硫酸特布他林中有关物质的检测方法与流程

本发明涉及一种硫酸特布他林中有关物质的检测方法。
背景技术：
：硫酸特布他林，化学名称为(±)-α-[(叔丁氨基)甲基]-3,5-二羟基苯甲醇硫酸盐(2∶1)，结构式如下，是一种肾上腺素能激动剂，可选择性激动β2-受体，舒张支气管平滑肌、抑制内源性致痉挛物质的释放及内源性介质引起的水肿，提高支气管粘膜纤毛上皮廓清能力，也可舒张子宫平滑肌。主要用于支气管哮喘、慢性支气管炎和其它伴有支气管痉挛的肺部疾病，也可用于预防早产和胎儿窒息，具有选择性高、副作用少等特点，在国内外已得到广泛应用。该品种目前在中国、美国、日本、欧洲、英国药典等均已收载。目前本品制剂主要有硫酸特布他林片、硫酸特布他林吸入气雾剂、硫酸特布他林雾化液。硫酸特布他林结构式硫酸特布他林收载于usp、ep、bp、jp及chp，其中关于有关物质的控制方法基本一致：系统采用主成分与杂质c的混合溶液考察分离度，流动相体系采用含高浓度己烷磺酸钠的甲酸铵缓冲溶液与甲醇按77:23比例进行等度洗脱。然而，在应用过程中发现，药典方法存在的缺陷为：等度洗脱的方式使得强极性杂质无保留，弱极性杂质不能被完全洗脱。为兼顾各杂质极性，需使用梯度洗脱的方式，在洗脱过程中逐渐增加有机相比例，但是随着有机相比例的增加，流动相中高浓度的甲酸铵与己烷磺酸钠会盐析，对色谱柱及仪器造成损害。其他一些非药典方法中，为了提高分离效果，也会使用一些损害色谱柱的溶剂，例如三乙胺。技术实现要素：发明人研究表明：在硫酸特布他林合成工艺中可能产生极性差异很大的工艺杂质，包括但不限于：等度洗脱的方式使得强极性杂质无保留，弱极性杂质不能被完全洗脱。为了较好地实现强极性杂质的保留及弱极性杂质的有效洗脱，同时还能够降低溶剂对色谱设施的损害，本发明提供一种不含有离子对试剂己烷磺酸钠以及三乙胺的液相色谱检测方法。具体的，本发明提供了一种用于检测硫酸特布他林中有关物质的方法，所述有关物质至少包括tbs4-z5：它采用高效液相色谱进行检测，包括如下内容：色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶柱流动相：由流动相a和流动相b组成，所述流动相a为甲酸铵缓冲液，用三氟乙酸调节ph值至2.5-3.5；流动相b为甲醇或/和乙腈；其洗脱程序的0-50分钟梯度如下：本发明所述色谱柱尺寸可以使用常规尺寸，本发明所述色谱柱长度为50～250mm，内径为2.1～4.6mm，填料的粒径为3～5μm。例如，长度为250mm，内径4.6mm，粒径5μm。其中，所述流动相a是甲酸铵缓冲液，所述缓冲液中，甲酸铵浓度为0.04mol/l～0.06mol/l，优选为0.05mol/l。取适当浓度的甲酸铵溶液，三氟乙酸调节ph制得。ph值为2.5～3.5，进一步可以选择2.8～3.2，例如3.0。所述流动相b主要包括甲醇或/和乙腈。可以主要是甲醇。本发明所述柱温、流速、检测波长等参数可以在常见范围内选择。检测波长选自210～400nm，具体为276nm；流动相流速选自0.8ml/min～1.2ml/min，具体为1.0ml/min；柱温选自38～42℃，具体为40℃。本发明检测方法中，还包括其他常规步骤：(1)空白溶剂、系统适用性溶液、杂质对照品溶液的配制；(2)供试品溶液、对照溶液、灵敏度溶液的配制；(3)供试品的检测；等。实验结果表明，采用本发明方法进行检测，虽然没有使用离子对试剂己烷磺酸钠以及三乙胺，但经过特定的流动相条件，仍然在保证主成分及各杂质分离度良好的情况下，强极性杂质tbs4-z5得到了有效保留，且其他多个杂质被成功洗脱，且分离度良好，有效避免了现有技术中溶剂对色谱设施的损害。基于本发明对于极性差异较大的化合物的良好保留和分离效果，本发明还提供了一种同时检测如下两种化合物的方法，所述两种化合物结构式为：它采用高效液相色谱进行检测，包括如下内容：色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶柱流动相：由流动相a和流动相b组成，所述流动相a为甲酸铵缓冲液，用三氟乙酸调节ph值至2.5-3.5；流动相b为甲醇或/和乙腈；其洗脱程序的0-50分钟梯度如下：根据该方法，只要供试品中含有tbs4-z5、tbs3两种化合物，采用本发明方法都能够将tbs4-z5与tbs3保留和分离。附图说明图1硫酸特布他林有关物质验证-系统适用性，如图1所示，在保证主成分及各杂质分离度良好的情况下，杂质tbs4-z5有效保留，且分离度良好图2对比例1色谱图图3对比例2色谱图具体实施方式本发明的实施例中所使用的甲醇均为色谱纯，其余试剂均为分析纯，除非另有说明。1、仪器与试剂仪器：thermou3000液相色谱仪(带dad检测器)；agilent1260ii液相色谱仪(带dad检测器)；百万分之一电子天平(mettlertoledoxpr10)；十万分之一电子天平(xs205du、me204)；ph计(梅特勒fe28)试剂：甲酸铵、三氟乙酸、甲醇、水2、对照品硫酸特布他林对照品(纯度99.8％，中国食品药品检定研究院)tbs3、tbs4-z5对照品均由成都倍特药业有限公司提供及标化，纯度分别为98.5％、99.2％。实施例1色谱条件：色谱柱：ymcpackods-aq，4.6mm×250mm，5μm流动相a：0.05mol/l甲酸铵缓冲液(用三氟乙酸调节ph值至3.0)；流动相b：甲醇流速：1.0ml/min；进样量：20μl；柱温：40℃；检测波长：276nm；梯度洗脱程序：注：需在主动阀前连接鬼峰捕集柱(welchghost-buster4.6*50mm或效能相当的鬼峰捕集柱1系统适用性考察分别精密称取硫酸特布他林及各杂质对照品适量，加稀释剂[甲醇-水(20:80)]溶解并稀释制成镁1ml含硫酸特布他林浓度为1mg，tbs4-z5、tbs3浓度分别为1.5μg的混合溶液，在上述色谱条件下hplc分析，系统适用性考察结果见表1，如图1。表1有关物质专属性检测结果杂质名称rt(min)分离度tbs4-z55.72033.9特布他林(主峰)26.75750.5tbs348.347n/a由表1和图1可知，在本发明所述方法下，强极性杂质tbs4-z5在色谱柱上有效保留，弱极性杂质tbs3有效洗脱，系统适用性均满足要求。2降解专属性按表2制备各降解溶液。表2硫酸特布他林降解溶液制备方法在各降解条件下，空白溶剂等均不干扰本品有关物质的检测。主峰峰纯度均大于990，杂质与主成分间最小分离度为3.9，降解回收率在99.00％～103.08％之间，均符合要求。说明本发明所述方法能够满足各降解条件下有关物质的监控。综合1系统适用性及2降解专属性可知，本发明所述硫酸特布他林有关物质检测方法专属性良好，为各杂质的准确定量分析奠定了基础。3灵敏度确认精密称取各杂质对照品适量，加稀释剂溶解并不断稀释至s/n大于10，即为各杂质的定量限。经实验表明，各杂质在约0.02％以上均可被准确定量，定量限重复性良好，说明方法灵敏度较高。4耐用性对本发明方法在流速变化0.1ml/min，柱温变化2℃，缓冲溶液ph变化0.2，在换用不同仪器及色谱柱的情况下，通过对加标供试品溶液有关物质的检测进行耐用性考察，耐用性结果良好。具体结果见表3。表3硫酸特布他林检测方法耐用性考察结果(％)采用本发明的检测方法既能检测硫酸特布他林的降解杂质，又能检测硫酸特布他林合成过程中带来的工艺杂质；能够使硫酸特布他林有关物质色谱峰分开，且具有良好的色谱峰分离度。对比例1：usp43有关物质分析方法色谱条件色谱柱：资生堂capcellpakc18(4.6×150mm，5μm)；流动相：离子对溶液与甲醇按77∶23混合，过滤，脱气。[离子对溶液：称取甲酸铵3.15g，置1000ml量瓶中，加水900ml使溶解，用甲酸调节ph值至3.0，加入己烷磺酸钠5.49g，用水稀释至刻度，摇匀]；柱温：30℃；流速：1.0ml/min；检测波长：276nm；进样体积：20μl。hplc分析：在上述色谱条件下进样系统适用性溶液。结果：如图2所示，杂质tbs4-z5无保留，tbs3未能洗脱分离。对比例2：将药典等度洗脱更改为梯度洗脱色谱条件：色谱柱：thermoscientifichypersilgoldc18，4.6*100mm，3μm流动相a：ph3.0缓冲液(取己烷磺酸钠4.23g与甲酸铵3.15g，加水900ml使溶解，用10％磷酸调ph至3.0，加水使成4000ml，即得。)流动相b：甲醇检测波长：276nm；柱温：45℃；流速：1.0ml/min；进样量：20μl梯度洗脱程序：结果：如图3所示，杂质tbs4-z5，tbs3未能洗脱分离。当前第1页12