一种用于检测三甲胺或三甲胺盐含量的装置的制作方法

1.本实用新型涉及医药分析的技术领域，具体的涉及用于测量三甲胺或三甲胺盐含量的装置，尤其是用于测定左卡尼汀(左旋肉碱)制品中三甲胺含量的装置。


背景技术：

2.许多药品、保健食品、食品及添加剂等都含有左卡尼汀(左旋肉碱)，左卡尼汀极易降解成三甲胺或者三甲胺的盐。
3.三甲胺摄入人体后会增加患者患心血管疾病和肾病的风险，且三甲胺还是致癌物亚硝胺的前体化合物，被摄入人体后，经肝代谢转化为氧化三甲胺，氧化三甲胺是导致心血管疾病增加风险之一[roberts,a.b.,gu,x.,buffa,j.a.,et al.development of a gut microbe
–
targeted nonlethal therapeutic to inhibit thrombosis potential.nature medicine.,2018,24:1407
‑
1417；zehua li,zhiye wu,jianyun yan,et al.gut microbe
‑
derived metabolite trimethylamine n
‑
oxide induces cardiac hypertrophy and fibrosis.lab invest,.2019,99(3):346
‑
357]。
[0004]
欧盟原料药委员会(apic)在其发布的《原料药工厂中清洁验证指南》(guidance on aspects of cleaning validation in active pharmaceutical ingredient plants)中，noel＝ld
50
/2000；在ich q3c残留溶剂中，pde＝no(a)el x体重调整/[f1 x f2 x f3 x f4 x f5]；按照公式计算，aet＝pde/每日最大剂量。
[0005]
多数发达国家卫生组织均规定了三甲胺的职业卫生暴露限量标准，其时间加权平均限量值(twa)一般在1～10ppm之间。
[0006]
我国部分食品有关的国家标准或行业标准中，规定了应检查三甲胺的含量，如gb2730
‑
2015食品安全国家标准中三甲胺的含量限量标准为2.5mg/100g(相当于25ppm)。
[0007]
左卡尼汀注射液，一般用于治疗慢性肾衰长期血透病人因继发性肉碱缺乏产生的一系列并发症状，临床表现如心肌病、骨骼肌病、心律失常、高脂血症，以及低血压和透析中肌痉挛等。
[0008]
左卡尼汀中的主要杂质包括三甲胺和2(5h)
‑
呋喃酮。2(5h)
‑
呋喃酮的毒性极低，无致癌或致畸变活性，可按照未知杂质进行控制。左卡尼汀注射液小鼠腹膜(腔)注射给药的半数致死率数据ld
50
＝90mg/kg(美国cdc给出的毒理学数据)，按左卡尼汀注射液每日最大剂量3g计算，三甲胺限度为6.25ppm，考虑到三甲胺(trimethylamine，tma)不仅有毒，且在吸入过程中对人体的眼、鼻、咽喉和呼吸道的刺激作用，需要严格其限度，根据计算，将三甲胺的限度规定为不得超过5ppm。
[0009]
按照相关毒理学数据计算，左卡尼汀注射液中三甲胺的限度应不超过4.38ppm。
[0010]
然而，通常的挥发胺类(三甲胺即为一种挥发胺)检测方法，不适用于某些成品例如含左卡尼汀(左旋肉碱)的药品、保健品、食品或添加剂中三甲胺或三甲胺盐含量的检测。目前，这类成品中三甲胺或三甲胺盐含量的检测存在很大的技术困难。


技术实现要素：

[0011]
发明人经深入研究，实现了一种高灵敏度检测三甲胺或三甲胺盐含量的方法，并开发出该方法所专用的装置，克服了目前存在的技术难题。
[0012]
为此，提供一种用于检测三甲胺或三甲胺盐含量的装置，包括：第一容器、第二容器、以及检测仪器；
[0013]
所述第一容器用于容纳待测物，所述第一容器包括第一进气口和第一出气口，所述第一进气口用于向所述第一容器中容纳的所述待测物中通入不与所述待测物发生化学反应的气体；
[0014]
所述第二容器用于容纳酸性溶液，所述第二容器包括第二进气口和第二出气口，所述第二进气口与所述第一出气口连通，使所述第一容器内的气体可通入到所述第二容器中的所述酸性溶液内；所述第二出气口用于使由第二进气口通入的气体在与酸性溶液接触后从所述第二容器排出；
[0015]
所述检测仪器用于检测酸性溶液中三甲胺或三甲胺盐的含量。
[0016]
任选地，所述第一容器还设有控温装置，用于控制所述第一容器中内容物的温度。
[0017]
任选地，所述第一容器上还安装有碱性溶液加料装置，用于向所述待测物中加入碱性溶液。
[0018]
任选地，所述用于检测三甲胺或三甲胺盐含量的装置还包括尾气处理装置，所述尾气处理装置与所述第二容器的第二出气口连通，用于处理由第二出气口排出的气体。
[0019]
优选地，所述第一容器还安装有气体流量计，用于控制从所述第一进气口通入的气体的流量。优选地，所述第二容器还设有控温装置，用于控制所述第二容器中内容物的温度。
[0020]
优选地，所述检测仪器为色谱仪。优选地，所述色谱仪为气相色谱仪、液相色谱仪、液相色谱
‑
质谱联用仪、或离子色谱仪。
[0021]
优选地，所述用于检测三甲胺或三甲胺盐含量的装置用于检测左卡尼汀制品中三甲胺或三甲胺盐的含量，更优选地，用于检测左卡尼汀注射液中三甲胺或三甲胺盐的含量。
[0022]
本实用新型的装置的运行方法如下。
[0023]
将待测物加入到所述第一容器中，将酸性溶液加入到第二容器中，经由所述第一进气口以预定的流量向所述第一容器中的内容物中通入不与待测物组分发生化学反应的气体，对所述第一容器内的内容物进行鼓吹。在待测物中含有三甲胺的情况下，三甲胺随着通入的气体一起经所述第一出气口和所述第二进气口通入到所述第二容器中的酸性溶液中。三甲胺与所述酸性溶液进行反应，生产三甲胺盐。然后将反应后的酸性溶液采用检测仪器进行检测，根据检测的酸性溶液中三甲胺盐的含量，计算出待测物中三甲胺的含量。与酸性溶液反应后的气体，经由第二出气口从第二容器排出。
[0024]
优选地，通过所述碱性溶液加料装置向所述第一容器中的所述待测物中加入碱性溶液，优选以滴加的方式加入，更有利于三甲胺随气体从所述待测物中通入至所述酸性溶液中。优选地，通过控温装置将第一容器内的内容物控制在预定的温度，更有利于三甲胺从待测物中随气体通入至所述酸性溶液。
[0025]
优选地，使与酸性溶液反应后的气体通过第二出气口通入至所述尾气处理装置，经所述尾气处理装置吸收有害物质后，再将气体排出。
[0026]
可采用上述装置测定三甲胺或三甲胺盐含量的所述待测物包括含左卡尼汀药品、保健品、食品和添加剂等制品，优选为含左卡尼汀药品；优选地，所述含左卡尼汀药品为左卡尼汀注射液、左卡尼汀原料药、左卡尼汀口服溶液或左卡尼汀片剂；更优选为左卡尼汀注射液。
[0027]
向装有所述待测物的所述第一容器中加入碱性溶液和/或控制所述第一容器中内容物的温度和/或向所述第一容器中的内容物中通入不与待测物组分发生化学反应的气体，目的是将待测物中可能存在的三甲胺排出至酸性溶液中。只要能够实现该目的，可以选用其中的一种或多种技术手段。
[0028]
所述碱性溶液可以为碱的水溶液；所述碱可以为选自氢氧化钾、氢氧化钠、氢氧化锂、氨、碳酸钾、碳酸氢钾、碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸锂、磷酸钠、磷酸钾、和磷酸铵中的一种或多种，更优选为选自氢氧化钾、氢氧化钠、碳酸钾、和碳酸钠中的一种。
[0029]
所述碱性溶液的浓度可以为0.01％～20％(g/ml)，优选为0.1％～2％(g/ml)。
[0030]
所述第一容器中内容物的温度可以为环境温度；也可以为0至80℃，优选地为10～50℃，更优选为30～40℃，更优选为40℃。
[0031]
优选地，所述待测物与所述碱性溶液在所述容器中保持2～120min，更优选保持20min～40min，更优选保持20min。
[0032]
优选地，通入的气体为选自氦气、氩气、氮气、氢气和空气中的一种或多种；优选为氮气、氦气或空气；更优选为氮气。
[0033]
优选地，通入气体的流量为0.05～20l/min；更优选为0.1～3l/min；优选地，通入的气体为氮气，流量为0.4l/min。
[0034]
优选地，所述酸性溶液为无机酸或有机酸的水溶液。
[0035]
优选地，所述无机酸为选自盐酸、硫酸、硝酸、磷酸、偏磷酸、亚硫酸、亚磷酸、焦磷酸、铬酸、磺酸和氢溴酸中的一种或多种，所述有机酸为甲酸、乙酸、丙酸、丁酸、乙二酸、丁二酸、马来酸、酒石酸、柠檬酸、依地酸、苯甲酸、苯乙酸、甲磺酸和苯甲磺酸中的一种或多种。
[0036]
优选地，所述酸性溶液为硫酸、磷酸或甲磺酸的水溶液；更优选为甲磺酸水溶液。
[0037]
优选地，所述酸性溶液的浓度为0.01mol/l～5mol/l，更优选为0.1mol/l～2mol/l，进一步优选为0.1mol/l。
[0038]
优选地，所述第二容器中内容物的温度保持为常温，也可以为
‑
10℃～80℃；优选为0～50℃；更优选为5～30℃，更优选为室温。
[0039]
优选地，从所述第一容器通入至所述第二容器中酸性溶液内的气体与所述酸性溶液接触10
‑
120min后进行检测，更优选20～40min后进行检测，更优选接触20min后进行检测。
[0040]
优选地，采用离子色谱仪检测所述酸性溶液中获得的三甲胺的量，采用三甲胺或其盐(优选为盐酸盐优选为盐酸盐、硫酸盐、甲磺酸盐、酒石酸盐)作为对照品，将其配制为不同浓度的对照品溶液，分别进样至离子色谱仪中，得到三甲胺离子的响应谱图，用三甲胺离子峰强度对相应的三甲胺或其盐浓度做线性拟合得到三甲胺标准曲线。
[0041]
优选地，所述三甲胺标准曲线以三甲胺离子响应时间对三甲胺的保留时间进行定性，以三甲胺离子响应强度(峰面积)对三甲胺的浓度进行定量，绘制三甲胺浓度相对于三
甲胺离子峰强度(峰面积)拟合曲线。
[0042]
优选地，将供试品溶液进行三甲胺离子色谱图采集，与三甲胺标准曲线的谱图和峰面积进行对比和计算，根据三甲胺的标准曲线计算出待测物中三甲胺的含量。
[0043]
可选地，所述对照品溶液为三甲胺盐酸盐溶液，所述对照品溶液的浓度优选为0.30μg/ml～2.71μg/ml。
[0044]
优选地，选用ion pac cs12a阳离子色谱柱。
[0045]
优选地，所述离子色谱的流动相为甲磺酸水溶液、盐酸水溶液、硫酸水溶液、磷酸水溶液；优选为甲磺酸水溶液、盐酸水溶液；更优选为甲磺酸水溶液；优选地，所述甲磺酸水溶液浓度为10～30mm，优选为15
‑
25nm，更优选为17mm。
[0046]
优选地，所述流动相的流速为0.01ml/mim～5ml/min；优选为0.5ml/min～2ml/min；更优选为0.5ml/min。
[0047]
优选地，所述离子色谱检测方法中，三甲胺的检出限为2ng～10ng，优选为2ng～5ng，更优选为3ng；优选地，所述三甲胺的定量限为5ng～20ng，优选为5ng～10ng，更优选为7.5ng。
[0048]
优选地，所述离子色谱条件为：保护柱：dionex ionpactm cg12a rfictm guard(4x50mm)；分析柱：dionex ionpactm cs12a rfictm analytical(4x250mm)；柱温：30℃；电导池温度：35℃；流动相：17mm甲磺酸；流速：0.5ml/min；运行时间：40min；进样体积：25μl；检测器：电导检测器；抑制器：csrs
‑
4mm；检测器电流：25ma。
[0049]
优选地，三甲胺的检出限为3ng，相当于供试品浓度的0.24ppm；三甲胺的定量限为7.5ng，相当于供试品浓度的0.60ppm。检出限和定量限分别多次进样，结果重复性良好。
[0050]
有益效果：
[0051]
1、本实用新型装置适用于对含左卡尼汀(左旋肉碱)药品、保健品、食品和添加剂等制品中痕量三甲胺或三甲胺盐的检测。
[0052]
2、本实用新型解决了左卡尼汀制品中三甲胺或三甲胺盐质量控制的技术难题，检测灵敏度高，检出限低，准确度高，重复性良好，成本低廉。
[0053]
3、采用本实用新型的装置进行检测，可以有效表征左卡尼汀制品中的三甲胺或三甲胺盐的安全性，可以有效加强这类产品的质量控制。
附图说明
[0054]
图1：三甲胺溶液的ic色谱图
[0055]
图2：低浓度三甲胺+左卡尼汀溶液的ic色谱图
[0056]
图3：高浓度三甲胺+左卡尼汀溶液的ic色谱图
[0057]
图4：北京苏雅蛋白研发中心有限公司检测试验的lc
‑
ms色谱图
[0058]
图5：本实用新型用于检测三甲胺含量的装置的示意图
[0059]
图6：三甲胺对照品溶液的线性曲线图
具体实施方式
[0060]
下面结合具体实施方式对本实用新型作进一步详细说明，但并不因此将本实用新型限制在所述具体实施方式范围之中。
[0061]
以下实施方式中，试药信息如下：
[0062]
表1
[0063][0064]
对照品信息如下：
[0065]
表2
[0066]
试药批号含量/纯度生产厂家左卡尼汀对照品100523
‑
20130199.9％中国食品药品检定研究院三甲胺盐酸盐z26a007>98％alfa
[0067]
采用常规气相色谱法检测三甲胺，将待测成分在高温下气化，经过色谱柱的分离后，由检测器对待测成分进行检测。然而，该方法不能直接适用于很多成品例如左卡尼汀(左旋肉碱)的制品中三甲胺含量的检测。左卡尼汀(左旋肉碱)在高温下降解产生三甲胺。在检测过程中生成三甲胺，导致检测结果不能体现成品中三甲胺的含量。
[0068]
采用液相色谱法检测三甲胺含量，由于三甲胺无共轭体系，没有紫外吸收，因而不能使用紫外吸收原理的检测器进行检测；采用蒸发光散射检测器(elsd)，需要经过高温气化洗脱液的过程，导致该方法也不适合用于例如左卡尼汀(左旋肉碱)在高温下降解的成品中三甲胺的含量检测。
[0069]
发明人进一步研究采用示差检测器(rid)检测例如左卡尼汀注射液中三甲胺的含量。经过方法的筛选和优化，建立了采用rid为检测器进行左卡尼汀注射液中三甲胺hplc的条件。然而，方法学验证结果显示，该条件下，三甲胺的检出限为99.96ng，相当于供试品溶
液浓度的0.025％(250ppm)；定量限为199.92ng，相当于供试品溶液浓度的0.050％(500ppm)。检测灵敏度达不到要求。
[0070]
发明人进一步研究采用离子色谱法检测例如左卡尼汀注射液中三甲胺的含量，经过方法的筛选和优化，确立了离子色谱法测定三甲胺的色谱条件。方法验证结果显示，该条件下，三甲胺的检出限为0.3125ng，相当于供试品溶液浓度的2.5ppm，定量限为0.625ng，相当于供试品溶液浓度的5ppm，灵敏度可以满足检测要求。然而，方法的专属性试验中，左卡尼汀会干扰三甲胺的检测，低浓度时，三甲胺附近有一个倒峰，高浓度时，看不到三甲胺附近的倒峰，典型的色谱图见图1～3。方法的准确度试验中，在确定的限度浓度下，加样回收率均达不到75％，实验结果总结见表3。
[0071]
表3三甲胺准确度溶液计算结果
[0072][0073]
发明人为进一步研究左卡尼汀注射液中三甲胺的测定，委托北京苏雅蛋白研发中心有限公司采用液
‑
质连用的方法进行了左卡尼汀注射液中三甲胺测定的试验。采用液
‑
质联用的方法对左卡尼汀注射液中的三甲胺进行检测，结果表明，左卡尼汀与三甲胺不能实现有效分离，且回收率不达标。典型图谱见图4，回收率结果见表4。
[0074]
表4 lc
‑
ms检测准确度检测结果(北京苏雅)
[0075][0076]
所述第一容器用于容纳待测物，所述第一容器1包括第一进气口3和第一出气口4，所述第一进气口3用于向所述第一容器中容纳的所述待测物中通入不与所述待测物发生化学反应的气体；
[0077]
所述第二容器2用于容纳酸性溶液，所述第二容器包括第二进气口5和第二出气口6，所述第二进气口5与所述第一出气口4连通，使所述第一容器1内的气体可通入到所述第二容器2中的所述酸性溶液内；所述第二出气口6用于使由第二进气口通入的气体在与酸性
溶液接触后从所述第二容器2排出；所述检测仪器用于检测酸性溶液中三甲胺的含量。
[0078]
所述第一容器1还可设有控温装置(图中未示出)，用于控制所述第一容器1中内容物的温度。
[0079]
所述第一容器1上还安装有碱性溶液加料装置7，用于向所述待测物中加入碱性溶液。
[0080]
所述用于检测三甲胺含量的装置还包括尾气处理装置8，所述尾气处理装置8与所述第二容器2的第二出气口6连通，用于处理由第二出气口排出的气体。
[0081]
所述第一容器还安装有气体流量计9，用于控制从所述第一进气口3通入的气体的流量。
[0082]
所述第二容器还可设有控温装置(图中未示出)，用于控制所述第二容器中内容物的温度。
[0083]
上述装置的运行方法如下。
[0084]
将待测物加入到所述第一容器1中，将酸性溶液加入到第二容器2中；通过所述碱性溶液加料装置7向所述第一容器1中的所述待测物中以滴加的方式加入碱性溶液，经由所述第一进气口3以预定的流量向所述第一容器1中的内容物中通入不与待测物组分发生化学反应的气体，对所述第一容器1内的内容物进行鼓吹。任选地，通过控温装置将第一容器内的内容物控制在预定的温度。在待测物中含有三甲胺的情况下，三甲胺随着通入的气体一起经所述第一出气口4和所述第二进气口5通入到所述第二容器2中的酸性溶液中。任选地，通过控温装置将第二容器内的内容物控制在预定的温度。三甲胺与所述酸性溶液进行反应，生产三甲胺盐。然后将反应后的酸性溶液采用检测仪器进行检测，根据检测的酸性溶液中三甲胺盐的含量，计算出待测物中三甲胺的含量。与酸性溶液反应后的气体，经由第二出气口6从第二容器2排出至尾气处理装置8，经尾气处理装置8处理后再向环境中排放。
[0085]
实施例
[0086]
以下实施例，检测仪器采用离子色谱仪。
[0087]
1、色谱条件如下表5：
[0088]
表5
[0089]
[0090]
2、三甲胺标准曲线线性方程的确定：
[0091]
(1)样品溶液的制备
[0092]
空白溶剂(稀释剂)：0.1mol/l甲磺酸溶液。
[0093]
三甲胺对照品溶液的制备：取三甲胺盐酸盐对照品适量，精密称定，加稀释剂溶解并定量稀释制成不同浓度的系列标准溶液。
[0094]
(2)试验结果
[0095]
按照上述的色谱条件，分别进样空白溶剂和对照品溶液，记录色谱图，试验结果统计见表6，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回归，详见图6。
[0096]
表6三甲胺对照品溶液的测试结果
[0097]
对照品溶液浓度(μg/ml)保留时间1峰面积1保留时间2峰面积2平均峰面积0.3015.0240.03015.0310.0300.0300.9015.0240.12815.0210.1210.1251.5014.9040.22114.9340.2290.2252.1114.9140.32914.8870.3290.3292.7114.8940.42314.8670.4280.426
[0098]
(3)试验结论
[0099]
三甲胺在浓度为0.30μg/ml～2.71μg/ml范围内呈良好的的线性关系，线性方程为y＝0.1654x
‑
0.0221，r2＝0.9998。
[0100]
3、定检限确定
[0101]
(1)样品溶液的制备
[0102]
空白溶剂(稀释剂)：0.1mol/l甲磺酸溶液。
[0103]
定量限溶液的制备：采用对照品溶液逐级稀释法，按照信噪比(s/n)约为10确定为三甲胺的定量限进行制备，取适量。
[0104]
检测限溶液的制备：采用对照品溶液逐级稀释法，按照信噪比(s/n)约为3确定为三甲胺的检测限进行制备，取适量。
[0105]
(2)试验结果
[0106]
按照上述色谱条件，分别进样定量限溶液和检测限溶液，记录色谱图，统计试验结果见表7和8。
[0107]
表7定检限溶液测试结果(三甲胺)
[0108]
[0109][0110]
表8定检限计算结果
[0111][0112]
注：上述各浓度均为代入含量折算后数据。
[0113]
(3)试验结论
[0114]
在确定的色谱条件下，三甲胺的检出限为3ng，相当于供试品浓度的0.24ppm；三甲胺的定量限为7.5ng，相当于供试品浓度的0.60ppm。检出限和定量限分别多次进样，结果重复性良好。
[0115]
4、进样精密度测试
[0116]
(1)样品溶液的制备
[0117]
空白溶剂(稀释剂)：0.1mol/l甲磺酸溶液。
[0118]
对照品溶液的制备：取三甲胺盐酸盐适量，精密称定，用稀释剂溶解并定量稀释制成每1ml中约含三甲胺1.5μg的溶液，摇匀，即得。
[0119]
(2)试验结果
[0120]
按照确定的色谱条件，取同一份对照品溶液，连续6次进样，记录色谱图，试验结果统计见表9。
[0121]
表9进样精密度检测结果
[0122]
[0123][0124]
(3)试验结论
[0125]
试验结果表明，以连续6次进样记录保留时间和峰面积分别计算rsd值，可见rsd均没有超过2％，说明该方法具有较好的进样精密度。
[0126]
5、以下实施例中，供试品溶液采用本实用新型的装置按照如下方法制备，然后进行检测。
[0127]
向左卡尼汀注射液中加入碱性溶液，根据需要加热，以及向其中通入气体将三甲胺气体带出并通至酸性溶液中，获得含三甲胺盐的溶液，将其转移并稀释，配制供试品溶液。
[0128]
实施例1
[0129]
供试品溶液制备及条件：氮气的流量分别为0.05ml/min、0.4l/min、2l/min、20l/min，三甲胺(气体)的生成温度为40℃，碱性溶液(1％(g/ml)氢氧化钠溶液)的用量为5ml，酸性溶液(0.1mol/l甲磺酸溶液)的用量为6ml，生成三甲胺盐的反应温度为室温，反应时间为20分钟，左卡尼汀注射液(5ml：1g)用量为25ml，将生成的含三甲胺盐的溶液，用0.1mol/l甲磺酸溶液定量稀释至10ml，即得。
[0130]
三甲胺对照品溶液制备：取三甲胺盐酸盐适量，精密称定，用0.1mol/l甲磺酸溶液溶解并定量稀释制成每1ml中约含三甲胺1.5μg的溶液，摇匀，即得。
[0131]
采用上述离子色谱条件，进样分析，记录色谱数据，计算供试品溶液中的三甲胺含量。结果见下表10：
[0132]
表10
[0133]
氮气流量0.05l/min0.4l/min2l/min20l/min三甲胺含量(ppm)4.35.24.83.5
[0134]
实施例2
[0135]
供试品溶液制备条件：通入氮气、氦气、空气，流量为0.4l/min，三甲胺(气体)的生成温度为40℃，碱性溶液为5ml碳酸钾溶液，浓度为1％(g/ml)，酸性溶液为0.1mol/l盐酸溶液，用量为6ml，生成三甲胺盐的反应温度为室温，反应时间为20分钟，左卡尼汀注射液(5ml：1g)的用量为25ml，将生成的含三甲胺盐的溶液，用0.1mol/l盐酸溶液定量稀释至10ml，即得。
[0136]
三甲胺对照品溶液制备：取三甲胺盐酸盐适量，精密称定，用0.1mol/l盐酸溶液溶解并定量稀释制成每1ml中约含三甲胺1.5μg的溶液，摇匀，即得。
[0137]
采用上述离子色谱条件，进样分析，记录色谱数据，计算供试品溶液中的三甲胺含量。结果见下表11：
[0138]
表11
[0139]
气体种类氮气氦气空气三甲胺含量(ppm)4.64.94.5
[0140]
实施例3
[0141]
供试品溶液制备及条件：氮气的流量为0.4l/min，三甲胺(气体)的生成温度为40℃，碱性溶液为5ml氢氧化钠溶液，浓度分别为0.01％、0.1％、1％和20％(g/ml)，酸性溶液(0.1mol/l甲磺酸溶液)用量为6ml，生成三甲胺盐的反应温度为室温，反应时间为20分钟，左卡尼汀注射液(5ml：1g)的用量为25ml，将生成的含三甲胺盐的溶液，用0.1mol/l甲磺酸溶液定量稀释至10ml，即得。
[0142]
三甲胺对照品溶液制备：取三甲胺盐酸盐适量，精密称定，用0.1mol/l甲磺酸溶液溶解并定量稀释制成每1ml中约含三甲胺1.5μg的溶液，摇匀，即得。
[0143]
采用上述离子色谱条件，进样分析，记录色谱数据，计算供试品溶液中的三甲胺含量。结果见下表12：
[0144]
表12
[0145]
氢氧化钠浓度0.01％0.1％1％20％三甲胺含量(ppm)2.54.74.910.8
[0146]
实施例4
[0147]
供试品溶液制备及条件：通入氦气，流量为1l/min，三甲胺(气体)的生成温度为50℃，碱性溶液分别采用氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钾、碳酸钠溶液，浓度均为1％(g/ml)，用量均为5ml，酸性溶液为0.5mol/l硫酸溶液，用量为6ml，生成三甲胺盐的反应温度为20℃，反应时间为25分钟，左卡尼汀注射液(5ml：1g)用量为25ml，将生成的含三甲胺盐的溶液，用0.5mol/l硫酸溶液定量稀释至10ml，即得。
[0148]
三甲胺对照品溶液：取三甲胺盐酸盐适量，精密称定，用0.5mol/l硫酸溶液溶解并定量稀释制成每1ml中约含三甲胺1.5μg的溶液，摇匀，即得。
[0149]
采用上述离子色谱条件，进样分析，记录色谱数据，计算供试品溶液中的三甲胺含量。结果见下表13：
[0150]
表13
[0151]
碱性液体种类氢氧化钠氢氧化钾碳酸钾碳酸钠三甲胺含量(ppm)4.94.64.54.8
[0152]
实施例5
[0153]
供试品溶液制备及条件：氮气的流量为0.4l/min，三甲胺(气体)的生成温度为70℃，碱性溶液采用5ml氢氧化钾溶液，浓度为1％(g/ml)，酸性溶液分别采用0.01mol/l、0.05mol/l、0.1mol/l、1mol/l、5mol/l的甲磺酸溶液，用量均为6ml，生成三甲胺盐的反应温度为室温，反应时间为20分钟，左卡尼汀注射液(5ml：1g)用量为25ml，将生成的含三甲胺盐的溶液，用各浓度的甲磺酸溶液定量稀释至10ml，即得。
[0154]
三甲胺对照品溶液：取三甲胺盐酸盐适量，精密称定，用甲磺酸溶液溶解并定量稀释制成每1ml中约含三甲胺1.5μg的溶液，摇匀，即得。
[0155]
采用上述离子色谱条件，进样分析，记录色谱数据，计算供试品溶液中的三甲胺含
量。结果见下表14：
[0156]
表14
[0157]
甲磺酸浓度(mol/l)0.010.050.115三甲胺含量(ppm)2.63.75.35.15.3
[0158]
实施例6
[0159]
供试品溶液制备及条件：通入空气，流量为0.4l/min，三甲胺(气体)的生成温度为40℃，碱性溶液采用5ml碳酸钠溶液，浓度为1％(g/ml)，酸性溶液分别采用0.1mol/l的盐酸、硫酸、甲磺酸、磷酸水溶液，用量均为6ml，生成三甲胺盐的反应温度为30℃，反应时间为25分钟，左卡尼汀注射液(5ml：1g)用量为25ml，将生成的含三甲胺盐的溶液，用各浓酸性溶液定量稀释至10ml，即得。
[0160]
三甲胺对照品溶液：取三甲胺盐酸盐适量，精密称定，用各酸性溶液溶解并定量稀释制成每1ml中约含三甲胺1.5μg的溶液，摇匀，即得。
[0161]
采用上述离子色谱条件，进样分析，记录色谱数据，计算供试品溶液中的三甲胺含量。结果见下表15：
[0162]
表15
[0163]
酸性液体种类盐酸硫酸甲磺酸磷酸三甲胺含量(ppm)4.54.55.14.8
[0164]
实施例7
[0165]
供试品溶液的制备及条件：通入氮气，流量为0.6l/min，三甲胺(气体)的生成温度分别为10、20、40、80℃，碱性溶液为5ml氢氧化钠溶液，浓度为1％(g/ml)，酸性溶液为0.1mol/l甲磺酸溶液，用量为6ml，生成三甲胺盐的反应温度为60℃，反应时间为20分钟，左卡尼汀注射液(5ml：1g)用量为25ml，将生成的含三甲胺盐的溶液用0.1mol/l甲磺酸溶液定量稀释至10ml，即得。
[0166]
三甲胺对照品溶液制备：取三甲胺盐酸盐适量，精密称定，用0.1mol/l甲磺酸溶液溶解并定量稀释制成每1ml中约含三甲胺1.5μg的溶液，摇匀，即得。
[0167]
采用上述离子色谱条件，进样分析，记录色谱数据，计算供试品溶液中的三甲胺含量。结果见下表15：
[0168]
表16
[0169]
三甲胺生成反应温度(℃)10204080三甲胺含量(ppm)3.84.84.85.3
[0170]
实施例8
[0171]
供试品溶液制备及条件：选择氮气，流量为0.6l/min，三甲胺(气体)的生成温度为40℃，碱性溶液为5ml氢氧化钠溶液，浓度为5％(g/ml)，酸性溶液为0.1mol/l甲磺酸溶液，用量为6ml，生成三甲胺盐的反应温度为室温，反应时间为5、30、60、120min，左卡尼汀注射液(5ml：1g)用量为25ml，将生成的含三甲胺盐的溶液，用0.1mol/l硫酸溶液定量稀释至10ml，即得。
[0172]
三甲胺对照品溶液制备：取三甲胺盐酸盐适量，精密称定，用0.1mol/l硫酸溶液溶解并定量稀释制成每1ml中约含三甲胺1.5μg的溶液，摇匀，即得。
[0173]
采用上述离子色谱条件，进样分析，记录色谱数据，计算供试品溶液中的三甲胺含量。结果见下表17：
[0174]
表17
[0175]
反应时间(min)53060120三甲胺含量(ppm)4.94.84.94.6
[0176]
实施例9
[0177]
供试品溶液的制备及条件：通入氮气，流量为0.4l/min，三甲胺(气体)的生成温度为40℃，碱性溶液为5ml氢氧化钠溶液，浓度为1％(g/ml)，酸性溶液为0.1mol/l甲磺酸溶液，用量为6ml，生成三甲胺盐的反应温度为室温，反应时间为20min，分别采用样本1[25ml左卡尼汀注射液(云南龙海，5ml：1g)]、样本2[左卡尼汀原料药5g+水25ml]、样本3[25ml左卡尼汀注射液(东北制药，5ml：1g)]、样本4[左旋肉碱保健品22.73g(汤臣倍健，100g：22g)+水25ml]、样本5[25ml左卡尼汀口服溶液(alfasigma s.p.a，10ml：2g)]、样本6[5g左卡尼汀对照品(中国食品药品检定研究院，99.99％)+水25ml]制备供试品溶液，将生成的含三甲胺盐的溶液用0.1mol/l硫酸溶液定量稀释至10ml，即得。
[0178]
三甲胺对照品溶液：取三甲胺盐酸盐适量，精密称定，用0.1mol/l硫酸溶液溶解并定量稀释制成每1ml中约含三甲胺1.5μg的溶液，摇匀，即得。
[0179]
采用上述离子色谱条件，进样分析，记录色谱数据，计算供试品溶液中的三甲胺含量。结果见下表18：
[0180]
表18
[0181][0182]
检测方法的重复性考察
[0183]
(1)样品溶液的制备
[0184]
三甲胺对照品溶液的制备：取三甲胺盐酸盐适量，精密称定，用0.1mol/l甲磺酸溶液溶解并定量稀释制成每1ml中约含三甲胺1.5μg的溶液，摇匀，即得。
[0185]
供试品溶液的制备及条件：氮气的流量为0.4l/min，三甲胺(气体)的生成温度为40℃，碱性溶液固定采用1％(g/ml)氢氧化钠溶液5ml，酸性溶液(0.1mol/l甲磺酸溶液)用量为6ml，生成三甲胺盐的反应温度为室温，反应时间为20分钟，12.5ml左卡尼汀注射液(5ml:2g)中加入12.5ml水。将生成的含三甲胺盐的溶液用稀释剂0.1mol/l甲磺酸溶液定容至10ml，即得。
[0186]
(2)试验结果
[0187]
按照上述确定的方法，由同一实验者连续制备6份供试品溶液，采用上述确定的色谱条件，进样分析，记录色谱图，试验结果统计见表19～20。
[0188]
表19三甲胺对照品溶液的测试结果
[0189][0190]
表20重复性试验结果
[0191][0192]
(3)试验结论
[0193]
由同一研究人员，连续制备同一批号样品的6份供试品溶液进样分析，以6份供试品溶液的三甲胺测定结果计算rsd值为3.87％，说明该方法具有较好的重复性。
[0194]
检测方法的中间精密度考察
[0195]
三甲胺对照品溶液的制备：取三甲胺盐酸盐适量，精密称定，用0.1mol/l甲磺酸溶液溶解并定量稀释制成每1ml中约含三甲胺1.5μg的溶液，摇匀，即得。
[0196]
供试品溶液的制备及条件：氮气的流量为0.4l/min，三甲胺(气体)的生成温度为40℃，碱性溶液采用1％(g/ml)氢氧化钠溶液5ml，酸性溶液(0.1mol/l甲磺酸溶液)用量为6ml，生成三甲胺盐的反应温度为室温，反应时间为20分钟，12.5ml左卡尼汀注射液(5ml:2g)中加入12.5ml水。将生成的含三甲胺盐的溶液用0.1mol/l甲磺酸溶液定容至10ml，即得。
[0197]
(2)试验结果
[0198]
按照确定的方法，由不同实验者各制备6份供试品溶液，采用上述确定的色谱条件，进样分析，记录色谱图，试验结果见表21～22。
[0199]
表21三甲胺对照品溶液的测试结果
[0200][0201]
表22中间精密度试验结果
[0202][0203][0204]
(3)试验结论
[0205]
两名实验员，在不同时间，各自平行配制6份供试品溶液，分别进样分析，以测定的12个含量值计算rsd值为5.12％，说明本方法具有较好的中间精密度。
[0206]
检测方法中准确度考察
[0207]
(1)样品溶液的制备
[0208]
三甲胺对照品溶液的制备：取三甲胺盐酸盐适量，精密称定，用0.1mol/l甲磺酸溶液溶解并定量稀释制成每1ml中约含三甲胺1.5μg的溶液，摇匀，即得。
[0209]
供试品加标溶液
‑
1的制备：氮气的流量为0.4l/min，三甲胺(气体)的生成温度为40℃，碱性溶液为1％(g/ml)的氢氧化钠溶液，用量为5ml，酸性溶液为0.1mol/l甲磺酸溶液，用量为6ml，生成三甲胺盐的反应温度为室温，反应时间为20分钟，将12.5ml左卡尼汀注射液(5ml:2g)和三甲胺对照品溶液适量(相当于9μg三甲胺)混合，用水补足至25ml。将生成的含三甲胺盐的溶液用0.1mol/l甲磺酸溶液定容至10ml。
[0210]
供试品加标溶液
‑
2的制备：氮气的流量为0.4l/min，三甲胺(气体)的生成温度为40℃，碱性溶液为1％(g/ml)氢氧化钠溶液，用量为5ml，酸性溶液为0.1mol/l甲磺酸溶液，用量为6ml，生成三甲胺盐的反应温度为室温，反应时间为20分钟，将12.5ml左卡尼汀注射液(5ml:2g)和三甲胺对照品溶液适量(相当于15μg三甲胺)混合，用水补足至25ml。将生成
的含三甲胺盐的溶液，用0.1mol/l甲磺酸溶液定容至10ml，即得。
[0211]
供试品加标溶液
‑
3的制备：氮气的流量为0.4l/min，三甲胺(气体)的生成温度为40℃，碱性溶液为1％(g/ml)氢氧化钠溶液，用量为5ml，酸性溶液为0.1mol/l甲磺酸溶液，用量为6ml，生成三甲胺盐的反应温度为室温，反应时间为20分钟，将12.5ml左卡尼汀注射液(5ml:2g)和三甲胺对照品溶液适量(相当于21μg三甲胺)混合，用水补足至25ml。将生成的含三甲胺盐的溶液，用0.1mol/l甲磺酸溶液定容至10ml，即得。
[0212]
(2)试验结果
[0213]
按照上述确定的方法，每种供试品溶液制备3份，采用上述色谱条件，分别进样空白溶剂、对照品溶液和供试品加标溶液，记录色谱图，试验结果见表23
‑
25。
[0214]
表23三甲胺对照品溶液的测试结果
[0215][0216]
表24三甲胺准确度测试结果
[0217][0218]
表25三甲胺准确度试验计算结果
[0219][0220][0221]
(3)试验结论
[0222]
加样回收率试验结果显示，9个样品的回收率在97.33～100.82％范围内，平均回收率为99.61％，按9次得到的回收率计算rsd值为1.07％，说明采用本实用新型装置的方法进行左卡尼汀注射液中三甲胺的的测定具有很好地准确度。
[0223]
检测方法的耐用性考察
[0224]
(1)试验设计
[0225]
在耐用性试验中，通过微小改变不同柱温、不同浓度淋洗液及不同流速，来评估测定条件有微小变动时，测定结果不受影响的承受程度，变动参数及试验结果见表26。
[0226]
表26色谱条件变动的参数
[0227]
色谱参数确定值变动的范围淋洗液甲磺酸17mmol/l15mmol/l～20mmol/l柱温30℃35℃流速0.5ml/min0.7ml/min
[0228]
(2)样品溶液的制备
[0229]
空白溶剂(稀释剂)：0.1mol/l甲磺酸溶液。
[0230]
三甲胺对照品溶液的制备：取三甲胺盐酸盐适量，精密称定，用稀释剂溶解并定量稀释制成每1ml中约含三甲胺1.5μg的溶液，摇匀，即得。
[0231]
(3)试验结果
[0232]
按照上述确定的色谱条件，分别进样空白溶剂和对照品溶液，记录色谱图，试验结果统计见表27。
[0233]
表27耐用性试验结果
[0234][0235]
(3)试验结论
[0236]
色谱条件在微小变动范围内，对三甲胺的理论板数、色谱峰的不对称度影响较小。综合分析，本品的三甲胺检测色谱条件具有良好的耐用性。