一种检测氯霉素胶体金试纸条的制作方法

本实用新型涉及生物检测技术领域，尤其涉及一种检测氯霉素胶体金试纸条。

背景技术：

氯霉素(chloramphenicol)是白色或无色的针状或片状结晶，由生物土壤中的一些特定的委内瑞拉菌属所产生的一种抗菌剂，对革兰氏阳性、阴性菌，立克次氏体，衣原体，支原体均有抑制作用，但被证明在动物性食品中的残留会给人带来很大的毒性作用，比如再生障碍性贫血，代谢排出难等。为此，许多国家禁止使用氯霉素。

现在，主要用于氯霉素检测的方法有：hplc、gc、lc-ms-ms、gc-ms-ms,这些方法虽然都比较精确，有的检测甚至能达0.1ng/g，但是都需要检测仪器，成本较高，检测时间较长；为此提出了使用基于免疫学的elisa方法，虽然降低了检测成本，缩短了检测时间，但是需要专业的技术人员操作，使用较局限，检测灵敏度低；另外在明确多种检测目标后，需要进行检测结果对比时，现有试纸条检测很不方便。

技术实现要素：

为了解决上述问题，本实用新型提供了一种检测氯霉素胶体金试纸条，该试纸条检测灵敏度高，需要进行多个目标检测物同时检测时，通过并联连接结构将多个单一的试纸条组合起来，使其检测线t线和质控线c线处于同一直线，检测结果对比明显，协助判断更为方便。

为实现上述目的，本实用新型提供如下技术方案：

一种检测氯霉素胶体金试纸条，包括壳体和封装于壳体内腔的试剂条，所述试剂条包括底板和依次设置在底板上的样品垫、金标垫、层析膜和吸水垫，所述金标垫包含结合氯霉素抗体的胶体金标记物，所述层析膜设置有包被氯霉素抗原性检测线t线和氯霉素抗抗体的质控线c线；

所述壳体外侧设置有将两个或两个以上试纸条并联组成多联试剂条的并联连接结构。

进一步地，所述壳体包括分体设置的上壳体和下壳体，所述上壳体上设置有加样区和结果显示区，所述下壳体两侧对称设置有第一凹陷部和第二凹陷部。

进一步地，所述并联连接结构包括卡环组件和卡块组件，所述卡环组件和卡块组件相配合，且分别设置在所述第一凹陷部和第二凹陷部内。

进一步地，所述卡环组件包括扣环和扣环连接座，所述扣环连接座的两侧固定设置有扣环连接柱，所述扣环包括扣接部和扣接端头，所述扣接端头转动连接于所述连接柱上。

进一步地，所述扣接部的形状为“u”型，且扣接部上设置有卡台。

进一步地，所述卡块组件包括卡块和卡块连接座，所述卡块连接座的两侧固定设置有卡块连接柱，所述卡块包括卡接部和卡接端头，所述卡接端头转动连接于所述连接柱上。

进一步地，所述卡接部的形状为“u”型，垂直所述卡接部设置有卡柱，所述卡柱上开设有卡槽。

进一步地，所述加样区和结果显示区均为斜切凹陷结构。

进一步地，所述上壳体上设置有通气孔和扣盖。

进一步地，所述上壳体的内侧设置有若干个定位凸柱，相应的，在所述下壳体内设置有若干个与所述定位凸柱相配合的定位凹柱；在进行所述上壳体和下壳体配合封装时，所述定位凸柱嵌入所述定位凹柱内进行密闭封装；且所述定位凸柱与所述定位凹柱的数量相同。

与现有技术相比，本实用新型的有益效果如下：

1)本实用新型的试纸条中c线采用氯霉素抗抗体，以山羊作为免疫动物，以氯霉素单克隆抗体为免疫原对无病原体山羊进行免疫，得到氯霉素抗抗体。c线采用氯霉素抗抗体，t线采用氯霉素抗原，同时竞争由氯金酸标记的氯霉素单克隆抗体，可减少与样本的非特异性结合，检测灵敏度较高；另外当需要进行多个目标检测物同时检测时，通过并联连接结构将多个单一的试纸条组合起来，使其检测线t线和质控线c线处于同一直线，检测结果对比明显，协助判断更为方便。

2)本实用新型加样口与加样区的外边缘之间形成有弧形凹陷面，便于样品的添加；另外加样口靠近壳体内腔的一侧设置有凸起，凸起具有一缺口，该缺口对于液体样本润湿试剂条有导向作用，便于试剂检测，该凸起用于压紧试剂条。

附图说明

图1为本实用新型检测氯霉素胶体金试纸条的结构示意图；

图2为本实用新型上壳体的正面结构示意图；

图3为本实用新型上壳体的反面结构示意图；

图4为本实用新型下壳体的结构示意图；

图5为本实用新型并联连接结构的结构示意图；

图6为本实用新型试剂条的结构示意图；

图7为本实用新型相邻两个试纸条并联组合的使用状态示意图。

图中：壳体1，上壳体11，加样区111，加样口1111，凸起1112，缺口1113，结果显示区112，通气孔113，扣盖114，定位凸柱115，下壳体12，第一凹陷部121，第二凹陷部122，定位凹柱123，试剂条2,底板21，样品垫22,金标垫23,层析膜24,吸水垫25,并联连接结构3；

并联连接结构3：卡环组件31，扣环311，扣接部3111，扣接端头3112，卡台3113，扣环连接座312，扣环连接柱313，卡块组件32，卡块321，卡接部3211，卡接端头3212，卡柱3213，卡槽3214，卡块连接座322，卡块连接柱323。

具体实施方式

下面将结合本实用新型实施例中的附图，对本实用新型实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本实用新型一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本实用新型中的实施例，本领域普通技术人员在没做出创造性劳动前提下所获得的所其他实施例，都属于本实用新型保护的范围。

需要说明的是，当组件被称为“固定于”另一个组件，它可以直接在另一个组件上或者也可以存在居中的组件。当一个组件被认为是“连接”另一个组件，它可以是直接连接到另一个组件或者可能同时存在居中组件。当一个组件被认为是“设置于”另一个组件，它可以是直接设置在另一个组件上或者可能同时存在居中组件。本文所使用的术语“垂直的”、“水平的”、“左”、“右”以及类似的表述只是为了说明的目的。

请参阅图1-7，本实用新型提供一种检测氯霉素胶体金试纸条，该试纸条包括壳体1和封装于该壳体1内腔的试剂条2，试剂条2包括pvc底板21，依次设置在pvc底板21上的样品垫22、金标垫23、层析膜24和吸水垫25；其金标垫23包含结合氯霉素抗体的胶体金标记物，层析膜24设置有包被氯霉素抗原性检测线t线和氯霉素抗抗体的质控线c线；层析膜24为硝酸纤维素膜；

壳体1外侧设置有将两个或两个以上试纸条并联组成多联试剂条的并联连接结构3。当需要进行多个目标检测物同时检测时，通过并联连接结构3将多个单一的试纸条组合起来，使其检测线t线和质控线c线处于同一直线，检测结果对比明显，协助判断更为方便。

在本实施例中，上述壳体1包括分体设置的上壳体11和下壳体12，上壳体11上设置有加样区111和结果显示区112，加样区111和结果显示区112均为斜切凹陷结构，减小了光路阻挡，改善了垂直反射。具体的，加样区111的形状为圆形，其包含加样口1111，加样口1111相对于加样区111的外边缘往壳体1内腔下陷，使得加样口1111所在的端面低于上壳体11所在的端面。且加样口1111与加样区111的外边缘之间形成有弧形凹陷面，便于样品的添加；另外加样口1111靠近壳体1内腔的一侧设置有凸起1112，凸起1112具有一缺口1113，该缺口1113对于液体样本润湿试剂条2有导向作用，改善了润湿方向，该凸起1112用于压紧试剂条2。

在本实施例中，上述下壳体12两侧对称设置有第一凹陷部121和第二凹陷部122，其中该第一凹陷部121和第二凹陷部122沿着试纸条的厚度方向贯穿设置，上壳体11与下壳体12相对应设置有凹陷部，不仅便于操作人员手持试纸条，同时将并联连接结构3隐藏其中，避免影响整体的美观效果。

在本实施例中，上述并联连接结构3包括卡环组件31和卡块组件32，卡环组件31和卡块组件32相配合进行相邻两个试纸条的并排连接，且卡环组件31和卡块组件32分别设置在第一凹陷部121和第二凹陷部122内。

具体的，为了便于本领域普通技术人员理解该方案，详细介绍卡环组件31，其包括扣环311和扣环连接座312，扣环连接座312的两侧固定设置有扣环连接柱313，所述扣环311包括扣接部3111和扣接端头3112，所述扣接端头3112上开设有贯穿孔，且转动连接于扣环连接柱313上。扣接部3111的形状为“u”型，且扣接部3111上设置有卡台3113，与卡台3113的两个侧面相邻的平面为斜面。

同样为了便于本领域普通技术人员理解该方案，详细介绍卡块组件32，其包括卡块321和卡块连接座322，所述卡块连接座322的两侧固定设置有卡块连接柱323，所述卡块321包括卡接部3211和卡接端头3212，所述卡接端头3212同样开设有贯通孔，且转动连接于卡块连接柱323上。卡接部3211的形状为“u”型，垂直卡接部3211设置有卡柱3213，卡柱3213上开设有卡槽3214，该卡槽3214与上述卡台3113相配合卡接在卡台3113上，以使相邻的两个试纸条并排连接。

本实用新型的另一实施例，为了保持试纸条的内部干燥，在上壳体11上开设有多个通气孔113；并且为了方便打开该试纸条，在上壳体11上设置扣盖114，该扣盖114一侧表面向内开设有空腔，在检测过程中，可以将目标检测物的名称卡片置于该空腔内，方便区分。

本实用新型的另一实施例，为了使上壳体11与下壳体12紧密封合，上壳体11的内侧设置有若干个定位凸柱115，相应的，在下壳体12内设置有若干个与定位凸柱115相配合的定位凹柱123；在进行上壳体11和下壳体12配合封装时，定位凸柱115嵌入所述定位凹柱123内进行密闭封装；且定位凸柱115与定位凹柱123的数量相同；同时，上壳体11与下壳体12的边缘企口配合形成密封。

下面实施例中所使用的实验方法若是没有特殊说明，均为常规方法；所用到的材料，试剂等，若是没有特殊说明，均可从商业途径得到。

胶体金试纸条的制备步骤如下：

1、氯霉素包被抗原以及单克隆抗体均来自于莱弗生物技术有限公司

2、二抗的制备

以山羊作为免疫动物，以氯霉素单克隆抗体为免疫原对无病原体山羊进行免疫，得到氯霉素抗抗体。

3、胶体金标记氯霉素金标抗体的制备

1)胶体金的制备：取200ml浓度为0.01％的haucl4(四氯金酸)溶液置于500ml圆底烧瓶中，轻轻搅拌并加热至沸腾，快速加入3ml浓度为1％的柠檬酸三钠，溶液颜色先变为深蓝色，再变为葡萄酒红色，继续沸腾10min；停止加热，室温冷却至常温用去离子水恢复到原体积，2～8℃保存。

2)胶体金标记的单克隆抗体的制备：保证所用试管洁净，可先用金清洗，金不变色则可以使用。向4ml聚苯乙烯离心管中加入2ml烧制好的金溶液，用0.1mol碳酸钾调ph值至8.5，加抗体0.2μg/ml，混匀静止10-15min,加封闭液20μl/m(bsa浓度10％)，混匀静止15min。12000g室温(4℃)离心5min，除去上层清液,加入200μl重选液(0.05mol硼酸盐缓冲液ph8.0加入4％海藻糖和1％bsa)轻轻摇匀，此即标记好的抗体胶体金溶液。

3)金标垫23和样品垫22的制备：

处理液：0.1molpb加入4％海藻糖、1％吐温20、0.5％bsa和0.01％叠氮钠将玻璃纤维放到处理液中浸泡10min，37℃恒温干燥箱烘干，待用。

将处理好的玻璃纤维裁切成7mm为金标垫23。

将处理好的玻璃纤维裁切成17mm为样品垫22。

将制备好的金标抗体使用喷金仪均匀喷涂到金标垫23上，放到37℃恒温干燥箱干燥4h，备用。

4)划膜

硝酸纤维素膜粘贴在pvc300mm×6cm底板21上，将检测抗原(t线抗原)和质控线抗抗体(c线抗抗体)用0.01mpbs(ph7.2)缓冲液分别稀释至0.1mg/ml和0.3mg/ml，用划膜仪喷涂在硝酸纤维素膜上，喷涂量1μl/cm；放置到37℃恒温干燥箱干燥16h。

5)试纸条的组装

在硝酸纤维素膜c线上端粘贴吸水纸，吸水纸裁切17mm，吸水纸下端压硝酸纤维素膜2mm，

在硝酸纤维素膜t线下端粘贴金标垫23和样品垫22，金标垫23上端压硝酸纤维素膜2mm，样品垫22上端压金标垫232mm，使用切条机切成4mm宽度，安装卡壳，将其放入铝箔袋中塑封并加入一袋干燥剂。

6、结果判定

取出试纸条用微量移液器或者其它移液装置吸取准备好的样本100μl至加孔中然后室温计时8min。

判定结果：当试纸条的c线显色，t线颜色深于c线时，样本检测结果为阴性。当试纸条的c线显色，t线颜色等于或浅于c线时，样本检测结果为阳性，c线颜色越深，阳性越强。当试纸条的c线不显色，样本检测结果为无效，应更换试纸条重新检测。

7、利用氯霉素胶体金试纸条检测样本

将不含氯霉素的猪肉样本中分别添加0.1μg/l氯霉素、0.2μg/l氯霉素、0.5μg/l氯霉素、1μg/l氯霉素、2μg/l氯霉素并重复5次检测，检测结果如下表：

结果显示试纸条对玉米样本中氯霉素的检测线为0.1μg/l，符合氯霉素残留检测。

8、稳定性测试

将试纸条放置于37℃加速老化保存，检测结果如下表：

测定结果也表明试纸条各项指标完全正常。从以上结果可得出试纸条可以在2～30℃至少保存12个月以上。

在本实用新型的描述中，需要说明的是，除非另明确的规定和限定，术语“安装”、“设有”、“连接”应做广义理解，例如，可以是固定连接，也可以是可拆卸连接，或一体地连接；可以是机械连接，也可以是电连接或可以相互通讯；可以是直接相连，也可以通过中间媒介间接相连，可以是两个元件内部的连通或两个元件的相互作用关系。对于本领域的普通技术人员而言，可以根据具体情况理解上述术语在本实用新型中的具体含义。

尽管已经示出和描述了本实用新型的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本实用新型的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型。本实用新型不受此处所公开的具体实施例的限制，所有落入本申请的权利要求范围内的实施例都属于本实用新型的保护范围，简而言之，其保护范围由权利要求及其等同物限定。