1.一种家用型检测芹菜过敏原的高灵敏试剂盒,其特征在于,包括:
试纸条:nc膜上的检测线上包被鼠抗芹菜单克隆抗体1,浓度为0.1~0.5mg/ml,质控线上包被羊抗小鼠igg,浓度为2~8mg/ml;试纸条由上至下为吸水纸、nc膜,样品垫,固定于pvc胶板上;其中,吸水纸和样品垫与nc膜重叠部分为2mm。
金标微孔:将芹菜金标抗体与冻干稀释液的混合液加入到低吸附酶标板的微孔后进行冻干得到;
其中,所述芹菜金标抗体是用链霉亲和素金标复合物和生物素标记牛血清白蛋白金标复合物连接的网状结构来标记生物素化芹菜抗体2而制备得到。
2.根据权利要求1所述的高灵敏试剂盒,其特征在于,还包括用于提取样品中的芹菜抗原的萃取液,萃取液主要由以下浓度的各组分组成:摩尔浓度为0.05~0.1m的tris-hcl、质量体积浓度为0.5~1.5%的tritonx-100、质量体积浓度为0.5~3%的nacl、体积浓度5~30%的乙醇、质量体积浓度为0.01%~0.1%的nan3,溶剂为水,ph为9.0。
3.一种芹菜过敏原的家用型检测方法,其特征在于:采用如权利要求1所述的试剂盒进行检测,方法包括以下步骤:
(1)提取待测样品中的抗原,得到提取液;
(2)向金标微孔中加入3~4滴提取液,吹打多次以完全溶解微孔内的粉色粉末,将试纸条max端向下插入微孔内,10min后根据试剂条的显色结果判断样品中是否含有芹菜过敏原;
判断依据为:当只有质控线显色时,判定检测结果为阴性;当检测线和质控线同时显色时,判定检测结果为阳性;当质控线不显色,不管检测结果显色与否,都判定检测结果为无效。
4.根据权利要求3所述的方法,其特征在于,由样品制备提取液的方法为:
将2~4ml萃取液和一个磁珠加入到5ml小瓶中;向小瓶中直接加入液体样本或固体样本后,上下震摇小瓶30s,静止至少1min后,吸取上清得到提取液;
其中,萃取液主要由以下浓度的各组分组成:摩尔浓度为0.05~0.1m的tris-hcl、质量体积浓度为0.5~1.5%的tritonx-100、质量体积浓度为0.5~3%的nacl、体积浓度5~30%的乙醇、质量体积浓度为0.01%~0.1%的nan3,溶剂为水,ph为9.0。
5.如权利要求1所述的家用型检测芹菜过敏原的高灵敏试剂盒的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)芹菜金标抗体的制备:
a、向制备好的胶体金中加入碳酸钾,混合均匀后,边搅拌边加入链霉亲和素,室温反应1~4h后,再逐滴加入牛血清白蛋白,室温反应1~4h后,离心收集沉淀并用复溶液重悬,得到链霉亲和素金标复合物溶液;
b、向制备好的胶体金中加入碳酸钾,混合均匀后,边搅拌边加入生物素标计牛血清白蛋白,室温反应1~4h,再逐滴加入牛血清白蛋白,室温反应1~4h再逐滴加入牛血清白蛋白,反应后离心收集沉淀,将沉淀用复溶液重悬,得到生物素标记牛血清白蛋白金标复合物;
c、将前两步得到的链霉亲和素金标复合物和生物素标记牛血清白蛋白金标复合物以1:3~1:30的比例进行混匀,并边搅拌边按照8~24ug/ml的比例加入生物素化鼠抗芹菜单克隆抗体2,室温反应1~4h或4度过夜,得到芹菜金标抗体。
(2)金标微孔的制备:将芹菜金标抗体溶液与冻干稀释液以1:(10~15)的体积比进行混合,将混合液分装到低吸附酶标板中,在冰箱中冷冻过夜,再进行真空冷冻干燥至少20h后,扣合酶标板帽,得到金标微孔;
(3)试纸条的准备:由上至下将吸水纸、nc膜,样品垫和max线固定在pvc胶板上,制备得到试纸条;nc膜上检测线包被鼠抗芹菜单克隆抗体1,浓度为0.5~2mg/ml,质控线包被羊抗小鼠igg,浓度为1~5mg/ml。
6.根据权利要求5所述的方法,其特征在于,胶体金是采用柠檬酸三钠还原的方法制备而成。
7.根据权利要求5所述的方法,其特征在于,所述复溶液含有以下浓度的各成分:摩尔浓度为0.01m的ph7.4的磷酸盐缓冲溶液、体积浓度为1~5%的牛血清白蛋白、质量体积浓度为1~5%的蔗糖。
8.如权利要求1所述的家用型检测芹菜过敏原的高灵敏试剂盒在检测食物中、空气、水源和物品表面的芹菜过敏原中的应用。