1.本发明涉及生物制药技术领域，尤其涉及一种泼尼松龙的生产方法。
背景技术：
2.泼尼松龙为肾上腺皮质激素类药物,主要用于各种急性严重细菌感染、严重过敏性疾病，胶原性疾病，风湿、类风湿性关节炎，严重支气管哮喘等，同时，泼尼松龙在甾体药物领域应用极为广泛，是合成曲安奈德、16α
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羟基泼尼松龙等药物的重要中间体。
3.经检索，申请号为201710058613.4的中国发明专利公开了一种生物酶法制备泼尼松龙的方法，包括如下步骤：取氢化可的松溶解于缓冲溶液中，加入助溶剂、氢受体,再向其中加入催化酶，在25
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c下反应，即得到的泼尼松龙。虽然其所述的生物酶法制备泼尼松龙的方法，生物转化所用的酶的量比较少，并且底物的浓度可以做到60克/升以上，大幅度降低了生产的成本，提高了反应效率，操作简单，条件温和，反应的后处理简单，易操作，对环境友好，适合大规模的工业化生产。
4.然而就其成品的检验和测量较为不便，难以判断其产品是否合格，一旦产品出现误差，其损失较大。
5.为此，我们提出一种泼尼松龙的生产方法。
技术实现要素：
6.基于背景技术存在的技术问题，本发明提出了一种泼尼松龙的生产方法。
7.为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：一种泼尼松龙的生产方法，包括如下步骤：（1）泼尼松龙制备：取氢化可的松溶解于缓冲溶液中，加入助溶剂、氢受体,再向其中加入催化酶，在25
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c下反应，即得到泼尼松龙，所述催化酶为甾酮脱氢酶；（2）鉴别：s1：取本品若干毫克，取1:1比例的甲醇和碱性酒石酸铜试液，首先将甲醇与本品进行溶解，随后将同等剂量的碱性酒石酸铜试液加入并进行加热，即生成橙红色沉淀。
8.s2：取泼尼松龙若干毫克，取若干毫升的硫酸，随后将硫酸加入泼尼松龙中，使泼尼松龙渐显深红色，无荧光，随后在溶剂中加入若干毫升的水，红色褪去，生成灰色絮状沉淀。
9.s3：在含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致。
10.s4：泼尼松龙的红外光吸收图谱应与对照的图谱（《药品红外光谱集》284图）一致。
11.（3）检查：q1：取泼尼松龙，选取一定比例的三氯甲烷和甲醇，使三氯甲烷和甲醇与泼尼松龙溶解并稀释制成溶液a，使溶液a作为供试品溶液；
q2：量取若干毫升的溶液a，随后将溶液a置于量瓶中，选用q1中同等剂量的三氯甲烷和甲醇在量瓶中稀释溶液a至刻度，得到溶液b作为对照溶液。
12.q3：照薄层色谱法试验，吸取上述溶液a和溶液b各5μl，分别点于同一硅胶g薄层板上，以二氯甲烷－乙醚－甲醇－水按照比例作为展开剂，分别进行展开和晾干，随后在105℃下干燥10分钟，之后放冷，放冷后喷以碱性四氮唑蓝试液并立即检视。
13.q4：所述q1中供试品溶液如显杂质斑点，不得多于3个，其颜色与所述q2中对照溶液的主斑点比较，不得更深。
14.（4）含量测定：r1：照高效液相色谱法测定：色谱条件与系统适用性试验，用填充剂以甲醇－水按照按照一定的比例为流动相。
15.r2：内标溶液的制备：取炔诺酮，加甲醇溶解并稀释制成每1ml中约含1.5mg的溶液，即得。
16.r3：测定法：取本品精密称定，在称定的泼尼松龙中加入一定剂量的甲醇溶解并定量稀释制成每1ml中约含1mg的溶液；精密量取该溶液与内标溶液置量瓶中，用甲醇稀释至刻度，随后摇匀，然后取10μl注入液相色谱仪，记录色谱图；另取泼尼松龙对照品，同法测定，按内标法以峰面积计算，即得。
17.优选的，s1中所述本品为泼尼松龙，选取量为10mg，所述甲醇与所述碱性酒石酸铜试液均为1ml。
18.优选的，s2中所述泼尼松龙选取约2mg，所述硫酸选取2ml，所述水选取10ml。
19.优选的，q1中所述三氯甲烷和甲醇的比例为9:1，溶解稀释后的供试品溶液每1ml中约含3mg的三氯甲烷和甲醇溶液。
20.优选的，q2中所述溶液a在量取时需精密量取，所述溶液a的选取量为2ml，使用的量瓶为100ml制。
21.优选的，q3中所述二氯甲烷－乙醚－甲醇－水的例如为：77～80：12～15：6～10：0.4～1。
22.优选的，q3中在105℃干燥时需使其干燥至恒重，干燥后使其减失重量不得过1.0%。
23.优选的，r1中所述填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶，所述甲醇
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水的比例为65：35，所述照高效液相色谱法测定数据为：检测波长为240nm，理论板数按泼尼松龙峰计算不低于1100，泼尼松龙峰和内标物质峰的分离度应大于3.5。
24.优选的，r3中所述该溶液与内标溶液的比例为1：1，具体为各5ml，所述量瓶为50ml制。
25.相比于现有技术，本发明具有如下有益效果：本发明利用多种样的鉴别方式，从而能够更加精准的对产品进行判断，预防产品由于大量单一判断造成的不合格，从而造成大量的经济损失。
具体实施方式
26.为了使本发明的目的、技术方案及有益效果更加清楚明白，下面结合实施例对本发明中的技术方案进一步说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，
并不用于限定本发明。
27.实施例一本实施例中提出了一种泼尼松龙的生产方法，包括如下步骤：（1）泼尼松龙制备：取氢化可的松溶解于缓冲溶液中，加入助溶剂、氢受体,再向其中加入催化酶，在25
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c下反应，即得到泼尼松龙，所述催化酶为甾酮脱氢酶；（2）鉴别：s1：取本品若干毫克，取1:1比例的甲醇和碱性酒石酸铜试液，首先将甲醇与本品进行溶解，随后将同等剂量的碱性酒石酸铜试液加入并进行加热，即生成橙红色沉淀，此步骤作为一次检测。
28.s2：取泼尼松龙若干毫克，取若干毫升的硫酸，随后将硫酸加入泼尼松龙中，使泼尼松龙渐显深红色，无荧光，随后在溶剂中加入若干毫升的水，红色褪去，生成灰色絮状沉淀，此步骤作为二次检测。
29.s3：在含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致，此步骤作为三次检测。
30.s4：泼尼松龙的红外光吸收图谱应与对照的图谱（《药品红外光谱集》284图）一致，此步骤作为四次检测。
31.（3）检查：q1：取泼尼松龙，选取一定比例的三氯甲烷和甲醇，使三氯甲烷和甲醇与泼尼松龙溶解并稀释制成溶液a，使溶液a作为供试品溶液，供试品溶液作为后续检查的供给使用；q2：量取若干毫升的溶液a，随后将溶液a置于量瓶中，选用q1中同等剂量的三氯甲烷和甲醇在量瓶中稀释溶液a至刻度，得到溶液b作为对照溶液，对照溶液方便后续对照使用。
32.q3：照薄层色谱法试验，吸取上述溶液a和溶液b各5μl，分别点于同一硅胶g薄层板上，以二氯甲烷－乙醚－甲醇－水按照比例作为展开剂，分别进行展开和晾干，随后在105℃下干燥10分钟，之后放冷，放冷后喷以碱性四氮唑蓝试液并立即检视，快速的检视能够第一时间了解的变化情况，预防随着时间推移变化剧烈，导致检视不准确。
33.q4：所述q1中供试品溶液如显杂质斑点，不得多于3个，其颜色与所述q2中对照溶液的主斑点比较，不得更深，少量的杂质斑点影响更小，浅色便于对比。
34.（4）含量测定：r1：照高效液相色谱法测定：色谱条件与系统适用性试验，用填充剂以甲醇－水按照按照一定的比例为流动相。
35.r2：内标溶液的制备：取炔诺酮，加甲醇溶解并稀释制成每1ml中约含1.5mg的溶液，即得。
36.r3：测定法：取本品精密称定，在称定的泼尼松龙中加入一定剂量的甲醇溶解并定量稀释制成每1ml中约含1mg的溶液；精密量取该溶液与内标溶液置量瓶中，用甲醇稀释至刻度，随后摇匀，然后取10μl注入液相色谱仪，记录色谱图；另取泼尼松龙对照品，同法测定，按内标法以峰面积计算，即得，上述多种方式的结合使用，能够使得检测的准确性更高，也直接减少了后续的经济损失。
37.s1中所述本品为泼尼松龙，选取量为10mg，所述甲醇与所述碱性酒石酸铜试液均为1ml。
38.s2中所述泼尼松龙选取约2mg，所述硫酸选取2ml，所述水选取10ml。
39.q1中所述三氯甲烷和甲醇的比例为9:1，溶解稀释后的供试品溶液每1ml中约含3mg的三氯甲烷和甲醇溶液。
40.q2中所述溶液a在量取时需精密量取，所述溶液a的选取量为2ml，使用的量瓶为100ml制。
41.q3中所述二氯甲烷－乙醚－甲醇－水的例如为：77：12：6：0.4。
42.q3中在105℃干燥时需使其干燥至恒重，干燥后使其减失重量不得过1.0%。
43.r1中所述填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶，所述甲醇
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水的比例为65：35，所述照高效液相色谱法测定数据为：检测波长为240nm，理论板数按泼尼松龙峰计算不低于1100，泼尼松龙峰和内标物质峰的分离度应大于3.5。
44.r3中所述该溶液与内标溶液的比例为1：1，具体为各5ml，所述量瓶为50ml制。
45.实施例二本实施例中提出了一种泼尼松龙的生产方法，包括如下步骤：（1）泼尼松龙制备：取氢化可的松溶解于缓冲溶液中，加入助溶剂、氢受体,再向其中加入催化酶，在25
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c下反应，即得到泼尼松龙，所述催化酶为甾酮脱氢酶；（2）鉴别：s1：取本品若干毫克，取1:1比例的甲醇和碱性酒石酸铜试液，首先将甲醇与本品进行溶解，随后将同等剂量的碱性酒石酸铜试液加入并进行加热，即生成橙红色沉淀，此步骤作为一次检测。
46.s2：取泼尼松龙若干毫克，取若干毫升的硫酸，随后将硫酸加入泼尼松龙中，使泼尼松龙渐显深红色，无荧光，随后在溶剂中加入若干毫升的水，红色褪去，生成灰色絮状沉淀，此步骤作为二次检测。
47.s3：在含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致，此步骤作为三次检测。
48.s4：泼尼松龙的红外光吸收图谱应与对照的图谱（《药品红外光谱集》284图）一致，此步骤作为四次检测。
49.（3）检查：q1：取泼尼松龙，选取一定比例的三氯甲烷和甲醇，使三氯甲烷和甲醇与泼尼松龙溶解并稀释制成溶液a，使溶液a作为供试品溶液，供试品溶液作为后续检查的供给使用；q2：量取若干毫升的溶液a，随后将溶液a置于量瓶中，选用q1中同等剂量的三氯甲烷和甲醇在量瓶中稀释溶液a至刻度，得到溶液b作为对照溶液，对照溶液方便后续对照使用。
50.q3：照薄层色谱法试验，吸取上述溶液a和溶液b各5μl，分别点于同一硅胶g薄层板上，以二氯甲烷－乙醚－甲醇－水按照比例作为展开剂，分别进行展开和晾干，随后在105℃下干燥10分钟，之后放冷，放冷后喷以碱性四氮唑蓝试液并立即检视，快速的检视能够第一时间了解的变化情况，预防随着时间推移变化剧烈，导致检视不准确。
51.q4：所述q1中供试品溶液如显杂质斑点，不得多于3个，其颜色与所述q2中对照溶液的主斑点比较，不得更深，少量的杂质斑点影响更小，浅色便于对比。
52.（4）含量测定：r1：照高效液相色谱法测定：色谱条件与系统适用性试验，用填充剂以甲醇－水按照按照一定的比例为流动相。
53.r2：内标溶液的制备：取炔诺酮，加甲醇溶解并稀释制成每1ml中约含1.5mg的溶液，即得。
54.r3：测定法：取本品精密称定，在称定的泼尼松龙中加入一定剂量的甲醇溶解并定量稀释制成每1ml中约含1mg的溶液；精密量取该溶液与内标溶液置量瓶中，用甲醇稀释至刻度，随后摇匀，然后取10μl注入液相色谱仪，记录色谱图；另取泼尼松龙对照品，同法测定，按内标法以峰面积计算，即得，上述多种方式的结合使用，能够使得检测的准确性更高，也直接减少了后续的经济损失。
55.s1中所述本品为泼尼松龙，选取量为10mg，所述甲醇与所述碱性酒石酸铜试液均为1ml。
56.s2中所述泼尼松龙选取约2mg，所述硫酸选取2ml，所述水选取10ml。
57.q1中所述三氯甲烷和甲醇的比例为9:1，溶解稀释后的供试品溶液每1ml中约含3mg的三氯甲烷和甲醇溶液。
58.q2中所述溶液a在量取时需精密量取，所述溶液a的选取量为2ml，使用的量瓶为100ml制。
59.q3中所述二氯甲烷－乙醚－甲醇－水的例如为：79：14：8：0.7。
60.q3中在105℃干燥时需使其干燥至恒重，干燥后使其减失重量不得过1.0%。
61.r1中所述填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶，所述甲醇
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水的比例为65：35，所述照高效液相色谱法测定数据为：检测波长为240nm，理论板数按泼尼松龙峰计算不低于1100，泼尼松龙峰和内标物质峰的分离度应大于3.5。
62.r3中所述该溶液与内标溶液的比例为1：1，具体为各5ml，所述量瓶为50ml制。
63.实施例三本实施例中提出了一种泼尼松龙的生产方法，包括如下步骤：（1）泼尼松龙制备：取氢化可的松溶解于缓冲溶液中，加入助溶剂、氢受体,再向其中加入催化酶，在25
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35
°
c下反应，即得到泼尼松龙，所述催化酶为甾酮脱氢酶；（2）鉴别：s1：取本品若干毫克，取1:1比例的甲醇和碱性酒石酸铜试液，首先将甲醇与本品进行溶解，随后将同等剂量的碱性酒石酸铜试液加入并进行加热，即生成橙红色沉淀，此步骤作为一次检测。
64.s2：取泼尼松龙若干毫克，取若干毫升的硫酸，随后将硫酸加入泼尼松龙中，使泼尼松龙渐显深红色，无荧光，随后在溶剂中加入若干毫升的水，红色褪去，生成灰色絮状沉淀，此步骤作为二次检测。
65.s3：在含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致，此步骤作为三次检测。
66.s4：泼尼松龙的红外光吸收图谱应与对照的图谱（《药品红外光谱集》284图）一致，此步骤作为四次检测。
67.（3）检查：q1：取泼尼松龙，选取一定比例的三氯甲烷和甲醇，使三氯甲烷和甲醇与泼尼松龙溶解并稀释制成溶液a，使溶液a作为供试品溶液，供试品溶液作为后续检查的供给使用；q2：量取若干毫升的溶液a，随后将溶液a置于量瓶中，选用q1中同等剂量的三氯甲烷和甲醇在量瓶中稀释溶液a至刻度，得到溶液b作为对照溶液，对照溶液方便后续对照使用。
68.q3：照薄层色谱法试验，吸取上述溶液a和溶液b各5μl，分别点于同一硅胶g薄层板上，以二氯甲烷－乙醚－甲醇－水按照比例作为展开剂，分别进行展开和晾干，随后在105℃下干燥10分钟，之后放冷，放冷后喷以碱性四氮唑蓝试液并立即检视，快速的检视能够第一时间了解的变化情况，预防随着时间推移变化剧烈，导致检视不准确。
69.q4：所述q1中供试品溶液如显杂质斑点，不得多于3个，其颜色与所述q2中对照溶液的主斑点比较，不得更深，少量的杂质斑点影响更小，浅色便于对比。
70.（4）含量测定：r1：照高效液相色谱法测定：色谱条件与系统适用性试验，用填充剂以甲醇－水按照按照一定的比例为流动相。
71.r2：内标溶液的制备：取炔诺酮，加甲醇溶解并稀释制成每1ml中约含1.5mg的溶液，即得。
72.r3：测定法：取本品精密称定，在称定的泼尼松龙中加入一定剂量的甲醇溶解并定量稀释制成每1ml中约含1mg的溶液；精密量取该溶液与内标溶液置量瓶中，用甲醇稀释至刻度，随后摇匀，然后取10μl注入液相色谱仪，记录色谱图；另取泼尼松龙对照品，同法测定，按内标法以峰面积计算，即得，上述多种方式的结合使用，能够使得检测的准确性更高，也直接减少了后续的经济损失。
73.s1中所述本品为泼尼松龙，选取量为10mg，所述甲醇与所述碱性酒石酸铜试液均为1ml。
74.s2中所述泼尼松龙选取约2mg，所述硫酸选取2ml，所述水选取10ml。
75.q1中所述三氯甲烷和甲醇的比例为9:1，溶解稀释后的供试品溶液每1ml中约含3mg的三氯甲烷和甲醇溶液。
76.q2中所述溶液a在量取时需精密量取，所述溶液a的选取量为2ml，使用的量瓶为100ml制。
77.q3中所述二氯甲烷－乙醚－甲醇－水的例如为：78：13：7：0.6。
78.q3中在105℃干燥时需使其干燥至恒重，干燥后使其减失重量不得过1.0%。
79.r1中所述填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶，所述甲醇
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水的比例为65：35，所述照高效液相色谱法测定数据为：检测波长为240nm，理论板数按泼尼松龙峰计算不低于1100，泼尼松龙峰和内标物质峰的分离度应大于3.5。
80.r3中所述该溶液与内标溶液的比例为1：1，具体为各5ml，所述量瓶为50ml制。
81.以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其
发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。