时间分辨荧光免疫层析试剂条、制备方法及大麻浓度定量检测方法与流程

1.本发明涉及生化检测技术领域，特别是涉及一种时间分辨荧光免疫层析试剂条、制备方法及大麻浓度定量检测方法。


背景技术：

2.大麻是公认的三大毒品之一。通常用于吸食的植物大麻是指“印度大麻”，包括大麻植物的叶和花。大麻植物里已知的化学物质至少400多种，其中大麻酚类有60多种，具有类似的化学特性，大剂量使用可造成幻觉、妄想、精神失常。长期食用大麻可造成对其依赖，导致大脑高级认知功能损害，如注意力、记忆力、精细认知等功能损害。大麻还可引起躯体器质性损害，包括呼吸系统损害，引起支气管炎、肺气肿及组织病理学改变，成为癌症发生的高危因素。
3.目前，检测大麻的生物基质有血液、汗液、尿液、唾液、毛发以及指甲等。尿液是最常见的检测基质，尿液基质大麻检测窗口长达30天左右，具有易于使用、价格低廉等优势；唾液基质大麻检测窗口一般为24小时，主要用于路边毒驾检测，采样方便、快捷。毛发基质大麻检测窗口长达90天，同时还具有取样方便、易保存、易运输等优势，弥补了尿液、唾液基质检测窗口短的缺陷。尿液、唾液、毛发三种检测基质结合使用，能更全面客观评价被检测者的滥用情况。
4.目前针对大麻的检测方法主要有初筛和确认两种类型。确认方法主要有气相色谱、液相色谱以及气相色谱
‑
质谱联用、液相色谱
‑
质谱联用等方法，这些方法具有较高的灵敏度和特异性，但也存在操作复杂、耗时、设备昂贵且不易移动、需要专业人员操作等缺陷。目前国际公认的初筛方法是酶联免疫吸附法和胶体金免疫层析法，具有操作简便、价格便宜等优势，但酶联免疫吸附法操作专业性较强，需要专业人员进行操作，且相对较为费时、成本高；胶体金免疫层析法只能进行定性分析，灵敏度较低、批间差异较大。目前的免疫层析试剂条只针对尿液或唾液等一种基质，检测窗口短，只能追溯一个月内的毒品滥用情况，容易出现漏检。


技术实现要素：

5.基于此，有必要提供一种灵敏度高、简便快速且能同时用于对尿液、唾液、毛发三种基质中大麻浓度定量检测的时间分辨荧光免疫层析试剂条、制备方法及大麻浓度定量检测方法。
6.一种时间分辨荧光免疫层析试剂条，其特征在于，包括样品垫、结合垫、包被膜、吸收垫及底板；
7.所述样品垫、所述结合垫、所述包被膜依次顺序设置在所述底板上，所述吸收垫设置在所述包被膜上并与所述包被膜接触；
8.所述结合垫上具有时间分辨荧光微球标记的大麻单克隆抗体，所述时间分辨荧光
微球表面修饰有功能基团，所述时间分辨荧光微球填充有包含镧系元素的物质；
9.所述包被膜上设有检测线和质控线，所述检测线相比较于所述质控线更靠近于所述结合垫，所述检测线包被有大麻
‑
bsa抗原，所述质控线包被有能够与大麻
‑
bsa抗原结合的抗体。
10.在其中一个实施例中，所述功能基团包括羧基。
11.在其中一个实施例中，所述时间分辨荧光微球的粒径为100
‑
500nm，激发波长为300
‑
400nm，发射波长为600
‑
700nm。
12.在其中一个实施例中，所述质控线与所述检测线之间的间距为3
‑
8mm。
13.在其中一个实施例中，所述包被膜为硝酸纤维素膜。
14.一种时间分辨荧光免疫层析试剂条的制备方法，包括如下步骤：
15.时间分辨荧光微球标记大麻单克隆抗体的制备：将时间分辨荧光微球加入到偶联缓冲液中，再加入待标记的大麻单克隆抗体进行偶联、封闭、离心以及重悬后4℃保存，所述大麻单克隆抗体加入的含量为：10
‑
100μg大麻单克隆抗体/100ul大麻单克隆抗体；
16.样品垫制备：将样品预处理液滴加在样品垫上，烘干；
17.结合垫制备：通过微球稀释液将得到的时间分辨荧光微球标记的大麻单克隆抗体进行稀释得到抗体稀释液，所述时间分辨荧光微球的含量为：0.5
‑
1.5ul大麻单克隆抗体/1ml微球稀释液，将所述抗体稀释液滴加在结合垫上，烘干；
18.包被膜的制备：将用pbs溶液稀释后的大麻
‑
bsa抗原和羊抗鼠igg抗体分别划线于包被膜上作为检测线和质控线，所述检测线相比较与所述质控线更靠近结合垫，置于37℃保存；
19.将制得的所述样品垫、所述结合垫以及所述包被膜依次顺序粘贴于底板上，将吸收垫粘连于所述底板上且所述质控线靠近于所述吸收垫。
20.在其中一个实施例中，偶联时间为5
‑
60min，加入封闭液封闭5
‑
60min，用保存液洗涤重悬，4℃保存。
21.在其中一个实施例中，样品垫制备步骤和/或结合垫制备步骤中，烘干温度为45℃，烘干时间为3
‑
4h。
22.在其中一个实施例中，包被膜的制备中，所述检测线和/或所述质控线的包被量为0.5
‑
1μl/cm。
23.在其中一个实施例中，所述时间分辨荧光免疫层析试剂条的宽度为3
‑
4mm。
24.一种大麻浓度定量检测方法，包括如下步骤：
25.将所述的时间分辨荧光免疫层析试剂条以及待测样品置于室温；
26.向所述时间分辨荧光免疫层析试剂条滴加待测样品，反应后，检测该时间分辨荧光免疫层析试剂条上检测线和质控线的荧光强度，获取t值、c值以及t/c值，通过标准曲线获取待测样品中大麻的浓度。
27.一种试剂盒，包括所述的时间分辨荧光免疫层析试剂条。
28.本发明的时间分辨荧光免疫层析试剂条，能利用尿液、唾液、毛发三种基质检测大麻，弥补了单一基质检测窗口有限，三种基质互为补充，减少了因被检测者短暂停吸而出现的漏检情况。
29.相比传统技术，本发明具有如下有益效果：
30.(1)本发明采用的时间分辨荧光微球是以镧系元素(例如铕)填充至纳米级的聚苯乙烯微球中制作而成，与普通荧光相比，具有stokes位移大，荧光寿命长等特点，可以有效排除激发光和非特异性荧光对信号采集的干扰，提高检验的特异性和准确性。
31.(2)本发明制备的时间分辨荧光免疫层析试剂条能进行定量检测，具有灵敏度高、检测方便、快捷、价格便宜、无需专业人员操作等优势，有利于基层的现场快速检测。
32.(3)本发明制备的时间分辨荧光免疫层析试剂条能进行尿液、唾液、毛发三种基质中大麻浓度的定量检测，一个试剂条能检测三种基质，弥补了传统试剂条单一基质检测、窗口窄、易漏检的缺陷，能全面客观评价被检测者的滥用情况。
附图说明
33.图1为本发明实施例1所述的时间分辨荧光免疫层析试剂条示意图；
34.图2为本发明实施例3所述的标准曲线图；
35.图3为本发明实施例4所述的标准曲线图；
36.图4为本发明实施例5所述的标准曲线图。
37.附图标记说明
38.10、时间分辨荧光免疫层析试剂条；1、底板；2、样品垫；3、结合垫；4、硝酸纤维素膜；5、吸收垫；6、检测线；7、质控线。
具体实施方式
39.为了便于理解本发明，下面将参照相关附图对本发明进行更全面的描述。附图中给出了本发明的较佳实施例。但是，本发明可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。相反地，提供这些实施例的目的是使对本发明的公开内容的理解更加透彻全面。
40.在本发明的描述中，应当理解的是，本发明中采用术语在本发明的描述中，应当理解的是，本发明中采用术语“中心”、“上”、“下”、“底”、“内”、“外”等指示的方位或位置关系为基于附图所示的方位或位置关系，仅是为了便于描述本发明和简化描述，而不是指示或暗示所指的装置或元件必须具有特定的方位、以特定的方位构造和操作，因此不能理解为对本发明的限制。
41.在本发明的描述中，需要说明的是，除非另有明确的规定和限定，术语“相连”、“连接”应做广义理解，例如，可以是固定连接，也可以是可拆卸连接，或一体地连接；可以是机械连接，也可以是电连接；可以是直接相连，也可以通过中间媒介间接相连，可以是两个元件内部的连通，也即，当元件被称为“固定于”另一个元件，它可以直接在另一个元件上或者也可以存在居中的元件。当一个元件被认为是“连接”另一个元件，它可以是直接连接到另一个元件或者可能同时存在居中元件。对于本领域的普通技术人员而言，可以具体情况理解上述术语在本发明中的具体含义。
42.除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本发明。本文所使用的术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。
43.请参阅图1所示，本发明一实施例提供了一种时间分辨荧光免疫层析试剂条10。
44.一种时间分辨荧光免疫层析试剂条10，包括样品垫2、结合垫3、包被膜、吸收垫5及底板1。
45.样品垫2、结合垫3、包被膜依次顺序设置在底板1上，吸收垫5设置在包被膜上。
46.样品垫2由样品预处理液处理过。
47.结合垫3上具有时间分辨荧光微球标记的大麻单克隆抗体，时间分辨荧光微球为聚苯乙烯微球，时间分辨荧光微球表面修饰有功能基团，功能基团包括
‑
cooh或
‑
oh等，功能基团用于与抗体的共价偶联，使标记物更稳定。时间分辨荧光微球填充有包含镧系元素的物质。
48.包被膜上设有检测线6和质控线7，检测线6相比较于质控线更靠近结合垫3，质控线7靠近于吸收垫5，检测线6包被有大麻
‑
bsa抗原，质控线7包被有能够与大麻
‑
bsa抗原结合的抗体，优选地，质控线7包被有羊抗鼠igg抗体。
49.在其中一个具体示例中，功能基团包括羧基。
50.在其中一个具体示例中，时间分辨荧光微球的粒径为100
‑
500nm，激发波长为300
‑
400nm，发射波长为600
‑
700nm。例如，时间分辨荧光微球的粒径为100nm、200nm、300nm、400nm、500nm或者其他数值。激发波长为300nm、350nm、400nm或者其他数值。发射波长为600nm、650nm、700nm或者其他数值。
51.在其中一个具体示例中，质控线7与检测线6之间的间距为3
‑
8mm。例如，质控线7与检测线6之间的间距为3mm、4mm、5mm、6mm、7mm、8mm或者其他数值。
52.在其中一个具体示例中，包被膜为硝酸纤维素膜4。
53.本发明一实施例还提供了一种时间分辨荧光免疫层析试剂条10的制备方法。
54.本发明的时间分辨荧光免疫层析试剂条10，能利用尿液、唾液、毛发三种基质检测大麻，弥补了单一基质检测窗口有限，三种基质互为补充，减少了因被检测者短暂停吸而出现的漏检。
55.一种时间分辨荧光免疫层析试剂条10的制备方法，包括如下步骤：
56.(1)时间分辨荧光微球标记大麻单克隆抗体的制备：将时间分辨荧光微球加入到偶联缓冲液中，再加入待标记的大麻单克隆抗体进行偶联5
‑
60min，加入封闭液封闭5
‑
60min，16000
‑
20000
×
g条件下离心5
‑
20min，用保存液洗涤重悬，重悬后4℃保存，大麻单克隆抗体加入的含量为：10
‑
100μg大麻单克隆抗体/100ul大麻单克隆抗体。
57.(2)样品垫2制备：将样品预处理液滴加在样品垫2上，烘干，烘干温度为45℃，烘干时间为3
‑
4h。
58.(3)结合垫3制备：通过微球稀释液将步骤(1)得到的时间分辨荧光微球标记的大麻单克隆抗体进行稀释得到抗体稀释液，时间分辨荧光微球的含量为：0.5
‑
1.5ul时间分辨荧光微球/1ml微球稀释液，将抗体稀释液滴加在结合垫3上，烘干，烘干温度为45℃，烘干时间为3
‑
4h。
59.(4)包被膜的制备：将用pbs溶液稀释后的大麻
‑
bsa抗原和羊抗鼠igg抗体分别划线于包被膜上作为检测线6和质控线7，检测线6相较于质控线7靠近于结合垫3，置于37℃保存。检测线6和/或质控线7的包被量为0.5
‑
1μl/cm。
60.(5)将步骤(2)制得的样品垫2、步骤(3)制得的结合垫3以及步骤(4)制得的包被膜
依次顺序粘贴于底板1上，将吸收垫5粘连于底板1上且质控线7靠近于吸收垫5。时间分辨荧光免疫层析试剂条10的宽度为3
‑
4mm。
61.本发明一实施例还提供了一种大麻浓度定量检测方法。
62.一种大麻浓度定量检测方法，包括如下步骤：
63.将的时间分辨荧光免疫层析试剂条10以及待测样品置于室温；
64.开启免疫荧光分析仪，获取待测样品的标准曲线；
65.向时间分辨荧光免疫层析试剂条10中滴加待测样品60
‑
100μl，反应5
‑
10min后，检测将该时间分辨荧光免疫层析试剂条10插入到免疫荧光分析仪中上的检测线6和质控线7的荧光强度，获取t值、c值以及t/c值，通过标准曲线获取待测样品中大麻的浓度。
66.一种试剂盒，包括的时间分辨荧光免疫层析试剂条。
67.本发明一实施例还提供了一种试剂盒。
68.一种试剂盒，包括的时间分辨荧光免疫层析试剂条。
69.相比传统技术，本发明具有如下有益效果：
70.(1)本发明采用的时间分辨荧光微球是以镧系元素(例如铕)填充至纳米级的聚苯乙烯微球中制作而成，与普通荧光相比，具有stokes位移大，荧光寿命长等特点，可以有效排除激发光和非特异性荧光对信号采集的干扰，提高检验的特异性和准确性。
71.(2)本发明制备的时间分辨荧光免疫层析试剂条10能进行定量检测，具有灵敏度高、检测方便、快捷、价格便宜、无需专业人员操作等优势，有利于基层的现场快速检测。
72.(3)本发明制备的时间分辨荧光免疫层析试剂条10能进行尿液、唾液、毛发三种基质中大麻浓度的定量检测，一个试剂条能检测三种基质，弥补了传统试剂条单一基质检测、窗口窄、易漏检的缺陷，能全面客观评价被检测者的滥用情况。
73.实施例1
74.本实施例提供了一种时间分辨荧光免疫层析试剂条10的制备方法。
75.一种时间分辨荧光免疫层析试剂条10的制备方法，包括如下步骤：
76.(1)时间分辨荧光微球标记大麻单克隆抗体的制备：将粒径200nm的时间分辨荧光微球加入到hepes偶联缓冲液中，再加入待标记的大麻单克隆抗体，大麻单克隆抗体与时间分辨荧光微球的比例为(40
‑
100ug/100μl微球)，超声偶联5
‑
30min，加入封闭液进行封闭，16000
‑
20000
×
g条件下离心5
‑
15min，用保存液洗涤重悬，4℃冰箱中保存。
77.(2)样品垫2制备：将样品预处理液滴加在样品垫2上，45℃烘3
‑
4小时，样品预处理液为含0.5％
‑
1.5％nacl和0.1％
‑
0.5％tetronic 1307(表面活性剂s9)的水溶液。
78.(3)结合垫3制备：取含0.5％
‑
2％(w/w)bsa、3
‑
8％(w/w)海藻糖的20mm甘氨酸缓冲液作为微球稀释液，用微球稀释液将步骤(1)得到的时间分辨荧光微球标记的大麻单克隆抗体进行稀释得到抗体稀释液，微球稀释液的体积与步骤(1)中的时间分辨荧光微球的体积比为1ml：(0.9
‑
1.5μl)，将抗体稀释液滴加在结合垫3上，置于45℃烘箱3
‑
4小时。
79.(4)包被膜的制备：将用pbs溶液稀释后的大麻
‑
bsa抗原和羊抗鼠igg抗体在室温且湿度30％
‑
60％的环境中平衡后，划线于硝酸纤维素膜4上，分别作为检测线6和质控线7，检测线6和质控线7的包被量均为0.5
‑
1μl/cm，检测线6和质控线7间距3
‑
6mm，检测线6靠近于结合垫3，置于37℃保存。
80.(5)将步骤(2)制得的样品垫2、步骤(3)制得的结合垫3以及步骤(4)制得的包被膜
依次顺序粘贴于底板1上，将吸收垫5粘连于底板1上且质控线7靠近于吸收垫5，切割为宽度3
‑
4mm的时间分辨荧光免疫层析试剂条10，将时间分辨荧光免疫层析试剂条10装入试剂卡中，封袋保存。
81.实施例2
82.本实施例提供了一种大麻浓度定量检测方法。
83.一种大麻浓度定量检测方法，包括如下步骤：
84.(1)将实施例1制备得到的时间分辨荧光免疫层析试剂条10和待测样品置于室温中，待恢复到室温后使用。
85.(2)开启免疫荧光分析仪，插入待测样品相应的id卡，读取标准曲线；
86.(3)向时间分辨荧光免疫层析试剂条10的加样孔中滴加待测样品80
‑
100μl，反应5
‑
10min后，将时间分辨荧光免疫层析试剂条10插入到免疫荧光分析仪中，读取检测线6的荧光强度(t值)和质控线7的荧光强度(c值)，获取t值、c值以及t/c值，通过标准曲线可获取待测样品中大麻的浓度，并进行判断。
87.实施例3
88.本实施例提供了一种尿液基质中大麻浓度定量检测方法。
89.一种尿液基质的大麻浓度定量检测方法，包括如下步骤：
90.(1)将实施例1制备得到的时间分辨荧光免疫层析试剂条10置于室温中，待恢复到室温后使用；用空白的人工尿液基质稀释四氢大麻酸标准品，浓度分别为：0ng/ml、0.5ng/ml、1ng/ml、2ng/ml、5ng/ml、10ng/ml、25ng/ml、50ng/ml、75ng/ml，得到九个浓度的标准品尿液基质，每个浓度的标准品尿液基质设三个重复，将所有标准品尿液基质置于室温中，待恢复到室温后使用。
91.(2)绘制标准曲线：开启免疫荧光分析仪；取每一份标准品尿液基质分别加到一个时间分辨荧光免疫层析试剂条10的加样孔中，反应10min后，将每个时间分辨荧光免疫层析试剂条10分别插入到免疫荧光分析仪中，读取检测线6的荧光强度(t值)和质控线7的荧光强度(c值)，获取t值、c值以及t/c值，以标准品浓度为横坐标，t/c值为纵坐标，建立方程并拟合成标准曲线，具体数值如表1所示。
92.表1
[0093][0094][0095]
根据表1的数据，以尿液基质中标准品浓度为横坐标，以t/c值为纵坐标，绘制标准曲线，标准曲线如图2所示(图2中纵坐标logit(y)表示的为仪器检测信号值取自然对数，纵
坐标ln(x)表示的为检测的毒品浓度取自然对数)，该标准曲线线性良好(r2＝0.9903)，可以通过该标准曲线对尿液基质中大麻进行定量检测。由表1数据可知，尿液基质检测大麻的灵敏度可达0.5ng/ml，各浓度点的cv基本在15％附近。
[0096]
(3)模拟样本的检测：利用空白的人工尿液基质，加入大麻标准品使其浓度为10ng/ml，将上述制备的溶液作为待测样本，加到一个时间分辨荧光免疫层析试剂条10的加样孔中，反应10min后，将每个时间分辨荧光免疫层析试剂条10分别插入到免疫荧光分析仪中，读取检测线6的荧光强度(t值)和质控线7的荧光强度(c值)，获取t/c值，分别为2.910；3.035；2.963；2.816；3.249；2.979，计算t/c值的平均值为2.992，将该值代入到标准曲线中，计算得到浓度为11.59ng/ml，回收率为115.91％(回收率＝检测样本浓度/添加样本浓度
×
100％)。
[0097]
实施例4
[0098]
本实施例提供了一种唾液基质中大麻浓度定量检测方法。
[0099]
一种唾液基质的大麻浓度定量检测方法，包括如下步骤：
[0100]
(1)将实施例1制备得到的时间分辨荧光免疫层析试剂条10置于室温中，待恢复到室温后使用；用空白的人工唾液基质稀释四氢大麻酸标准品，浓度分别为：0ng/ml、0.1ng/ml、0.5ng/ml、1ng/ml、2ng/ml、5ng/ml、10ng/ml、50ng/ml，得到八个浓度的标准品唾液基质，每个浓度的标准品唾液基质设三个重复，将所有标准品唾液基质置于室温中，待恢复到室温后使用。
[0101]
(2)绘制标准曲线：开启免疫荧光分析仪；取每一份标准品唾液基质分别加到一个时间分辨荧光免疫层析试剂条10的加样孔中，反应10min后，将每个时间分辨荧光免疫层析试剂条10分别插入到免疫荧光分析仪中，读取检测线6的荧光强度(t值)和质控线7的荧光强度(c值)，获取t值、c值以及t/c值，以标准品浓度为横坐标，t/c值为纵坐标，建立方程并拟合成标准曲线，具体数值如表2所示。
[0102]
表2
[0103][0104]
根据表2的数据，以唾液基质中的标准品浓度为横坐标，以t/c值为纵坐标，绘制标准曲线，标准曲线如图3所示(图3中纵坐标logit(y)表示的为仪器检测信号值取自然对数，纵坐标ln(x)表示的为检测的毒品浓度取自然对数)，该标准曲线线性良好(r2＝0.9939)，可以通过该曲线对唾液基质中大麻进行定量检测。由表2数据可知，唾液基质检测大麻的灵敏度可达0.1ng/ml，各浓度点的cv基本在15％附近。
[0105]
(3)模拟样本的检测：利用空白的人工唾液基质，加入大麻标准品使其浓度为5ng/
ml。将上述制备的溶液作为待测样本，加到一个时间分辨荧光免疫层析试剂条10的加样孔中，反应10min后，将每个时间分辨荧光免疫层析试剂条10分别插入到免疫荧光分析仪中，读取检测线6的荧光强度(t值)和质控线7的荧光强度(c值)，获取t/c值，分别为3.449；3.386；3.714；4.228；3.274；4.109，计算t/c值的平均值为3.693，将该值代入到标准曲线中，计算得到浓度为4.73ng/ml，回收率为94.63％(回收率＝检测样本浓度/添加样本浓度
×
100％)。
[0106]
实施例5
[0107]
本实施例提供了一种毛发基质中大麻浓度定量检测方法。
[0108]
一种毛发基质的大麻浓度定量检测方法，包括如下步骤：
[0109]
(1)将实施例1制备得到的时间分辨荧光免疫层析试剂条10置于室温中，待恢复到室温后使用；用空白的毛发基质稀释四氢大麻酸标准品，浓度分别为：0ng/ml、0.1ng/ml、0.5ng/ml、1ng/ml、2ng/ml、10ng/ml、50ng/ml，得到六个浓度的标准品毛发基质，每个浓度的标准品毛发基质设三个重复，将所有标准品毛发基质置于室温中，待恢复到室温后使用。
[0110]
(2)绘制标准曲线：开启免疫荧光分析仪；取每一份标准品毛发基质分别加到一个时间分辨荧光免疫层析试剂条10的加样孔中，反应10min后，将每个时间分辨荧光免疫层析试剂条10分别插入到免疫荧光分析仪中，读取检测线6的荧光强度(t值)和质控线7的荧光强度(c值)，获取t值、c值以及t/c值，以标准品浓度为横坐标，t/c值为纵坐标，建立方程并拟合成标准曲线，具体数值如表3所示。
[0111]
表3
[0112][0113]
根据表3的数据，以毛发基质中的标准品浓度为横坐标，以t/c值为纵坐标，绘制标准曲线，标准曲线如图4所示(图4中纵坐标logit(y)表示的为仪器检测信号值取自然对数，纵坐标ln(x)表示的为检测的毒品浓度取自然对数)，该标准曲线线性良好(r2＝0.9898)，可以通过该曲线对毛发基质中大麻进行定量检测。由表3数据可知，毛发基质检测大麻的灵敏度可达0.1ng/ml，各浓度点的cv基本在15％附近。
[0114]
(3)模拟样本的检测：利用空白的毛发基质处理液，加入大麻标准品使其浓度为2ng/ml。将上述制备的溶液作为待测样本，加到一个时间分辨荧光免疫层析试剂条10的加样孔中，反应10min后，将每个时间分辨荧光免疫层析试剂条10分别插入到免疫荧光分析仪中，读取检测线6的荧光强度(t值)和质控线7的荧光强度(c值)，获取t/c值，分别为4.784；4.835；5.175；5.448；5.551；5.414，计算t/c值的平均值为5.201，将该值代入到标准曲线中，计算得到浓度为2.692ng/ml，回收率为134.62％(回收率＝检测样本浓度/添加样本浓
度
×
100％)。
[0115]
以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。
[0116]
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。