一种2,3-二甲基溴苯有关物质的检测方法与流程

本发明涉及分析化学领域，尤其涉及一种2,3-二甲基溴苯有关物质的检测方法。
背景技术：
：盐酸右美托咪定是一种高选择性的α2-肾上腺素受体激动剂，具有镇静催眠、抗焦虑、镇痛、阻滞交感神经的作用，其α2/α1选择性高达45000。盐酸右美托咪定为α2-肾上腺素受体激动剂美托咪定的右旋异构体，与美托咪定相比，对中枢α2-肾上腺素受体激动的选择性更强，半衰期短，疗效佳且副作用小，与其他镇静药物相比具有独特优势，临床上适用于重症监护治疗期间开始插管和使用呼吸机病人的镇静。2,3-二甲基溴苯是盐酸右美托咪定合成中的重要起始物料，受目前生产技术和控制技术水平的限制，在2,3-二甲基溴苯实际生产的过程中，不可避免的会出现有关物质，如邻二甲苯、3-硝基邻二甲苯、2,3-二甲基苯胺、4-溴-1,2-二甲苯、2-溴-1,4-二甲苯、2,6-二甲基溴苯、2,4-二甲基溴苯和5-溴间二甲苯，这些有关物质与2,3-二甲基溴苯一起参与到后续的盐酸右美托咪定的合成中，会严重影响药物的质量和患者的健康。然而，目前有关2,3-二甲基溴苯的质量评价方法并无相关报道，为了对2,3-二甲基溴苯中有关物质的控制，保证2,3-二甲基溴苯作为起始物料合成的盐酸右美托咪定的质量，进而确保患者的用药安全，需要发明一种合理的检测方法，以有效测定2,3-二甲基溴苯中有关物质的含量。技术实现要素：针对目前没有2,3-二甲基溴苯有关物质含量检测的方法，本发明提供一种2,3-二甲基溴苯有关物质包括邻二甲苯、3-硝基邻二甲苯、2,3-二甲基苯胺、4-溴-1,2-二甲苯、2-溴-1,4-二甲苯、2,6-二甲基溴苯、2,4-二甲基溴苯和5-溴间二甲苯的八种物质含量的检测方法，从而提高以2,3-二甲基溴苯作为起始物料合成的盐酸右美托咪定的质量稳定性和临床用药安全性。为达到上述发明目的，本发明实施例采用了如下的技术方案：一种2,3-二甲基溴苯有关物质的检测方法，具体包括以下步骤：取供试品2,3-二甲基溴苯，加乙腈溶解，制成供试品溶液；取2,3-二甲基溴苯有关物质的对照品，加乙腈溶解，制成对照品溶液；采用气相色谱法检测所述供试品溶液和对照品溶液；所述有关物质包括邻二甲苯、3-硝基邻二甲苯、2,3-二甲基苯胺、4-溴-1,2-二甲苯、2-溴-1,4-二甲苯、2,6-二甲基溴苯、2,4-二甲基溴苯和5-溴间二甲苯。所述气相色谱法的色谱条件包括：色谱柱为熔融石英柱毛细管色谱柱；气相色谱的升温程序为：起始温度50～70℃，以5～15℃/min的速率升温至90～110℃，维持15～25min，再以5～15℃/min的速率升温至180℃～220℃，维持5～10min；进样口温度为230～270℃；载气为氮气；检测器为氢火焰离子化检测器。相对于现有技术，本发明提供的一种2,3-二甲基溴苯有关物质的检测方法，具有以下优势：本发明采用气相色谱法对2,3-二甲基溴苯进行检测，可以同时实现对邻二甲苯、3-硝基邻二甲苯、2,3-二甲基苯胺、4-溴-1,2-二甲苯、2-溴-1,4-二甲苯、2,6-二甲基溴苯、2,4-二甲基溴苯和5-溴间二甲苯上述有关物质的准确检测，从而有效控制2,3-二甲基溴苯的质量。本发明提供的检测方法，检测灵敏度高、检测限低，检测时间短，显著提高了检测的工作效率，同时操作简单，容易控制，检测成本低，检测结果准确、可靠，为监控以2,3-二甲基溴苯作为起始物料合成的盐酸右美托咪定的质量稳定性和临床用药安全性提供了保证。优选地，所述供试品溶液浓度为8～12mg/ml。优选地，所述对照品溶液的浓度为10～100μg/ml。优选地，气相色谱中，分流比为5～20：1。优选地，所述毛细管色谱柱的型号为astecchiraldexb-da。优选地，所述毛细管色谱柱的柱长15～60m，内径为0.25～0.53mm。优选地，所述毛细管色谱柱的固定相涂层液膜厚度为0.10～0.25μm。优选地，所述气相色谱的色谱条件还包括进样量为0.9～1.1μl。优选地，所述气相色谱-氢火焰离子化检测器的温度为200～300℃。附图说明图1为实施例1时空白溶剂(乙腈)的气相色谱图；图2为实施例1时对照品溶液的气相色谱图；图3为实施例1时加标供试品溶液的气相色谱图；以上附图中，色谱峰1为邻二甲苯，色谱峰2为5-溴间二甲苯，色谱峰3为2-溴-1,4-二甲苯，色谱峰4为2,6-二甲基溴苯，色谱峰5为2,4-二甲基溴苯，色谱峰6为4-溴-1,2-二甲苯，色谱峰7为2,3-二甲基苯胺，色谱峰8为3-硝基邻二甲苯；色谱峰9为2,3-二甲基溴苯。具体实施方式为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。实施例1：一种2,3-二甲基溴苯有关物质的检测方法，具体包括以下步骤：取乙腈作为空白溶剂；取2,3-二甲基溴苯粗品适量，加入乙腈溶解，制成10mg/ml的2,3-二甲基溴苯溶液，作为供试品溶液；另取适量邻二甲苯、3-硝基邻二甲苯、2,3-二甲基苯胺、4-溴-1,2-二甲苯、2-溴-1,4-二甲苯、2,6-二甲基溴苯、2,4-二甲基溴苯和5-溴间二甲苯，加入乙腈溶解，制成每1ml含邻二甲苯20μg、3-硝基邻二甲苯10μg、2,3-二甲基苯胺10μg、4-溴-1,2-二甲苯100μg、2-溴-1,4-二甲苯30μg、2,6-二甲基溴苯30μg、2,4-二甲基溴苯30μg和5-溴间二甲苯20μg的溶液，作为对照品溶液；气相色谱法的色谱条件为：色谱仪：日本岛津gc2030；色谱柱：2,6-二-o-戊基-3-甲氧基衍生物改性的β-环糊精为固定液的毛细管色谱柱；色谱柱型号：astecchiraldexb-da；色谱柱规格：30m*0.25mm*0.12μm；检测器：氢火焰离子化(fid)检测器；检测器温度：280℃；进样口温度：250℃；载气：氮气；分流比：10:1；进样体积：1μl；升温程序：起始温度50～70℃，以5～15℃/min的速率升温至90～110℃，维持15～25min，再以5～15℃/min的速率升温至180℃～220℃，维持5～10min。将上述2,3-二甲基溴苯有关物质的检测方法的色谱条件进行方法学验证：1、专属性考察取上述空白溶剂和上述对照品溶液；按照上述检测条件进行分析，记录色谱图。空白溶剂色谱图见附图1；对照品溶液的色谱图见附图2；从附图可知，在此色谱条件下，溶剂和样品中其他杂质不干扰检测，2,3-二甲基溴苯有关物质的分离度符合要求，该方法专属性良好。2、检测限和定量限考察精密称取2,3-二甲基溴苯有关物质的各成分对照品溶液，并按上述色谱条件进行检测，记录色谱图，峰高为基线噪音的10倍时为定量限，峰高为基线噪音的3倍时为检测限，具体检测结果见下表。表1定量限和检测限试验结果从表中数据可知本发明提供的检测方法检测2,3-二甲基溴苯中有关物质的检测限和定量限低，对2,3-二甲基溴苯中有关物质的检测具有高灵敏度的特点。表2定量限重复性试验结果从表中数据可知本发明提供的检测方法测定的2,3-二甲基溴苯有关物质的相对标准偏差(rsd)范围为1.51～8.66％之间，显示定量限具有良好的重复性。3、线性考察精密称取2,3-二甲基溴苯，配制11个浓度级别的标准溶液；另精密称取2,3-二甲基溴苯有关物质的各成分对照品，分别配制6个浓度级别的标准溶液，将上述标准溶液按照上述色谱条件进样，测定峰面积，以标准溶液中组分的浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准工作曲线并建立线性方程。表3各成分的线性试验结果从表中数据可知本发明提供的检测方法线性范围宽，2,3-二甲基溴苯及其有关物质浓度与气相色谱所测出的峰面积具有很好的线性关系。4、回收率考察精密称取供试品9份和2,3-二甲基溴苯有关物质各成分对照品，在供试品中分别加入低、中、高三个不同水平加入量的各成分对照品，制成加标供试品溶液，并按照上述色谱条件下检测相应的8种对照品的原含量及加标供试品溶液中的测定量，平行测定3次，根据测定结果以及对照品添加量，计算检测方法的回收率，图3为中水平的加标供试品溶液的色谱图。表4加标回收率检测结果从表中数据可知本发明提供的检测方法检测2,3-二甲基溴苯有关物质在3种加标水平下，加标回收率为95.38％～111.38％，表明本方法的回收率良好；相对标准偏差(rsd)为0.79％～3.96％，表明本方法的重复性良好。5、重复性考察分别取不同批次的2,3-二甲基溴苯粗品，按上述方法制成供试品溶液，并按照上述色谱条件下进样测定，计算检测2,3-二甲基溴苯中各有关物质含量的重复性。表5重复性结果成分123456平均值rsd％邻二甲苯0.0450.0450.0460.0460.0460.0460.0460.705-溴间二甲苯未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出-2-溴-1,4-二甲苯0.0290.0310.0310.0310.0320.0310.0313.382,6-二甲基溴苯0.00830.00890.0100.0100.0100.0100.0107.552,4-二甲基溴苯0.0770.0780.0790.0790.0770.0790.0781.184-溴-1,2-二甲苯0.320.320.320.320.320.330.321.112,3-二甲基苯胺未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出-3-硝基邻二甲苯0.0200.0200.0200.0200.0200.0200.0201.16纯度％99.33799.33999.33499.33499.33899.33399.3360.002最大单杂％0.0980.0970.0980.1000.0980.0990.0981.05总杂0.6630.6610.6660.6660.6620.6670.6640.37从表中数据可知本发明提供的检测方法检测2,3-二甲基溴苯有关物质，相对标准偏差(rsd)为0.37％～3.38％，表明本方法的重复性良好。6、稳定性考察精密称取2,3-二甲基溴苯有关物质的各成分对照品，按上述对照品溶液的配制方法制备对照品溶液，分别于0h、2h、4h、8h、12h、24h、48h下，在上述色谱条件下进行检测，溶液的稳定性结果见下表。表6溶液稳定性结果成分0小时2小时4小时8小时12小时24小时48小时rsd％邻二甲苯365434102539959386624166934353342668.045-溴间二甲苯239322592525260250362654722713232515.732-溴-1,4-二甲苯341323683636420354623775632148325726.162,6-二甲基溴苯318873550534091326733503830009304066.632,4-二甲基溴苯313623377933431327843464329618299436.054-溴-1,2-二甲苯1119391219691192901164981237091054191076066.142,3-二甲基苯胺1001010864107621099411572972796706.863-硝基邻二甲苯145281571115541149791592413666138456.07从表中可知本方法提供的检测方法检测2,3-二甲基溴苯有关物质，在0h、2h、4h、8h、12h、24h、48h下的相对标准偏差(rsd)为5.73～8.04％，表明本方法的稳定性良好。7、耐用性考察精密称取2,3-二甲基溴苯有关物质的各成分对照品，按上述对照品溶液的配制方法制备对照品溶液，另乙腈作为空白溶剂，分别改变进样口温度、起始温度、升温速率和检测器温度进行检测，其他检测条件不变。耐用性结果见下表。表7不同进样口温度分离度成分进样口250℃进样口245℃进样口255℃乙腈n/an/an/a邻二甲苯12.88813.52118.3845-溴间二甲苯80.14081.33680.3702-溴-1,4-二甲苯7.5737.7477.5952,6-二甲基溴苯1.1981.2111.1872,4-二甲基溴苯3.4803.4053.3964-溴-1,2-二甲苯24.41323.97723.5732,3-二甲基苯胺37.27937.17437.0253-硝基邻二甲苯12.06011.97611.975表8不同初始温度分离度表9不同升温速率分离度成分升温速率一10℃/min升温速率一9℃/min升温速率一11℃/min乙腈n/an/an/a邻二甲苯12.88813.15613.2615-溴间二甲苯80.14080.58680.6012-溴-1,4-二甲苯7.5737.5487.6692,6-二甲基溴苯1.1981.1981.1922,4-二甲基溴苯3.4803.3873.4054-溴-1,2-二甲苯24.41323.89123.4542,3-二甲基苯胺37.27936.81437.2893-硝基邻二甲苯12.06012.07811.921表10不同升温速率分离度成分升温速率二10℃/min升温速率二9℃/min升温速率二11℃/min乙腈n/an/an/a邻二甲苯12.88818.28218.2665-溴间二甲苯80.14082.00681.7192-溴-1,4-二甲苯7.5737.6937.6372,6-二甲基溴苯1.1981.1851.1742,4-二甲基溴苯3.4803.3773.4014-溴-1,2-二甲苯24.41323.49523.6382,3-二甲基苯胺37.27937.50736.3463-硝基邻二甲苯12.06012.17711.728表11不同检测器温度分离度从上述表中数据可知，通过改变进样口温度、起始温度、升温速率和检测器温度以上因素检测2,3-二甲基溴苯有关物质，分离度均大于1.2，符合有关物质研究杂质分离度的要求，表明本方法的耐用性良好。从图1-3及上述7个方面的方法学考察可见，本发明提供的检测方法能快速有效地分离测定2,3-二甲基溴苯的有关物质，从而达到对2,3-二甲基溴苯纯度和有关物质含量的有效检测。以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换或改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。当前第1页12