10.29mg，置于50ml容量瓶，加入流动相溶解稀释至约量瓶容积的3/4,在80℃水浴30min，冷却到室温，在加入流动相溶解稀释至刻度，摇匀，进样检测，记录色谱图。
[0222]
d.氧化破坏试验
[0223]
称取供试品10.64mg，置于50ml容量瓶，加入流动相20ml，再加30％过氧化氢1ml，放置1min，加入流动相溶解稀释至刻度，摇匀，进样检测，记录色谱图。
[0224]
e.光照破坏试验
[0225]
取本品10.38mg，置于50ml容量瓶，加流动相溶解至刻度，将此溶液放置4500lx光照试验箱中24小时，取出，摇匀，进样检测，记录色谱图。
[0226]
上述未经破坏、碱破坏、酸破坏、高温破坏、氧化破坏及光照破坏试验的样品含量测定结果见表8。
[0227]
表8样品含量测定专属性破坏结果
[0228][0229]
注：主峰面积由未破坏峰面积样品测定的峰面积按称样量折算，为理论值；破坏程度为破坏后的主峰面积与破坏前的主峰面积的百分比；r为主峰面积与前相邻峰杂质峰分离度。
[0230]
试验结果表明，各个破坏程度均达到80％～90％，且主峰面积与前相邻峰杂质峰分离度均大于，符合规定。由此可知，主峰为单一峰，各破坏条件产生的降解杂质并未影响到样品含量的测定。